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编号:10240549
头颈部肿瘤AgNOR定量研究的现状
http://www.100md.com 《山东大学耳鼻喉眼学报》 2000年第4期
     作者:宋西成 张庆泉 栾信庸

    单位:宋西成(青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉科,264000);张庆泉(青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉科,264000);栾信庸(青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉科,264000)

    关键词:头颈部肿瘤;核仁组成区;嗜银蛋白;综述文献

    山东医大基础医学院学报000422 摘要 核仁组成区相关嗜银蛋 白(argyrophilic nucleolar orgnizer regions proteins,AgNORs)计数是80年代发现和应 用的一种定量病理学及分子生物学指标。因方便简捷且能较灵敏地反映细胞的增殖活性 ,故受到学者们的普遍重视。现将近年来AgNOR在临床特别是头颈咽喉肿瘤中的研究进展简要 综述如下。

    中图分类号 R 739.91 文献标识码:A
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    文章编号 1008-8202(2000)04-0247-02

    1 AgNOR的化学本质

    AgNOR是与核仁组成区相关嗜银蛋白的简称, 其化学本质可能是RNA聚 合酶Ⅰ的亚单位,抑或是C23蛋白质及其他蛋白质。在人类染色体中,D组的第13、14 、15对染色体短臂上有明显的次缢痕,该处的染色较浅,Heitzt称此为核仁组成区(NOR),表示 与核仁的形成有关,其中包含核糖体基因(rDNA),通过其转录形成rRNA。AgNOR起维持rDNA 链伸展的作用,对核糖体的形成及细胞内蛋白质合成至关重要。研 究AgNOR的变化可为研究细胞的增生、分化的基因调控提供信息,AgNOR数量增多,提示细胞增 生活跃。NOR具有嗜银性,可用银染的方法显示,细胞学研究证明,银既不与rDNA也不与rRNA 结合,这种蛋白就是AgNOR。因 它具有嗜银性,结果能在光学水平上显示出来,可以通过特殊染色推测及反映rDNA转录活动水 平,染色体组中NOR染色体的数量,细胞的倍体数所处细胞周期的阶段。
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    2 方 法

    2.1 检测方法

    2.2.1 切片法 1986年Ploton改进染色方法后用 于石蜡或塑料包埋制作的组织切片,目前此方法仍应用广泛,即活检或手术标本蜡块。

    2.1 .2 印片法 Boldy[1]等报道了印片法,即取活检或新鲜组织印片,通过对照表明 ,同一组织无论良恶性,印片法的AgNOR均值均大于切片法。邝国乾[2]亦有类似 报道。此法较切片法简单,良恶性差异也显著,对缺乏切片设备的基层单位有推广价值。

    2 .1.3 涂片法 刘东利[3]等通过淋巴结穿刺涂片取得了良好的效果。杨代兴等 [4]通过对临床诊断为鼻咽癌的208例患者分别行鼻咽脱落细胞病理活 检,组织印片,结果发现活检准确率为85.7%,组织印片为88.9%,涂片HE染色63.4%,涂片AgN OR为90.5%,以脱落细胞涂片AgNOR准确率最高,此法更简便快捷。
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    2.2 染色方法 AgN OR的嗜银染色方法首先是由Goodpasture和Bloom报道的,他们用氨化的硝酸银液染细胞分裂 中期染色体上的NOR,此方法较复杂且显影不稳定,染色不均匀,只适用于制备染色体标本。Ku roda报道,Howell用明胶蚁酸溶液作为保护性显影液发明了改良的一步染色法[5], 使染色更方便清晰。1986年,Ploton进一步改进为常温20℃染色,且可用于石蜡切片的染色, 从而更简便快捷。目前,后两种方法国内外仍在沿用,并在不断改进。董敬朋[6]等 作过详细报道,具体方法如下:配制染色液,先配储存液(A液):将2g明胶用蒸馏水加热溶化至5 0ml,然后加入2%甲酸水溶液50ml,混匀后盖封,置室温备用。B液:配50%水液性硝酸银溶液( 去离子水配制),避光密封,置冰箱可保存1年,染片时将A、B两液按1:2混匀成染色工作液。 取材用10%福尔马林固定后,常规石蜡切片,厚约3~4μm,细胞学涂片则用甲醇醋酸固定。常 规石蜡切片脱脂蒸溜水洗,滴去离子水浸洗约5min,揩干,滴加工作液,室温下避光染色30~6 0min,在显微镜下控制,以细胞核呈淡黄色,AgNOR颗粒呈棕黑色或肉眼见组织呈淡棕色,即可 用去离子水冲洗,以终止染色。梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
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    2.3 计数方 法及颗粒形态 油镜下选定染色良好的区域,计数100个细胞核内的AgNOR颗粒总数,再换算成 每个细胞核内的平均数。为了克服主观因素对计数的影响,高冬玲[7]等采用计算 机图象分析系统对被测细胞的核面积、AgNOR颗料面积、颗粒的形态因子、颗粒数、颗粒面 积与核面积之比等有关参数进行了测定研究。田道法[8] 等采用显微光度术进行检测,使其更客观合理。颗粒可呈两种形态,一种呈团块状,其中含有 数个小的银染颗粒,相当于核仁本身(即主核仁)中的AgNOR;另一种呈散在于细胞核内较小的 银染颗粒,称卫星颗粒或卫星核仁,主核仁内的单个银染颗粒和散在卫星颗粒均需计数。

    3 临床应用

    3.1 良恶性肿瘤的鉴别诊断及癌前病变的监测 文献 报 道乳腺恶性肿瘤的AgNOR计数高于良性,且颈部高度恶性淋巴瘤较低度恶性含量高。高冬玲 [7]等研究声带息肉、喉乳头状瘤及喉癌组织AgNOR计数逐渐增高。熊新高[1 1]等研究喉癌、乳头状瘤及喉正常粘膜间AgNOR计数差异有显著性,以上研究为头颈部恶 性肿瘤癌前病变的检测提供了理论依据。
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    3.2 肿瘤的分期分级 丁彦青[9]等 的研究表明,星形细胞瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级之间AgNOR颗粒数有显著差异,Krecicki[1 0]等认为,AgNOR计数与肿瘤部位、临床分期、淋巴结转移等无明显相关性,但和组织 学分级显著相关。Yamamoto[12]等的研究得出了类似的结论,即组织学恶性程度 越高,AgNOR含量越高。

    3.3 肿瘤的预后 杨桂琴[13]等研究喉癌的发展过程 发现在病程发展的不同阶段定量观察,AgNOR计数有递增现象,提示AgNOR计数用以估计预后有 意义。熊新高[3]认为,喉癌AgNOR含量高者预后差;Steven[14]在头颈 部肿瘤研究中亦有类 似发现。黄庆祖[15]等的研究表明,鼻咽癌AgNOR计数与预后有关;Yamamoto [12]等发现,喉癌淋巴结转移者其含量远高于无淋巴结转移者。通过以上研究表明,A gNOR含量越高,预后越差。
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    3.4 肿瘤病理学研究 文献报道,在癌旁貌似正常的粘膜中, 可能有某些基因已发生改变,以后很可能发展为癌组织,而常规病理诊断往往不能发现,与分 子生物学指标AgNOR结合则可指导临床,以使手术切除彻底,避免残留复发。

    综上所述A gNOR在头颈部肿瘤中的定量研究已受到重视,其方法简单,容易掌握,诊断快速,重复性好,可 用于常规组织学材 料,不需特殊处理,能灵敏地反映细胞的增殖活性。

    参考文献

    1,Boldy D A R,et al,Technical method application of the AgN OR method to cell imprints of lymphoid lissue [J] .J Pathol,1989,157:75

    2,邝国乾,等.鼻咽部组织印片核仁组成区嗜银蛋白检测的诊断意义 [J] .癌 症,1994,13(2 ):141-143
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    3,刘东利,等.AgNOR染色在鼻咽涂片中的应用 [J] .江苏医 药,1995, 21(3):186

    4,杨代兴,等.鼻咽脱落细胞的AgNOR定量观察对鼻咽癌的诊断意义 [J] . 耳鼻咽喉 -头颈外科,1995,2(2);103-105

    5,Kuroda Y,Makishimasugimoto T.Immunohist ologic al study on proliferative activities and expression of c-erbB-2 oncoprotein in salivary gland tumors [J] .J Otolaryngol Jpn,1996,99:353

    6,董敬朋, 等.核仁 组成区AgNORs染色及其临床意义 [J] .癌症,1991,10(5):422-424

, http://www.100md.com     7,高冬玲,等. 声带息肉喉乳头状瘤及喉癌组织内核仁组成区本着嗜银蛋白的定量学研究 [J].河南肿 瘤学杂志,1995,8(3):165-166

    8,田道法,等.鼻咽癌组织AgNOR含量的显微光度 术检测 [J] .中国中西医耳鼻咽喉科杂志,1989,9(4):301

    9,丁彦青,等.良恶性肿瘤 的核仁组成区定量研究 [J] .第一军医大学学报,1989,9(4):301

    10,Krelicki T,et a l ,Prognostic value of nucleolar orgnizer regions (AgNORs) in laryngeal cancer [J] .Cancer,1998,52:215-221

    11,熊新 志,等.喉部肿瘤AgNORs定量研究 [J] .临床耳鼻咽喉科杂志,1995,9(1):10-12
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    12,Yamamoto,et al.Prognostic value of nucleolar organizer regions in supragl otic carcinomas [J] .Nasus Larynx,1997,24:85-9013

    13,杨桂琴, 等.喉鳞癌,喉白斑病,声带息肉细胞核仁组成区相关嗜银蛋白的定量观察 [J] .白求恩 医科大学学报,1994,20(2):163-164

    14,Steven M,et al.Nucleolar orgnize r regions in squamous cell carcinoma of the head and neck [J] .Larynoscope,199 2,102:39

    15,黄庆祖,等.鼻咽癌核仁AgNOR变化与其预后的关系 [J] .癌症,1997,16(2):136-137

    (收稿日期 2000-02-07), http://www.100md.com