加味阳和汤对阿霉素肾病综合征大鼠模型的药效学研究
作者：刘旭生 王桦 黄春林 杨霓芝
单位：广州中医药大学第二临床医学院，广州510120
关键词：阳和汤/治疗作用；肾变病综合征/中药疗法；肾/病理学；胆固醇/血液；甘油三酯/血液；白蛋白类/血液；血液流变学/药物作用；疾病模型，动物；大鼠
广州中医药大学学报000416摘要：为探讨加味阳和汤(由肉桂、熟地、鹿角胶、干姜、麻黄、白芥子、甘草、北芪、防己、益母草等组成)难治性肾病综合征的作用机制，参照文献方法成功制作了阿霉素肾病综合征大鼠模型，并以加味阳和汤与强的松进行对照治疗，观察其对模型24h尿蛋白，血清白蛋白、总蛋白，肾功能，脂质代谢，血液流变学和肾组织病理学等方面的影响。结果显示：加味阳和汤具有降低尿蛋白，降血脂，提高血清蛋白，改善血液流变学异常，减轻肾脏病理损伤的作用，而对肾功能无影响。其作用与强的松相仿。
, 百拇医药 中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)04-0337-05
Pharmacodynamic Study of Jiawei Yanghe Decoction for Rat Models with
Adriamycin-induced Nephrotic Syndrome
LIU Xusheng, WANG Hua, HUANG Chunlin, YANG Nizhi
(The Second Affiliated Hospital, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510120,China)
Abstract:To investigate the effect of Jiawei Yanghe Decoction (composed of Yanghe Decoction and Radix Astragali seu Hedysari, Radix Stephaniae Tetrandrae and Herba Leonuri) on nephrotic syndrome, rat model with nephrotic syndrome was established by administration of adriamycin. Effect of Jiawei Yanghe Decoction was studied with prednisone as control. 24-hour urine protein, serum total protein and albumin, renal function, lipid metabolism, blood rheology and renal histopathological changes were observed. The results showed that Jiawei Yanghe Decoction can decrease the contents of urine protein and blood lipid, increase serum protein level, improve the indexes of blood rheology and reduce the renal pathological damage, but exerts no effect on renal function. Its actions are similar to prednisone.
, 百拇医药
Key words:YANGHE DECOCTION/ther.use; NEPHROTIC SYNDROME/TCD therapy; KIDNEY/pathology; CHOLESTEROL/blood; TRIGLYCERIDES/blood;ALBUMINS/blood; BLOOD RHEOLOGY/drug effects;DISEASE MODELS, ANIMAL; RATS
原发性肾病综合征(PNS)是一种肾科多发病、常见病，临床以大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症及水肿为特征，且存在高凝状态，脂质代谢紊乱[1]。这些因素影响着肾病综合征的治疗，改善这些因素对肾综的治疗具有重要意义。目前中西医治疗的方法很多，但不是疗效不太理想，就是毒副作用较大，而且易于复发，治疗颇感棘手。中医古方阳和汤有温阳气，化阴凝的作用，如果在其基础上加强益气、活血、利水的功能，便对PNS临床常见的阳虚、水泛、血瘀的证候类型很有针对性，故在原方基础上加上北芪、防己、益母草组成加味阳和汤。为证实其疗效并探讨其机理，我们进行了加味阳和汤冲剂对阿霉素肾综大鼠模型的药效学试验。结果报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
.1 实验药物和剂量
1.1.1 加味阳和汤冲剂 药物组成：肉桂、熟地、鹿角胶、干姜、麻黄、白芥子、甘草、北芪、防己、益母草等。由广东省中医院制剂室提供，生产批号：960607；规格：10g/包(生药含量8.3g/包)；临床服法：30g/d；本实验大鼠剂量按单位体重生药计算分别为3g.kg-1.d-1和1.5 g.kg-1.d-1。
1.1.2 阳性对照药 强的松，5mg/片，由浙江仙居制药股份有限公司出品，生产批号：901014；给大鼠剂量为5mg.kg-1.d-1。
, 百拇医药
1.2 实验试剂 阿霉素，规格：10mg/瓶，由意大利爱宝大药厂生产，批号6020BA。
1.3 实验动物分组 采用健康、雄性、清洁级SD大白鼠，体重(200±25)g，由第一军医大学动物中心购进。实验动物随机分为5组，每组15只，即正常对照组(A组)，模型对照组(B组)，强的松对照组(C组)，加味阳和汤高剂量治疗组(D组)，加味阳和汤低剂量治疗组(E组)。
1.4 动物模型的制作 参照文献[2，3]，予阿霉素6mg/kg，大鼠阴茎静脉一次性注射，8d后收集尿液，出现大量蛋白尿，说明造模成功。
1.5 喂养和给药方法 各组实验大鼠自由饮食，而C、D、E3组除自由饮食外，C组按5mg.kg-1予强的松溶成2mL溶液灌胃，1次/d；D组按3mg.kg-1予 加味阳和汤冲剂溶成2mL溶液灌胃，1次/d；E组按1.5mg.kg-1予加味阳和汤冲剂溶成2mL溶液灌胃，1次/d。各组连续灌胃4周。
, 百拇医药
1.6 观察指标和测定方法
1.6.1 一般情况 观察大鼠的精神状态、体重、体毛、饮水量、二便及活动情况等。
1.6.2 尿化学检查 24h尿蛋白定量测定：将大鼠单独喂养在代谢笼中，收集24h尿液，记录尿量，分别于第2周和第5周用考马斯兰比法测蛋白量。
1.6.3 血生化检查 实验第5周，在乙醚麻醉下，心脏采血测血清肌酐(苦味酸法)，尿素氮(酶法)，总蛋白(双缩脲法)，血清白蛋白(溴甲酚绿法)，总胆固醇、甘油三酯(酶法)以及血液流变学测定(锥枚粘度计法)。
1.6.4 肾脏形态学检查
(1)光学显微镜检查：将杀检取出的肾组织经常规40%甲醛固定，石蜡包埋后，切成3～5μm的切片，分别进行HE和PAS染色，观察肾组织的变化。
, 百拇医药
(2)透射电镜检查：将杀检的肾皮质组织切成1mm3大小组织数块，经2.5%戊二醛前固定，1%锇酸后固定，阶梯乙醇脱水，环氧树脂EPON812包埋，超薄切片，并行铀和铅双重染色后，置于JEM-1200EX透射电镜下观察。
(3)肾组织病理检查结果综合评分：根据肾小球毛细血管(内皮细胞、管腔内有无瘀血、管腔大小)，肾小球上皮细胞(足突)，基底膜，系膜基质、系膜细胞，肾小管变性等6个指标，按正常、轻、中、重4级，分别记0、1、2、3分，进行双人盲法打分，取其均数作病理半定量分析。
1.6.5 统计方法 采用t检验、秩和检验。
2 结果
2.1 一般情况 实验过程中，B、C、D、E4组动物各有1例死亡，死因不明。除A组外，其余各组均有不同程度的摄食减少，精神不振，尿量减少，身体浮肿，卷毛，体毛光泽度欠佳，活动迟缓等现象，且模型组有多只出现腹水。
, 百拇医药
2.2 生化指标检测结果 各组大鼠血清总胆固醇(TCh)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)检测结果见表1。
表1显示：B组大鼠血清总胆固醇(TCh)、甘油三酯(TG)较A组明显升高(P<0.01)；总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)明显降低(P<0.01)；C、D、E组TCh、TG明显低于B组(P<0.01)，TP、Alb明显高于B组(P<0.01)，表明了加味阳和汤有降低血脂(TCh、TG)，提高血清蛋白(TP、Alb)的作用。
2.3 阿霉素肾综大鼠24h尿蛋白量、肾功能(Bun、Scr)结果 见表2。
表1 各组大鼠血清TCh、TG、TP、Alb比较 (
±s) 组 别
N/例
, 百拇医药
cTCh/(mmol.L-1)
cTG/(mmol.L-1)
ρTP/(g.L-1)
ρAlb/(g.L-1)
A组
15
2.60±0.19**
, 百拇医药
1.51±0.18**
65.45±2.77**
36.80±2.60**
B组
14
8.03±0.54
5.22±0.54
49.11±2.15
18.50±1.65
C组
14
, http://www.100md.com
4.61±0.48**
3.84±0.34**
59.78±1.89**
28.36±1.69**
D组
14
4.39±0.38**
3.78±0.27**
60.43±1.89**
29.64±1.15**
, 百拇医药
E组
14
4.76±0.39**
3.78±0.23**
59.43±1.95**
28.14±1.61**
统计方法：t检验；*与B组比较：P<0.05，**P<0.01 表2显示：造模后第1周，B、C、D、E 4组与A组24 h尿蛋白量比较明显升高，差异有显著性(P<0.01)，说明造模成功；通过4周的治疗，C、D、E组与B组24 h尿蛋白量比较明显降低，差异有显著性(P<0.01)，提示各治疗组均具有降低蛋白尿的作用；各组肾功能比较，差异无显著性(P>0.05)，表明经阿霉素造模后各组大鼠肾功能均无明显损害。
, 百拇医药
2.4 各组大鼠血液流变学情况 详见表3。
表3显示：B组大鼠血纤维蛋白原、血小板聚集率、全血高切、全血低切、血浆粘度均明显增高，与A组比较，差异有显著性(P<0.01)，表明B组存在血液流变学的异常；通过治疗后，C、D、E组各指标均下降，与B组比较，差异有显著性(P<0.05或P<0.01)，说明血液流变学异常得到改善。
2.5 肾脏形态学检查
2.5.1 一般观察 各组大鼠肾脏肉眼观察无明显异常发现。
2.5.2 光学显微镜观察
A组：肾皮质、髓质结构清晰，肾小球毛细血管丛未见增生，毛细血管壁未见增厚，血管腔未见狭窄，血管绊未见坏死，各级肾小管及集合管结构清晰，肾小管上皮细胞未见细胞内水肿、脂肪变性、玻璃样变性或坏死，肾小管及集合管腔内未见管型，间质未见血管扩张、充血、炎症细胞浸润，间质纤维未见增生。
, 百拇医药
B组：肾小球毛细血管壁变薄，上皮细胞增大，系膜细胞轻度增生，基膜增厚，毛细血管狭窄，部分闭塞，近曲小管上皮呈细胞内水肿及脂肪变性，少数近曲小管上皮细胞内玻璃样变性，肾小管及集合管内见蛋白管型。
C组：肾小球毛细血管壁变薄明显减轻，上皮细胞增大减轻，系膜细胞轻度增生，基膜轻微增厚，7例可见毛细血管腔部分狭窄，少见闭塞现象，5例近曲小管上皮呈细胞内轻至中度水肿及脂肪变性，2例重
表2 各组大鼠24h尿蛋白量、血尿素氮(Bun)、肌酐(Scr)比较 (±s) 组 别
N/例
c尿素氮/(mmol.L-1)
, 百拇医药
c肌酐/(μmol.L-1)
m24h尿蛋白/mg
第1周
第5周
A组
15
7.25±0.63
94.32±3.78
6.33±0.73
6.54±0.85
B组
, 百拇医药
14
7.66±0.55
94.70±3.92
20.31±1.41△△
39.32±2.20△△
C组
14
7.48±0.68
95.27±4.11
20.23±1.50△△
16.97±1.12**△
, http://www.100md.com
D组
14
7.51±0.56
95.65±3.80
20.21±1.52△△
15.88±1.54**△
E组
14
7.34±1.11
94.78±4.19
20.33±1.12△△
, http://www.100md.com
16.91±1.56**△
统计方法：t检验：**与B组比较P<0.01；△与A组比较P<0.05，△△P<0.01表3 各组大鼠血液流变学比较 (±s) 组 别
N/例
ρ血纤维蛋白原
/(g.L-1)
p血小板聚集率
/%
η全血高切
, 百拇医药
/(mPa.s-1)
η全血低切
/(mPa.s-1)
η血浆粘度
/(mPa.s-1)
A组
15
0.99±0.06*
46.67±3.36**
, 百拇医药
6.29±0.30**
8.46±0.45**
1.58±0.04**
B组
14
2.27±0.15
81.34±3.36
8.43±0.52
11.80±0.70
2.49±0.16
C组
, 百拇医药
14
1.39±0.08*
54.74±3.51*
6.37±0.34**
8.72±0.39**
1.72±0.05**
D组
14
1.37±0.17*
55.62±3.43*
, http://www.100md.com
6.38±0.31**
8.41±0.37**
1.69±0.04**
E组
14
1.41±0.08*
55.84±3.29*
6.44±0.33**
8.67±0.38**
1.70±0.06**
, 百拇医药
统计方法：t检验；*与B组比较 P<0.05，**P<0.01
度。少许近曲小管上皮细胞内玻璃样变性，6例肾小管及集合管内见少量蛋白管型。
D组：肾小球毛细血管壁变薄明显减轻，上皮细胞增大不明显，系膜细胞轻度增生，基膜轻微增厚，5例可见毛细血管腔部分狭窄，少见闭塞现象，4例近曲小管上皮呈细胞内轻至中度水肿及脂肪变性，2例重度水肿及脂肪变性。少许近曲小管上皮细胞内玻璃样变性，4例肾小管及集合管内见少量蛋白管型。
E组：基本同C组。
2.5.3 电镜观察结果
A组(图1-a)：电镜下(×8000倍)可见多个毛细血管(Cap)，腔内有红血球(Er)，血管内壁附有内皮细胞(Ed)，远离细胞核处的胞质薄并有微窗孔，内皮细胞外是基膜(BM)，基膜完整清晰厚薄均匀，外附有足细胞(Poc)分出的足突(F)；可见系膜细胞(MC)位于相邻毛细血管的系膜区中。
, 百拇医药
B组(图1-b)：电镜下(×3000倍)可见毛细血管，腔内有大量红血球瘀积，内皮细胞肿胀，其微窗孔消失或模糊不清，足细胞的足突融合成片甚至足突消失，上皮细胞空泡变性，系膜区增宽，系膜细胞与系膜基质轻度增生，基膜增厚不明显。
C、D、E组(图1-c～e)：电镜下(×4000倍)可见毛细血管腔内无瘀血情况，内皮细胞形态正常，可见微窗孔，足细胞仍有部分融合现象，但较B组轻，局部可见足突恢复正常或接近正常状态，系膜区仍有轻微增宽现象，基膜形态正常，3组病理形态均较模型组有改善，其中以高剂量组最优，低剂量次之，激素组再次之。
2.5.4 病理综合评分比较 结果见表4。
由表4可以看出：C、D、E3组比B组病理变化明显好转，其病理评分结果的差异有显著性(P<0.05)，说明加味阳和汤对阿霉素肾病综合症大鼠的肾脏病理损伤有改善作用。表4 各组病理综合评分比较(±s) 组 别
, 百拇医药
N/例
s病理评分/分
A组
15
0
B组
14
8.91±3.15
C组
14
6.03±1.87*
D组
14
, 百拇医药
5.11±1.36*
E组
14
5.65±1.52*
*与B组比较P<0.05
图1 各组电镜观察结果(铅和铀双重染色)
3 讨论
实验结果表明，加味阳和汤冲剂对阿霉素肾综大鼠模型具有降低24h尿蛋白，降低血脂、提高血清蛋白，改善血液流变学异常，减轻肾脏病理损伤的作用，而对肾功能均无明显损害。其作用与强的松(C组)相仿。
, 百拇医药
加味阳和汤对阿霉素肾综的可能作用机制：中医认为蛋白尿是由于脾失健运，精微下泄，肾失封藏，精气不固，精微物质从尿中排出所致。而加味阳和汤具有温阳益气，补益脾肾之功，能使脾得以健运，肾得以主藏精，从而减少蛋白尿的漏出，提高了血清白蛋白、总蛋白。现代大量研究[4～6]表明，北芪、肉桂等均有减轻蛋白尿、提高血白蛋白水平的作用。
血液的高凝状态与中医的血瘀相当。而血瘀的形成与脾肾亏虚、气虚和久病入络等有关。加味阳和汤具有益气、健脾、温肾、活血化瘀之效，能使血瘀证得到改善。研究表明[7，8]，活血化瘀药物有改善肾血流、抗凝、溶纤等作用。
模型组总胆固醇、甘油三酯等均有明显升高，通过加味阳和汤治疗后得到明显改善，表明本方具有降脂作用。其机制可能为：①调节了肝脏合成总胆固醇、甘油三酯及脂蛋白；②加强了脂质的清除。
阿霉素肾综的肾组织病理与人类微小病变相类似，其表现是肾小球毛细血管壁变薄，内皮细胞肿胀，裂孔消失或模糊不清，足突融合，上皮细胞空泡样变，基底膜、系膜、基质可轻度增厚、增生，肾小管可见蛋白管型等。通过加味阳和汤进行干扰治疗，肾组织病理有明显好转。
, 百拇医药
综上所述，加味阳和汤对阿霉素肾综模型显示了与激素相仿的治疗作用，且作用与药量呈正相关。激素的毒副作用是当前临床颇为棘手的问题。加味阳和汤在临床上是否可起到激素的替代作用，有待进一步研究。
基金项目：国家中医药管理局资助课题(编号：95A2151)
作者简介：刘旭生(1964-)，男，副主任医师；
参考文献：
[1] 刘宝厚，刘新.血液流变学测定在原发性肾小球疾病中的临床意义[J].中华肾脏病杂志，1987，12(3)：128
[2] 胡昌明，蔡毅.柔红霉素及其衍生物肾病模型的研究[J].国外医学.泌尿系统分册，1988，23(8)：120
[3] 徐叔云.药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1991.988
, 百拇医药
[4] 章友康，王海燕，王丽.黄芪、当归治疗三种不同病理型肾炎的实验研究[J].中华肾脏病杂志，1986，25(4)：222
[5] 鲁盈盈，李惊子.黄芪、当归合剂对肾病综合征血清脂谱和肾小球硬化的影响[J].中国中西医结合杂志，1997，17(8)：478
[6] 黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].第11版.北京：中国医药科技出版社，1994.865
[7] 张陈福.益母草抗血小板聚集的机理研究[J].中国中西医结合杂志，1986，6(1)：39
[8] Border W A.Induction of membranous nephropathy in rabbits by administration of an exogenous cationic antigen[J].J Clin Invest,1982,68:451
收稿日期：2000-05-22, http://www.100md.com
单位：广州中医药大学第二临床医学院，广州510120
关键词：阳和汤/治疗作用；肾变病综合征/中药疗法；肾/病理学；胆固醇/血液；甘油三酯/血液；白蛋白类/血液；血液流变学/药物作用；疾病模型，动物；大鼠
广州中医药大学学报000416摘要：为探讨加味阳和汤(由肉桂、熟地、鹿角胶、干姜、麻黄、白芥子、甘草、北芪、防己、益母草等组成)难治性肾病综合征的作用机制，参照文献方法成功制作了阿霉素肾病综合征大鼠模型，并以加味阳和汤与强的松进行对照治疗，观察其对模型24h尿蛋白，血清白蛋白、总蛋白，肾功能，脂质代谢，血液流变学和肾组织病理学等方面的影响。结果显示：加味阳和汤具有降低尿蛋白，降血脂，提高血清蛋白，改善血液流变学异常，减轻肾脏病理损伤的作用，而对肾功能无影响。其作用与强的松相仿。
, 百拇医药 中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)04-0337-05
Pharmacodynamic Study of Jiawei Yanghe Decoction for Rat Models with
Adriamycin-induced Nephrotic Syndrome
LIU Xusheng, WANG Hua, HUANG Chunlin, YANG Nizhi
(The Second Affiliated Hospital, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510120,China)
Abstract:To investigate the effect of Jiawei Yanghe Decoction (composed of Yanghe Decoction and Radix Astragali seu Hedysari, Radix Stephaniae Tetrandrae and Herba Leonuri) on nephrotic syndrome, rat model with nephrotic syndrome was established by administration of adriamycin. Effect of Jiawei Yanghe Decoction was studied with prednisone as control. 24-hour urine protein, serum total protein and albumin, renal function, lipid metabolism, blood rheology and renal histopathological changes were observed. The results showed that Jiawei Yanghe Decoction can decrease the contents of urine protein and blood lipid, increase serum protein level, improve the indexes of blood rheology and reduce the renal pathological damage, but exerts no effect on renal function. Its actions are similar to prednisone.
, 百拇医药
Key words:YANGHE DECOCTION/ther.use; NEPHROTIC SYNDROME/TCD therapy; KIDNEY/pathology; CHOLESTEROL/blood; TRIGLYCERIDES/blood;ALBUMINS/blood; BLOOD RHEOLOGY/drug effects;DISEASE MODELS, ANIMAL; RATS
原发性肾病综合征(PNS)是一种肾科多发病、常见病，临床以大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症及水肿为特征，且存在高凝状态，脂质代谢紊乱[1]。这些因素影响着肾病综合征的治疗，改善这些因素对肾综的治疗具有重要意义。目前中西医治疗的方法很多，但不是疗效不太理想，就是毒副作用较大，而且易于复发，治疗颇感棘手。中医古方阳和汤有温阳气，化阴凝的作用，如果在其基础上加强益气、活血、利水的功能，便对PNS临床常见的阳虚、水泛、血瘀的证候类型很有针对性，故在原方基础上加上北芪、防己、益母草组成加味阳和汤。为证实其疗效并探讨其机理，我们进行了加味阳和汤冲剂对阿霉素肾综大鼠模型的药效学试验。结果报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
.1 实验药物和剂量
1.1.1 加味阳和汤冲剂 药物组成：肉桂、熟地、鹿角胶、干姜、麻黄、白芥子、甘草、北芪、防己、益母草等。由广东省中医院制剂室提供，生产批号：960607；规格：10g/包(生药含量8.3g/包)；临床服法：30g/d；本实验大鼠剂量按单位体重生药计算分别为3g.kg-1.d-1和1.5 g.kg-1.d-1。
1.1.2 阳性对照药 强的松，5mg/片，由浙江仙居制药股份有限公司出品，生产批号：901014；给大鼠剂量为5mg.kg-1.d-1。
, 百拇医药
1.2 实验试剂 阿霉素，规格：10mg/瓶，由意大利爱宝大药厂生产，批号6020BA。
1.3 实验动物分组 采用健康、雄性、清洁级SD大白鼠，体重(200±25)g，由第一军医大学动物中心购进。实验动物随机分为5组，每组15只，即正常对照组(A组)，模型对照组(B组)，强的松对照组(C组)，加味阳和汤高剂量治疗组(D组)，加味阳和汤低剂量治疗组(E组)。
1.4 动物模型的制作 参照文献[2，3]，予阿霉素6mg/kg，大鼠阴茎静脉一次性注射，8d后收集尿液，出现大量蛋白尿，说明造模成功。
1.5 喂养和给药方法 各组实验大鼠自由饮食，而C、D、E3组除自由饮食外，C组按5mg.kg-1予强的松溶成2mL溶液灌胃，1次/d；D组按3mg.kg-1予 加味阳和汤冲剂溶成2mL溶液灌胃，1次/d；E组按1.5mg.kg-1予加味阳和汤冲剂溶成2mL溶液灌胃，1次/d。各组连续灌胃4周。
, 百拇医药
1.6 观察指标和测定方法
1.6.1 一般情况 观察大鼠的精神状态、体重、体毛、饮水量、二便及活动情况等。
1.6.2 尿化学检查 24h尿蛋白定量测定：将大鼠单独喂养在代谢笼中，收集24h尿液，记录尿量，分别于第2周和第5周用考马斯兰比法测蛋白量。
1.6.3 血生化检查 实验第5周，在乙醚麻醉下，心脏采血测血清肌酐(苦味酸法)，尿素氮(酶法)，总蛋白(双缩脲法)，血清白蛋白(溴甲酚绿法)，总胆固醇、甘油三酯(酶法)以及血液流变学测定(锥枚粘度计法)。
1.6.4 肾脏形态学检查
(1)光学显微镜检查：将杀检取出的肾组织经常规40%甲醛固定，石蜡包埋后，切成3～5μm的切片，分别进行HE和PAS染色，观察肾组织的变化。
, 百拇医药
(2)透射电镜检查：将杀检的肾皮质组织切成1mm3大小组织数块，经2.5%戊二醛前固定，1%锇酸后固定，阶梯乙醇脱水，环氧树脂EPON812包埋，超薄切片，并行铀和铅双重染色后，置于JEM-1200EX透射电镜下观察。
(3)肾组织病理检查结果综合评分：根据肾小球毛细血管(内皮细胞、管腔内有无瘀血、管腔大小)，肾小球上皮细胞(足突)，基底膜，系膜基质、系膜细胞，肾小管变性等6个指标，按正常、轻、中、重4级，分别记0、1、2、3分，进行双人盲法打分，取其均数作病理半定量分析。
1.6.5 统计方法 采用t检验、秩和检验。
2 结果
2.1 一般情况 实验过程中，B、C、D、E4组动物各有1例死亡，死因不明。除A组外，其余各组均有不同程度的摄食减少，精神不振，尿量减少，身体浮肿，卷毛，体毛光泽度欠佳，活动迟缓等现象，且模型组有多只出现腹水。
, 百拇医药
2.2 生化指标检测结果 各组大鼠血清总胆固醇(TCh)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)检测结果见表1。
表1显示：B组大鼠血清总胆固醇(TCh)、甘油三酯(TG)较A组明显升高(P<0.01)；总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)明显降低(P<0.01)；C、D、E组TCh、TG明显低于B组(P<0.01)，TP、Alb明显高于B组(P<0.01)，表明了加味阳和汤有降低血脂(TCh、TG)，提高血清蛋白(TP、Alb)的作用。
2.3 阿霉素肾综大鼠24h尿蛋白量、肾功能(Bun、Scr)结果 见表2。
表1 各组大鼠血清TCh、TG、TP、Alb比较 (
±s) 组 别N/例
, 百拇医药
cTCh/(mmol.L-1)
cTG/(mmol.L-1)
ρTP/(g.L-1)
ρAlb/(g.L-1)
A组
15
2.60±0.19**
, 百拇医药
1.51±0.18**
65.45±2.77**
36.80±2.60**
B组
14
8.03±0.54
5.22±0.54
49.11±2.15
18.50±1.65
C组
14
, http://www.100md.com
4.61±0.48**
3.84±0.34**
59.78±1.89**
28.36±1.69**
D组
14
4.39±0.38**
3.78±0.27**
60.43±1.89**
29.64±1.15**
, 百拇医药
E组
14
4.76±0.39**
3.78±0.23**
59.43±1.95**
28.14±1.61**
统计方法：t检验；*与B组比较：P<0.05，**P<0.01 表2显示：造模后第1周，B、C、D、E 4组与A组24 h尿蛋白量比较明显升高，差异有显著性(P<0.01)，说明造模成功；通过4周的治疗，C、D、E组与B组24 h尿蛋白量比较明显降低，差异有显著性(P<0.01)，提示各治疗组均具有降低蛋白尿的作用；各组肾功能比较，差异无显著性(P>0.05)，表明经阿霉素造模后各组大鼠肾功能均无明显损害。
, 百拇医药
2.4 各组大鼠血液流变学情况 详见表3。
表3显示：B组大鼠血纤维蛋白原、血小板聚集率、全血高切、全血低切、血浆粘度均明显增高，与A组比较，差异有显著性(P<0.01)，表明B组存在血液流变学的异常；通过治疗后，C、D、E组各指标均下降，与B组比较，差异有显著性(P<0.05或P<0.01)，说明血液流变学异常得到改善。
2.5 肾脏形态学检查
2.5.1 一般观察 各组大鼠肾脏肉眼观察无明显异常发现。
2.5.2 光学显微镜观察
A组：肾皮质、髓质结构清晰，肾小球毛细血管丛未见增生，毛细血管壁未见增厚，血管腔未见狭窄，血管绊未见坏死，各级肾小管及集合管结构清晰，肾小管上皮细胞未见细胞内水肿、脂肪变性、玻璃样变性或坏死，肾小管及集合管腔内未见管型，间质未见血管扩张、充血、炎症细胞浸润，间质纤维未见增生。
, 百拇医药
B组：肾小球毛细血管壁变薄，上皮细胞增大，系膜细胞轻度增生，基膜增厚，毛细血管狭窄，部分闭塞，近曲小管上皮呈细胞内水肿及脂肪变性，少数近曲小管上皮细胞内玻璃样变性，肾小管及集合管内见蛋白管型。
C组：肾小球毛细血管壁变薄明显减轻，上皮细胞增大减轻，系膜细胞轻度增生，基膜轻微增厚，7例可见毛细血管腔部分狭窄，少见闭塞现象，5例近曲小管上皮呈细胞内轻至中度水肿及脂肪变性，2例重
表2 各组大鼠24h尿蛋白量、血尿素氮(Bun)、肌酐(Scr)比较 (
±s) 组 别N/例
c尿素氮/(mmol.L-1)
, 百拇医药
c肌酐/(μmol.L-1)
m24h尿蛋白/mg
第1周
第5周
A组
15
7.25±0.63
94.32±3.78
6.33±0.73
6.54±0.85
B组
, 百拇医药
14
7.66±0.55
94.70±3.92
20.31±1.41△△
39.32±2.20△△
C组
14
7.48±0.68
95.27±4.11
20.23±1.50△△
16.97±1.12**△
, http://www.100md.com
D组
14
7.51±0.56
95.65±3.80
20.21±1.52△△
15.88±1.54**△
E组
14
7.34±1.11
94.78±4.19
20.33±1.12△△
, http://www.100md.com
16.91±1.56**△
统计方法：t检验：**与B组比较P<0.01；△与A组比较P<0.05，△△P<0.01表3 各组大鼠血液流变学比较 (
±s) 组 别N/例
ρ血纤维蛋白原
/(g.L-1)
p血小板聚集率
/%
η全血高切
, 百拇医药
/(mPa.s-1)
η全血低切
/(mPa.s-1)
η血浆粘度
/(mPa.s-1)
A组
15
0.99±0.06*
46.67±3.36**
, 百拇医药
6.29±0.30**
8.46±0.45**
1.58±0.04**
B组
14
2.27±0.15
81.34±3.36
8.43±0.52
11.80±0.70
2.49±0.16
C组
, 百拇医药
14
1.39±0.08*
54.74±3.51*
6.37±0.34**
8.72±0.39**
1.72±0.05**
D组
14
1.37±0.17*
55.62±3.43*
, http://www.100md.com
6.38±0.31**
8.41±0.37**
1.69±0.04**
E组
14
1.41±0.08*
55.84±3.29*
6.44±0.33**
8.67±0.38**
1.70±0.06**
, 百拇医药
统计方法：t检验；*与B组比较 P<0.05，**P<0.01
度。少许近曲小管上皮细胞内玻璃样变性，6例肾小管及集合管内见少量蛋白管型。
D组：肾小球毛细血管壁变薄明显减轻，上皮细胞增大不明显，系膜细胞轻度增生，基膜轻微增厚，5例可见毛细血管腔部分狭窄，少见闭塞现象，4例近曲小管上皮呈细胞内轻至中度水肿及脂肪变性，2例重度水肿及脂肪变性。少许近曲小管上皮细胞内玻璃样变性，4例肾小管及集合管内见少量蛋白管型。
E组：基本同C组。
2.5.3 电镜观察结果
A组(图1-a)：电镜下(×8000倍)可见多个毛细血管(Cap)，腔内有红血球(Er)，血管内壁附有内皮细胞(Ed)，远离细胞核处的胞质薄并有微窗孔，内皮细胞外是基膜(BM)，基膜完整清晰厚薄均匀，外附有足细胞(Poc)分出的足突(F)；可见系膜细胞(MC)位于相邻毛细血管的系膜区中。
, 百拇医药
B组(图1-b)：电镜下(×3000倍)可见毛细血管，腔内有大量红血球瘀积，内皮细胞肿胀，其微窗孔消失或模糊不清，足细胞的足突融合成片甚至足突消失，上皮细胞空泡变性，系膜区增宽，系膜细胞与系膜基质轻度增生，基膜增厚不明显。
C、D、E组(图1-c～e)：电镜下(×4000倍)可见毛细血管腔内无瘀血情况，内皮细胞形态正常，可见微窗孔，足细胞仍有部分融合现象，但较B组轻，局部可见足突恢复正常或接近正常状态，系膜区仍有轻微增宽现象，基膜形态正常，3组病理形态均较模型组有改善，其中以高剂量组最优，低剂量次之，激素组再次之。
2.5.4 病理综合评分比较 结果见表4。
由表4可以看出：C、D、E3组比B组病理变化明显好转，其病理评分结果的差异有显著性(P<0.05)，说明加味阳和汤对阿霉素肾病综合症大鼠的肾脏病理损伤有改善作用。表4 各组病理综合评分比较(
±s) 组 别, 百拇医药
N/例
s病理评分/分
A组
15
0
B组
14
8.91±3.15
C组
14
6.03±1.87*
D组
14
, 百拇医药
5.11±1.36*
E组
14
5.65±1.52*
*与B组比较P<0.05
图1 各组电镜观察结果(铅和铀双重染色)
3 讨论
实验结果表明，加味阳和汤冲剂对阿霉素肾综大鼠模型具有降低24h尿蛋白，降低血脂、提高血清蛋白，改善血液流变学异常，减轻肾脏病理损伤的作用，而对肾功能均无明显损害。其作用与强的松(C组)相仿。
, 百拇医药
加味阳和汤对阿霉素肾综的可能作用机制：中医认为蛋白尿是由于脾失健运，精微下泄，肾失封藏，精气不固，精微物质从尿中排出所致。而加味阳和汤具有温阳益气，补益脾肾之功，能使脾得以健运，肾得以主藏精，从而减少蛋白尿的漏出，提高了血清白蛋白、总蛋白。现代大量研究[4～6]表明，北芪、肉桂等均有减轻蛋白尿、提高血白蛋白水平的作用。
血液的高凝状态与中医的血瘀相当。而血瘀的形成与脾肾亏虚、气虚和久病入络等有关。加味阳和汤具有益气、健脾、温肾、活血化瘀之效，能使血瘀证得到改善。研究表明[7，8]，活血化瘀药物有改善肾血流、抗凝、溶纤等作用。
模型组总胆固醇、甘油三酯等均有明显升高，通过加味阳和汤治疗后得到明显改善，表明本方具有降脂作用。其机制可能为：①调节了肝脏合成总胆固醇、甘油三酯及脂蛋白；②加强了脂质的清除。
阿霉素肾综的肾组织病理与人类微小病变相类似，其表现是肾小球毛细血管壁变薄，内皮细胞肿胀，裂孔消失或模糊不清，足突融合，上皮细胞空泡样变，基底膜、系膜、基质可轻度增厚、增生，肾小管可见蛋白管型等。通过加味阳和汤进行干扰治疗，肾组织病理有明显好转。
, 百拇医药
综上所述，加味阳和汤对阿霉素肾综模型显示了与激素相仿的治疗作用，且作用与药量呈正相关。激素的毒副作用是当前临床颇为棘手的问题。加味阳和汤在临床上是否可起到激素的替代作用，有待进一步研究。
基金项目：国家中医药管理局资助课题(编号：95A2151)
作者简介：刘旭生(1964-)，男，副主任医师；
参考文献：
[1] 刘宝厚，刘新.血液流变学测定在原发性肾小球疾病中的临床意义[J].中华肾脏病杂志，1987，12(3)：128
[2] 胡昌明，蔡毅.柔红霉素及其衍生物肾病模型的研究[J].国外医学.泌尿系统分册，1988，23(8)：120
[3] 徐叔云.药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1991.988
, 百拇医药
[4] 章友康，王海燕，王丽.黄芪、当归治疗三种不同病理型肾炎的实验研究[J].中华肾脏病杂志，1986，25(4)：222
[5] 鲁盈盈，李惊子.黄芪、当归合剂对肾病综合征血清脂谱和肾小球硬化的影响[J].中国中西医结合杂志，1997，17(8)：478
[6] 黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].第11版.北京：中国医药科技出版社，1994.865
[7] 张陈福.益母草抗血小板聚集的机理研究[J].中国中西医结合杂志，1986，6(1)：39
[8] Border W A.Induction of membranous nephropathy in rabbits by administration of an exogenous cationic antigen[J].J Clin Invest,1982,68:451
收稿日期：2000-05-22, http://www.100md.com