复方双花口服液质量控制的研究
作者：杨正裕
单位：北京中医药大学 北京100029
关键词：复方双花口服液；薄层色谱；HPLC；绿原酸；黄芩甙
北京中医药大学学报000420摘要：采用薄层色谱法对复方双花口服液中的黄芩、薄荷、陈皮进行了鉴别；运用HPLC法以绿原酸为指标对口服液中的金银花进行了含量测定。定性及定量方法简便、准确，可用于该制剂的质量控制。
中图分类号：R284.1
The Quality Control on Compound Shuanghua Oral Fluid
Yang Zhengyu
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
, 百拇医药
ABSTRACT：By thin layer chromatography, Huangqin, Bohe and Chenpi were differentiated from the oral fluid. The content of Jinyinhua was determined by taking chlorogenic acid as index through HPLC method. The qualitative and quantitative methods are simple and convenient with accuracy, which can be used for the quality control on this preparation.
KEY WORDS: Compound Shuanghua oral fluid; Thin layer chromatography; HPLC; Chlorogenic acid; Baicalin
, 百拇医药
复方双花口服液是由金银花、薄荷、陈皮、黄芩等药材制成的复方中药制剂。用于治疗风热感冒。为控制其质量标准，采用薄层色谱法鉴别了制剂中的黄芩、薄荷、陈皮；采用HPLC法对制剂中的金银花进行了含量测定。
1 仪器与试药
岛津HPLC-6A，紫外检测器SPD-6AV，泵LP-6A，柱温箱-HIC-6A。
绿原酸对照品、黄芩甙对照品(中国药品生物制品检定所)；四氢呋喃为色谱用试剂，其他试剂均为分析纯；硅胶G(青岛海洋化工厂)；复方双花口服液(北京第四制药厂实验室制备)
2 薄层色谱法定性鉴别
2.1 黄芩的鉴别
取口服液20 mL，滤过，以盐酸调pH 1～2，离心，分取沉淀，沉淀加1 mL甲醇溶解。滤过，为供试品溶液。另取黄芩甙对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg黄芩甙的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以2% FeCl3乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的草绿色斑点。见图1。
, 百拇医药
2.2 薄荷的鉴别
取口服液20 mL，滤过，加石油醚(60～90 ℃)萃取2次(10 mL，10 mL)分取石油醚液，挥发至1 mL，作为供试品溶液。另取薄荷对照药材0.8 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验。吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一块硅胶G板上，以正己烷—醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出晾干，喷以5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加热约10 min，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
图1 黄芩薄层色谱
1 黄芩甙对照品
2 复方双花口服液样品
3 空白对照品
, http://www.100md.com
图2 薄荷薄层色谱
1 薄荷对照品
2 复方双花口服液样品
3 空白对照品
2.3 陈皮的鉴别
取口服液20 mL蒸干，加甲醇10 mL，溶解后滤过，滤液浓缩至1 mL，为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.5 g，加甲醇10 mL超声波提取30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，为对照药材溶液。照薄层色谱法吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一用50%NaOH制备的硅胶G板上，以醋酸乙酯—甲醇—水(100∶17∶13)为展开剂，展开约3 cm，取出，晾干，再以甲苯—醋酸乙酯—甲酸—水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展至约8 cm，取出晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下(365 nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图3。
, 百拇医药
图3 陈皮薄层色谱
1 陈皮对照品
2 复方双花口服液样品
3 空白对照品
3 制剂中绿原酸的含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱YWG-C18(4.6 mm×150 mm)流动相：甲醇—水—冰醋酸—四氢呋喃(2.5∶97∶15∶6)检测波长326 nm，柱温25 ℃，流速1.0 mL/min绿原酸的理论塔板数大于3 000。
3.2 供试品溶液的制备
精密量取口服液10 mL，蒸干，加入30 mL 50%甲醇，超声波提取30 min，放置室温后滤入50 mL容量瓶中，用50%甲醇洗涤容器和残渣数次，洗液并入容量瓶中，并以50%甲醇稀释至刻度。
, 百拇医药
3.3 对照品溶液的制备
精密称定绿原酸对照品约10 mg，置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取1 mL于10 mL容量瓶中，以50%甲醇稀释至刻度。
3.4 空白溶液的制备
按处方称取除金银花以外的其余药材，按工艺制成不含金银花的模似制剂，按供试品溶液项下方法操作，制得空白对照溶液。
3.5 线性关系考察
精密吸取对照品溶液10、15、20、25 mL进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵座标，对照品量为横座标，进行回归计算，得回归方程Y=10087.4X+5943.5， r=0.9996，结果表明绿原酸在1～2.5 μg范围内有良好的线性关系。
, 百拇医药
3.6 精密度试验
精密吸取绿原酸对照品液15 μL，重复进样5次，绿原酸峰面积积分值的相对标准偏差<2%，RSD=1.28。
3.7 样品测定
精密吸取供试品溶液15 μL按上述色谱条件测定，以回归方程计算含量，测定了3批样品的含量，结果见表1、图4。
3.8 回收率测定
精密吸取5 mL样品5份，分别加入绿原酸对照品2 mg，同供试液制备法制备，按上述色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为100.02%，RSD=1.12。表明本法有良好的回收率。结果见表2。
表1 绿原酸含量测定 (n=3) 批号
绿原酸含量/%
, 百拇医药
RSD/%
910413
0.5078
0.94
910515
0.4979
0.58
910620
0.5091
0.57
表2 回收率测定结果 (mg) 样品中绿
原酸含量
, 百拇医药
添加绿
原酸量
测出绿原
酸总量
回收率
(%)
2.540
2
4.520
99.00
2.478
2
4.456
, 百拇医药
98.90
2.501
2
4.568
101.35
2.500
2
4.497
99.85
2.512
2
4.532
101.00
图4 复方双花口服液HPLC色谱图
A 绿原酸对照品 B 复方双花口服液样品 C 空白对照品
4 结论
薄层鉴别中，空白对照液为自制的不含检出药材的口服液。制备方法同供试品溶液。检识结果空白对照无干扰。HPLC法测定复方双花口服液中绿原酸，分离度好，空白对照无干扰，精密度RSD%为1.28%，回收率为100.02%，可作为含有金银花制剂的质量控制的参考。
(收稿日期：2000-03-27), http://www.100md.com
单位：北京中医药大学 北京100029
关键词：复方双花口服液；薄层色谱；HPLC；绿原酸；黄芩甙
北京中医药大学学报000420摘要：采用薄层色谱法对复方双花口服液中的黄芩、薄荷、陈皮进行了鉴别；运用HPLC法以绿原酸为指标对口服液中的金银花进行了含量测定。定性及定量方法简便、准确，可用于该制剂的质量控制。
中图分类号：R284.1
The Quality Control on Compound Shuanghua Oral Fluid
Yang Zhengyu
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
, 百拇医药
ABSTRACT：By thin layer chromatography, Huangqin, Bohe and Chenpi were differentiated from the oral fluid. The content of Jinyinhua was determined by taking chlorogenic acid as index through HPLC method. The qualitative and quantitative methods are simple and convenient with accuracy, which can be used for the quality control on this preparation.
KEY WORDS: Compound Shuanghua oral fluid; Thin layer chromatography; HPLC; Chlorogenic acid; Baicalin
, 百拇医药
复方双花口服液是由金银花、薄荷、陈皮、黄芩等药材制成的复方中药制剂。用于治疗风热感冒。为控制其质量标准，采用薄层色谱法鉴别了制剂中的黄芩、薄荷、陈皮；采用HPLC法对制剂中的金银花进行了含量测定。
1 仪器与试药
岛津HPLC-6A，紫外检测器SPD-6AV，泵LP-6A，柱温箱-HIC-6A。
绿原酸对照品、黄芩甙对照品(中国药品生物制品检定所)；四氢呋喃为色谱用试剂，其他试剂均为分析纯；硅胶G(青岛海洋化工厂)；复方双花口服液(北京第四制药厂实验室制备)
2 薄层色谱法定性鉴别
2.1 黄芩的鉴别
取口服液20 mL，滤过，以盐酸调pH 1～2，离心，分取沉淀，沉淀加1 mL甲醇溶解。滤过，为供试品溶液。另取黄芩甙对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg黄芩甙的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以醋酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以2% FeCl3乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的草绿色斑点。见图1。
, 百拇医药
2.2 薄荷的鉴别
取口服液20 mL，滤过，加石油醚(60～90 ℃)萃取2次(10 mL，10 mL)分取石油醚液，挥发至1 mL，作为供试品溶液。另取薄荷对照药材0.8 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验。吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一块硅胶G板上，以正己烷—醋酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出晾干，喷以5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加热约10 min，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
图1 黄芩薄层色谱
1 黄芩甙对照品
2 复方双花口服液样品
3 空白对照品
, http://www.100md.com
图2 薄荷薄层色谱
1 薄荷对照品
2 复方双花口服液样品
3 空白对照品
2.3 陈皮的鉴别
取口服液20 mL蒸干，加甲醇10 mL，溶解后滤过，滤液浓缩至1 mL，为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.5 g，加甲醇10 mL超声波提取30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，为对照药材溶液。照薄层色谱法吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一用50%NaOH制备的硅胶G板上，以醋酸乙酯—甲醇—水(100∶17∶13)为展开剂，展开约3 cm，取出，晾干，再以甲苯—醋酸乙酯—甲酸—水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展至约8 cm，取出晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下(365 nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图3。
, 百拇医药
图3 陈皮薄层色谱
1 陈皮对照品
2 复方双花口服液样品
3 空白对照品
3 制剂中绿原酸的含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱YWG-C18(4.6 mm×150 mm)流动相：甲醇—水—冰醋酸—四氢呋喃(2.5∶97∶15∶6)检测波长326 nm，柱温25 ℃，流速1.0 mL/min绿原酸的理论塔板数大于3 000。
3.2 供试品溶液的制备
精密量取口服液10 mL，蒸干，加入30 mL 50%甲醇，超声波提取30 min，放置室温后滤入50 mL容量瓶中，用50%甲醇洗涤容器和残渣数次，洗液并入容量瓶中，并以50%甲醇稀释至刻度。
, 百拇医药
3.3 对照品溶液的制备
精密称定绿原酸对照品约10 mg，置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取1 mL于10 mL容量瓶中，以50%甲醇稀释至刻度。
3.4 空白溶液的制备
按处方称取除金银花以外的其余药材，按工艺制成不含金银花的模似制剂，按供试品溶液项下方法操作，制得空白对照溶液。
3.5 线性关系考察
精密吸取对照品溶液10、15、20、25 mL进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵座标，对照品量为横座标，进行回归计算，得回归方程Y=10087.4X+5943.5， r=0.9996，结果表明绿原酸在1～2.5 μg范围内有良好的线性关系。
, 百拇医药
3.6 精密度试验
精密吸取绿原酸对照品液15 μL，重复进样5次，绿原酸峰面积积分值的相对标准偏差<2%，RSD=1.28。
3.7 样品测定
精密吸取供试品溶液15 μL按上述色谱条件测定，以回归方程计算含量，测定了3批样品的含量，结果见表1、图4。
3.8 回收率测定
精密吸取5 mL样品5份，分别加入绿原酸对照品2 mg，同供试液制备法制备，按上述色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为100.02%，RSD=1.12。表明本法有良好的回收率。结果见表2。
表1 绿原酸含量测定 (n=3) 批号
绿原酸含量/%
, 百拇医药
RSD/%
910413
0.5078
0.94
910515
0.4979
0.58
910620
0.5091
0.57
表2 回收率测定结果 (mg) 样品中绿
原酸含量
, 百拇医药
添加绿
原酸量
测出绿原
酸总量
回收率
(%)
2.540
2
4.520
99.00
2.478
2
4.456
, 百拇医药
98.90
2.501
2
4.568
101.35
2.500
2
4.497
99.85
2.512
2
4.532
101.00
图4 复方双花口服液HPLC色谱图
A 绿原酸对照品 B 复方双花口服液样品 C 空白对照品
4 结论
薄层鉴别中，空白对照液为自制的不含检出药材的口服液。制备方法同供试品溶液。检识结果空白对照无干扰。HPLC法测定复方双花口服液中绿原酸，分离度好，空白对照无干扰，精密度RSD%为1.28%，回收率为100.02%，可作为含有金银花制剂的质量控制的参考。
(收稿日期：2000-03-27), http://www.100md.com