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编号:10253642
卡马西平与TRH抗癫痫作用相互关系的研究
http://www.100md.com 《临床神经病学杂志》 2000年第4期
     作者:唐吉友 李湘萍 迟兆富 冯亚波

    单位:250012山东医科大学附属医院神经内科

    关键词:癫痫;卡马西平;促甲状腺素释放激素;放射免疫分析

    临床神经病学杂志000408 【摘要】 目的 探讨卡马西平与促甲状腺素释放激素(TRH)抗癫痫作用的相互关系。方法 采用放射免疫分析法测定戊四氮(PTZ)急性致痫大鼠海马内TRH的含量。结果 急性致痫后,海马内TRH表达水平在2小时未见明显变化,48小时显著升高。卡马西平预处理组在痫性发作后48小时海马内TRH表达水平明显升高,与对照组及假模型组相比均有显著性差异。结论 卡马西平能显著升高痫性发作对TRH的诱导表达,TRH与卡马西平的作用可能有重迭效应和添加效应。

    A study on the relationship of antiepileptic effect
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    between carbamazepine and thyrotropin releasing hormone

    Tang Jiyou,Li Xiangping,Chi Zhaofu

    (Department of Neurology, the Affiliated Hospital of Shandong Medical University,Jinan 250012)

    【Abstract】 Objective To investigate the relationship of antiepileptic effect between carbamazepine (CBZ) and thyrotropin releasing hormore(TRH).Methods The content of TRH in hippocampus in rats were examined by radioimmunoassay (RIA) after PTZ-induced seizure.Results After PTZ-induced seizures,there was no obvious change on the expression of TRH in hippocampus in 2 h,but it was significantly elevated in 48 h.The expression of TRH in hippocampus was increased obviously 48 h after seizure in CBZ pretreatment group, there was remarkable difference as compared with the controls and the pseudomodel group.Conclusion CBZ could elevate obviously the expression of TRH after seizure, which suggested the potential overlapping or additive influences of TRH and CBZ.
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    【Key words】 Epilepsy Carbamazepine Thyrotropin releasing hormone Radioimmunoassay

    目前,尽管应用各种抗癫痫药物治疗,但仍有20%~25%的癫痫病人不能被控制[1]。因此,探讨脑本身的抗癫痫机理以及与抗癫痫药物的关系,对于开发新药物来控制难治性癫痫具有重要意义。我们利用急性戊四氮癫痫模型来研究海马促甲状腺素释放激素(TRH)的变化以及与卡马西平的关系,俾为癫痫治疗开辟一条新途径。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 将42只成年健康Wistar鼠(体重为150~250 g,由山东医科大学动物试验中心提供)随机分为两组。Ⅰ组,即戊四氮组(24只),再随机分为4小组(每组6只),即按从给药到处死的时间间隔分为0小时组、2小时组、48小时组和对照组;Ⅱ组,即卡马西平组(18只),再随机分为3小组(每组6只),即卡马西平预处理组、对照组和假模型组。
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    1.2 方法

    1.2.1 模型制作 根据Morgan[2]的方法稍加改进,诱导大鼠产生全身强直-阵挛性癫痫发作,即腹腔内注射戊四氮(50 mg/kg),半小时后再半量注射1次。Ⅰ组,前3小组动物分别于注射戊四氮后0小时、2小时、48小时处死。对照组用生理盐水代替戊四氮。Ⅱ组,卡马西平预处理组:胃管内注入卡马西平混悬液(15 mg/kg,bid),1周后再注射戊四氮;对照组动物用等量生理盐水代替卡马西平;假模型组则以等量生理盐水代替卡马西平和戊四氮。各组动物均在给予戊四氮后48小时处死。

    Racine[4] 五阶段分级法为判断癫痫发作的标准。动物在注射戊四氮后2分钟内便开始发作:首先出现凝视、点头、睑肌阵挛、尾巴翘起,继之双前肢抬起阵挛或后肢伸展,头向左或右扭动,最后出现四肢抽搐、蹦起、跌倒、翻滚,大小便失禁及流涎,常反复发作。每次发作持续1~10分钟不等,1小时后绝大部分动物停止发作。卡马西平预处理组与对照组动物相比,其发作程度减弱,发作持续时间缩短。
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    1.2.2 生化测定 腹腔内注射戊巴比妥钠(40 mg/kg),麻醉成功后,于1分钟内开颅取脑,根据大鼠立体定位图谱将脑组织在冰台上解剖,按自然分部标记取出海马和下丘脑,液氮保存。脑组织样品的预处理:称重后用冷甲醇(1 ml/20 mg脑组织)于玻璃匀浆器中进行匀浆提取,倒出匀浆液,匀浆管再用甲醇洗1次,合并两次甲醇提取液,于4℃离心(12 000 g)10分钟,吸出上清液至测定管中,在水浴37℃中吹干,加250 μl缓冲液重新溶解后再进行放射免疫测定。TRH放免试剂盒由北京中国同位素公司北方免疫试剂研究所提供。卡马西平:100 mg/片,济南制药厂生产。

    1.2.3 统计学处理 放射免疫分析所得的计量资料均经统计学处理,即Ⅰ组资料比较行LSD法t检验,Ⅱ组资料比较行q检验。

    2 结 果

    放射免疫分析结果见表1~2。

, 百拇医药     表1 戊四氮3小组海马和下丘脑TRH含量比较(±s) 组别

    海马湿重

    (mg)

    海马TRH

    (pg/mg)

    下丘脑湿重

    (mg)

    下丘脑TRH

    (pg/mg)

    戊四氮0h组

    140.8±5.9
, 百拇医药
    0.13±0.07

    42.5±4.7

    1.99±0.37

    戊四氮2h组

    141.7±4.2

    0.12±0.04

    41.0±4.0

    2.37±1.65

    戊四氮48h组

    145.5±6.1

    0.21±0.07*

, 百拇医药     44.5±7.1

    1.96±0.77

    对照组

    142.7±5.9

    0.13±0.09

    42.2±4.3

    2.00±0.43

    与对照组相比* P<0.05表2 卡马西平预处理组、对照组及假模型组

    海马TRH含量比较(±s) 组别

    海马湿重
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    (mg)

    海马TRH

    (pg/mg)

    卡马西平预处理组

    140.7±9.8

    0.37±0.04**

    对照组

    143.7±7.9

    0.18±0.09*

    假模型组

    138.5±6.0

    0.11±0.02
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    与假模型组相比*P<0.05;与对照组和假模型组相比**P<0.05

    3 讨 论

    TRH广泛存在于人的中枢神经系统内,除内分泌作用外,尚是与神经系统机能有关的神经递质或神经调质。近年来,国外学者在对诸多的癫痫实验动物模型的研究中发现,痫性发作可诱导TRH基因表达和蛋白质合成在特异性脑组织内一过性升高,其升高程度与癫痫点燃的阶段有关,代表了癫痫发作时体内平衡调节的一个方面,并提出了内源性TRH在与癫痫有关的特异性脑组织中具有抗癫痫功能的假说[5~9]。本研究发现痫性发作后2小时,海马与下丘脑TRH与对照组相比无显著性差异,但48小时后海马的TRH显著高于对照组(P<0.05),为后者的1.6倍,而下丘脑TRH与对照组相比仍无显著性差异,这表明癫痫发作可引起海马内TRH的变化,而不影响下丘脑TRH的浓度。痫性发作引起TRH在相应脑区升高的机理可能包括TRH合成率的增加和/或代谢与释放率的减少。已有研究证实点燃引起区域选择性TRH mRNA水平的增高和TRH受体的减少,后者可能是对TRH活性增高的代偿反应[10]。它的意义被认为是内源性TRH参与痫性发作体内平衡的调节,使兴奋性和抑制性处于动态平衡状态,防止癫痫的进一步发作。其可能的机理是:(1)TRH选择性抑制了大脑皮层神经元的谷氨酸兴奋作用,抗痫作用可能与谷氨酸能兴奋性降低有关。(2)TRH可能是通过增加多巴胺在黑质-纹状体系统的释放来实现对失神样发作和强直发作的抑制。(3)TRH增加去甲肾上腺素(NE)的释放,通过NE抑制癫痫发作。(4)TRH与乙酰胆碱、儿茶酚胺、5-羟色胺、γ-氨基丁酸以及阿片肽有关,参与调节与癫痫有关的中枢神经系统兴奋性的某些方面。
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    卡马西平作为传统的抗癫痫药物,其抗痫作用机理很复杂,也尚不清楚。本研究通过卡马西平预处理组、对照组及假模型组海马TRH含量的比较发现,在全面发作后48小时卡马西平预处理组海马TRH显著性升高,高于对照组及假模型组(P<0.05);对照组海马TRH则显著高于假模型组(P<0.05)。这一研究结果说明卡马西平在治疗剂量可进一步升高癫痫大鼠特异性脑组织内的TRH水平,而TRH被认为具有内源性抗癫痫作用,由此推断卡马西平的抗癫痫作用可能与TRH在痫性发作后特异脑区的升高有关。以上表明卡马西平与TRH的作用可能有重迭效应或添加效应。另外,卡马西平被发现在脊髓神经元培养中可减弱N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)引起的去极化[11],并在小脑颗粒细胞培养中可降低NMDA引起的细胞内Ca2+增加[12]。这些作用都说明TRH在卡马西平预处理组的进一步升高,可能导致了脑内对痫性发作起促进作用的谷氨酸能系统兴奋性的进一步抑制,从而发挥抗癫痫作用。

    参考文献
, 百拇医药
    1,史玉泉主编.实用神经病学.第2版.上海:上海科学技术出版社,1994.803

    2,Morgan JI,Cohem DR, Hempstead JL, et al.Mapping Pattern of c-fos expression in the central nervous system after seizure.Science,1987,237:192

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    5,Kubek MJ,Albert S.Effect of electroconvulsive shock on the content of TRH in rat brain. Life Sci, 1984, 34: 1149

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    8,Kubek MJ,Low WC,Sattin A,et al.Role of TRH in seizure modulation.Ann N Y Acad Sci,1989,553:286

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    10,Kubek MJ, Sharif NA. TRHgene expression and receptors are differentially modified in limbic foci by seizures. Ann Neurol,1993,33:70

    11,Lmape H, Bigalke H.Carbamazepine blocks NMDA-activated currents in cultured spinal cord neurons.Reuro Report,1990,1:26

    12,Cai Z, Mccaslin PP. Amitruptyline, desipramine, cyproheptadine and carbamazepine in concentrations used therapeutically, reduce kainate-and N-methy1-D-aspartate-induced intracellular Ca2+ levels in neuronal culture. Eur J Pharmacol,1992, 219:53

    (收稿1999-09-13 修回2000-04-06), http://www.100md.com