女性系统性红斑狼疮外周血单个核细胞雌激素受体及CD8抗原表达
作者：杜乾君 朱武 谢红付 施为
单位：湖南医科大学附属湘雅医院皮肤科 长沙 410008
关键词：系统性红斑狼疮；雌激素受体；CD8抗原
中国现代医学杂志000507 为进一步阐明性激素对系统性红斑狼疮(SLE)的影响，我们应用免疫组化的方法测定了58例女性SLE患者及30例正常对照外周血单个核细胞(PBMC)雌激素受体(ER)与CD8抗原的表达，结果表明：活动期患者ER与CD8抗原表达百分率均升高，且活动期与非活动期比较，非活动期CD8抗原与ER表达百分率降低(P<0.001)，其ER与CD8抗原表达百分率呈直线正相关(r=0.41,0.0005
分类号 R593.24+1
, 百拇医药
EXPRESSION OF ESTROGEN RECEPTOR AND CD8 ANTIGEN
IN PBMC OF FEMALE PATIENTS OF SYSTEMIC ERYTHEMATOSUS
Du Qianjun, Zhu Wu, Xie Hongfu, Shi Wei
Department of dermatology Xiangya Hospital Hunan Medical University, Changsha 410008
[Abstract]: To investigate the effect of sexual hormone in systemic lupus erythematosus (SLE), the expression of estrogen receptor (ER) and CD8 antigen were examined by immunochemicalassay in 58 patients of SLE and 30 normal controls. The expression rate of ER and CD8 antigen higher in active patients, and a positive linear relationship between expression rate of ER and CD8 antigen (r=0.41, 0.0005
Key words: Systemic lupus erythematosus (SLE); Estrogen receptor (ER); CD8 antigen
系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，目前病因仍不十分清楚，性激素水平异常是其发生发展的重要原因之一，为进一步研究性激素对SLE发病的影响，我们对女性SLE患者外周单个核细胞(PBMC)雌激素受体(ER)及CD8抗原进行了测定，报告如下：
1 材料与方法
1.1 病例选择
女性SLE患者58例均为我科门诊或住院病人，平均年龄(26.3±4.9)岁，均符合美国风湿病学会1982年修订的诊断标准。参照郑敏等的标准[1]将患者分为病情活动组与非活动组，分别为26例，32例。所有入选病例均无内分泌系统疾病病史，且未用过性激素及其它内分泌激素。
, 百拇医药
正常对照：女性健康献血员和本院女性职工，且年龄与月经周期与患者相一致。
1.2 试剂
抗雌激素受体单克隆抗体，抗CD8单克隆抗体，链菌素亲生物蛋白-过氧化酶免疫组化染色试剂盒(S-Pkit)，液体AEC酶底物试剂盒，PBS(0.1M PM7.2)粉剂(以上均为福州迈新生物技术开发公司产品)。
1.3 方法
未闭经患者及正常对照均在月经干净第4～10天上午8～9时抽血(闭经患者抽血日期不限)，无菌抽血2ml，用肝素抗凝后，随即用Ficoll密度梯度离心分离PBMC，用PBS溶液调整细胞浓度为1×105/ml，将细胞悬液滴片，自然干燥后丙酮固定10min，分别按试剂盒提供的方法进行免疫组化染色，检测细胞的ER与CD8抗原[7]。
, 百拇医药
1.4 结果判断标准
在普通光镜下，用四方格网计数，每张玻片计数200个PBMC，主要观察细胞有无紫红色染色，有则为阳性细胞，记录阳性细胞百分率，以
±s%表示。
2 结果
附表 SLE患者PBMC CD8抗原与ER表达百分率 (±s) 组别
例数
CD8抗原
ER
(1)正常对照
, 百拇医药
30
24.32±7.84
P1<0.001
8.24±4.65
(2)SLE(活动期)
26
36.47±10.12
P1<0.001
14.56±8.41
(3)SLE(非活动期)
32
, 百拇医药 32.35±8.64
P3<0.001
8.23±5.08
注：(2)与(1)比较为P<0.001，(3)与(1)比较为P>0.05，(3)与(2)比较为P<0.001
从附表可看出，58例SLE患者与30例正常对照比较其活动期CD8抗原与ER表达百分率均升高，且SLE患者活动期与非活动期比较，非活动期CD8抗原与ER表达百分率降低，经显著性检验P<0.001。同时我们将SLE患者PBMC表达CD8抗原与ER百分率进行相关分析，r=0.41，0.00058 抗原与ER表达百分率存在直线正相关。
3 讨论
, http://www.100md.com
内分泌激素对机体的影响，必须通过其特异性受体才能发生作用，且受体的质量和数量的改变就会影响其作用。因此，研究雌激素受体(ER)的改变将有助于阐明雌激素对SLE发病的作用，本实验应用免疫组化方法检测了58例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)、ER的表达百分率，发现其ER表达百分率高于正常对照，且活动期高于非活动期，结果与张晓等报告的相一致[2]。由于Jacques[3]等报告ER存在于外周血OKT8抗原阳性的T细胞上，而不存在于OKT4抗原阳性细胞上。且OKT8或CD8抗原为T抑制细胞毒(Ts/c)标记抗原，故人们认为雌激素通过抑制Ts/c功能，而使SLE免疫功能亢进的。为更好地说明雌激素在SLE发病中的作用，我们同时测定了患者PBMC表达CD8抗原的百分率，发现CD8抗原表达与ER表达呈直线正相关(r=0.41,0.00058阳性的T细胞，而只是存在于部分CD8抗原阳性T细胞。且Mariana[4]等发现SLE患者的CD8阳性淋巴细胞维持而不是抑制自发性多克隆IgG的产生，同时协同CD8阳性淋巴细胞自身抗体的合成。因此，我们认为雌激素是通过与这部分能够维持或促进自身抗体生成的CD8阳性细胞上的ER结合而产生异常生物学效应而导致SLE发病的。
, 百拇医药
由于SLE患者雌激素代谢存在异常[5]，产生16-α-羟雌酮和17-β-雌二醇增加[6]，这两者在性别相关自身免疫性疾病中起重要作用，以及体内多种细胞因子的影响，这就使SLE发病机制复杂化，至于SLE患者雌激素代谢异常的原因，细胞微环境对ER的影响等将有待进一步研究。
参 考 文 献
1 郑 敏，朱铁城.SLE患者B淋巴细胞增殖功能测定及临床意义.中华皮肤科杂志，1990；23：90～92
2 张 晓，陈顺乐.SLE患者雌激素受体与睾酮及泌乳激素相关性研究.中山医科大学学报，1995；16：63
3 Jacques HM,Cohen ,et al.Sex sleroid receptors in peripheral T cells:Absence of androgen receptors and restriction of estrogen receptors to OKT8-positive cells.The Journal of Immundogy,1983;131(6):2767～2771
, http://www.100md.com
4 Mariana LI,et al.CD8 lymphocytes from patients with systcmic lupus erythematosus sustain,rather than suppress,soontaneous polyclonal IgG production and synergize with CD4 cells to support autoantibody synthesis.Arthritis Rheum,1990;33(8):1216～1225
5 Clark JH.Nuclear binding and retention of the estrogen receptor complex.Endocrinology,1997;100:91
6 Jones SK.The effects of hormonal and other stimulus of cell surface Ro/SSA antigen expression by human keratinxytes in vitro:their possible role in the induction of cutaneous lupus lession.Br J Dermatol,1992;126:554
7 丁 悦，黄东全，陈积圣，等.雌激素受体在胰腺癌中的表达及其临床意义的研究.中国现代医学杂志，1998；8(6)：32～34, http://www.100md.com
单位：湖南医科大学附属湘雅医院皮肤科 长沙 410008
关键词：系统性红斑狼疮；雌激素受体；CD8抗原
中国现代医学杂志000507 为进一步阐明性激素对系统性红斑狼疮(SLE)的影响，我们应用免疫组化的方法测定了58例女性SLE患者及30例正常对照外周血单个核细胞(PBMC)雌激素受体(ER)与CD8抗原的表达，结果表明：活动期患者ER与CD8抗原表达百分率均升高，且活动期与非活动期比较，非活动期CD8抗原与ER表达百分率降低(P<0.001)，其ER与CD8抗原表达百分率呈直线正相关(r=0.41,0.0005
分类号 R593.24+1
, 百拇医药
EXPRESSION OF ESTROGEN RECEPTOR AND CD8 ANTIGEN
IN PBMC OF FEMALE PATIENTS OF SYSTEMIC ERYTHEMATOSUS
Du Qianjun, Zhu Wu, Xie Hongfu, Shi Wei
Department of dermatology Xiangya Hospital Hunan Medical University, Changsha 410008
[Abstract]: To investigate the effect of sexual hormone in systemic lupus erythematosus (SLE), the expression of estrogen receptor (ER) and CD8 antigen were examined by immunochemicalassay in 58 patients of SLE and 30 normal controls. The expression rate of ER and CD8 antigen higher in active patients, and a positive linear relationship between expression rate of ER and CD8 antigen (r=0.41, 0.0005
Key words: Systemic lupus erythematosus (SLE); Estrogen receptor (ER); CD8 antigen
系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，目前病因仍不十分清楚，性激素水平异常是其发生发展的重要原因之一，为进一步研究性激素对SLE发病的影响，我们对女性SLE患者外周单个核细胞(PBMC)雌激素受体(ER)及CD8抗原进行了测定，报告如下：
1 材料与方法
1.1 病例选择
女性SLE患者58例均为我科门诊或住院病人，平均年龄(26.3±4.9)岁，均符合美国风湿病学会1982年修订的诊断标准。参照郑敏等的标准[1]将患者分为病情活动组与非活动组，分别为26例，32例。所有入选病例均无内分泌系统疾病病史，且未用过性激素及其它内分泌激素。
, 百拇医药
正常对照：女性健康献血员和本院女性职工，且年龄与月经周期与患者相一致。
1.2 试剂
抗雌激素受体单克隆抗体，抗CD8单克隆抗体，链菌素亲生物蛋白-过氧化酶免疫组化染色试剂盒(S-Pkit)，液体AEC酶底物试剂盒，PBS(0.1M PM7.2)粉剂(以上均为福州迈新生物技术开发公司产品)。
1.3 方法
未闭经患者及正常对照均在月经干净第4～10天上午8～9时抽血(闭经患者抽血日期不限)，无菌抽血2ml，用肝素抗凝后，随即用Ficoll密度梯度离心分离PBMC，用PBS溶液调整细胞浓度为1×105/ml，将细胞悬液滴片，自然干燥后丙酮固定10min，分别按试剂盒提供的方法进行免疫组化染色，检测细胞的ER与CD8抗原[7]。
, 百拇医药
1.4 结果判断标准
在普通光镜下，用四方格网计数，每张玻片计数200个PBMC，主要观察细胞有无紫红色染色，有则为阳性细胞，记录阳性细胞百分率，以
±s%表示。2 结果
附表 SLE患者PBMC CD8抗原与ER表达百分率 (
±s) 组别例数
CD8抗原
ER
(1)正常对照
, 百拇医药
30
24.32±7.84
P1<0.001
8.24±4.65
(2)SLE(活动期)
26
36.47±10.12
P1<0.001
14.56±8.41
(3)SLE(非活动期)
32
, 百拇医药 32.35±8.64
P3<0.001
8.23±5.08
注：(2)与(1)比较为P<0.001，(3)与(1)比较为P>0.05，(3)与(2)比较为P<0.001
从附表可看出，58例SLE患者与30例正常对照比较其活动期CD8抗原与ER表达百分率均升高，且SLE患者活动期与非活动期比较，非活动期CD8抗原与ER表达百分率降低，经显著性检验P<0.001。同时我们将SLE患者PBMC表达CD8抗原与ER百分率进行相关分析，r=0.41，0.0005
3 讨论
, http://www.100md.com
内分泌激素对机体的影响，必须通过其特异性受体才能发生作用，且受体的质量和数量的改变就会影响其作用。因此，研究雌激素受体(ER)的改变将有助于阐明雌激素对SLE发病的作用，本实验应用免疫组化方法检测了58例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)、ER的表达百分率，发现其ER表达百分率高于正常对照，且活动期高于非活动期，结果与张晓等报告的相一致[2]。由于Jacques[3]等报告ER存在于外周血OKT8抗原阳性的T细胞上，而不存在于OKT4抗原阳性细胞上。且OKT8或CD8抗原为T抑制细胞毒(Ts/c)标记抗原，故人们认为雌激素通过抑制Ts/c功能，而使SLE免疫功能亢进的。为更好地说明雌激素在SLE发病中的作用，我们同时测定了患者PBMC表达CD8抗原的百分率，发现CD8抗原表达与ER表达呈直线正相关(r=0.41,0.0005
, 百拇医药
由于SLE患者雌激素代谢存在异常[5]，产生16-α-羟雌酮和17-β-雌二醇增加[6]，这两者在性别相关自身免疫性疾病中起重要作用，以及体内多种细胞因子的影响，这就使SLE发病机制复杂化，至于SLE患者雌激素代谢异常的原因，细胞微环境对ER的影响等将有待进一步研究。
参 考 文 献
1 郑 敏，朱铁城.SLE患者B淋巴细胞增殖功能测定及临床意义.中华皮肤科杂志，1990；23：90～92
2 张 晓，陈顺乐.SLE患者雌激素受体与睾酮及泌乳激素相关性研究.中山医科大学学报，1995；16：63
3 Jacques HM,Cohen ,et al.Sex sleroid receptors in peripheral T cells:Absence of androgen receptors and restriction of estrogen receptors to OKT8-positive cells.The Journal of Immundogy,1983;131(6):2767～2771
, http://www.100md.com
4 Mariana LI,et al.CD8 lymphocytes from patients with systcmic lupus erythematosus sustain,rather than suppress,soontaneous polyclonal IgG production and synergize with CD4 cells to support autoantibody synthesis.Arthritis Rheum,1990;33(8):1216～1225
5 Clark JH.Nuclear binding and retention of the estrogen receptor complex.Endocrinology,1997;100:91
6 Jones SK.The effects of hormonal and other stimulus of cell surface Ro/SSA antigen expression by human keratinxytes in vitro:their possible role in the induction of cutaneous lupus lession.Br J Dermatol,1992;126:554
7 丁 悦，黄东全，陈积圣，等.雌激素受体在胰腺癌中的表达及其临床意义的研究.中国现代医学杂志，1998；8(6)：32～34, http://www.100md.com