人乳头状瘤病毒感染与宫颈癌预后的关系
作者：陈亦乐 王静 陈森林 刘保安 吴晓英 张淑安 彭隆祥
单位：陈亦乐(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；王静(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；陈森林(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；刘保安(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；吴晓英(湖南医科大学电镜中心，中国 湖南 长沙 410078)；张淑安(湖南医科大学电镜中心，中国 湖南 长沙 410078)；彭隆祥(湖南医科大学电镜中心，中国 湖南 长沙 410078)
关键词：乳头状瘤病毒，人；宫颈肿瘤；病毒学；肿瘤病毒感染；预后
湖南医学000506[摘 要]目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌预后的关 系 ，揭示HPV的可能致癌作用。方法用原位杂交的方法测定每例癌组织中HPV的表达，用统 计方法比较不同生存率组HPV阳性率的差异，分析HPV感染对预后的影响。结果在94例 经手术、化疗等治疗宫颈癌患者中，存活10年以下患者组(44例)的HPV阳性率远远高于10年 以上(50例)的 患者组(P<0.01)。比较临床分期为Ⅱb患者，存活10年以内33例患者HPV阳性率明 显高于存活10年以上的35例(P<0.01)。结论HPV感染与宫颈癌预后密切相关，HPV阳 性者预后差。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号]1001-9421(2000)05-0332-03
Relationship Between the Infection of HPV and the
Prognosis of Cer vical Cancer
CHEN Yi-le, WAN Jin
(Department of Female Tumors, Hunan Provincial Tumor Hospital, Changsha, 410 0 06, China)
WU Xiao-ying
(The Center of Electronic Microscopy, Hunan Medical University, Changsha, 410078, China.)
, 百拇医药
[Abstract]Objective To study the relation between the in fection of human papilloma virus (HPV) and the prognosis of cervical canc er ,exploring the possible carcinogenesis of HPV. Methods The expressions of HPV16/18 DNA in cervical cancers were estimated by in situ hybridization, then the relation between the positive rate of HPV16/18 DNA and the prognosis of cervical cancer was compared in different survival groups. ResultsNin ty-four patients with cervical cancer were treated by operation and chemotherap y. The positive rate of HPV16/18 DNA in patients whose survival time were be low 10 years (44 cases) was significantly higher than those whose survival time were over 10 years (50 cases)(P<0.01). Among the patients classified as c linical stage Ⅱb, the positive rate of HPV16/18 DNA in those with survi val time below 10 years (33 cases) was significantly higher than those whose sur vival time were over 10 years (35 cases)(P<0.01).Conclusions The infecti on of HPV is closely correlated with prognosis of cervical cancer. The pati ents showing positive rate of HPV 16/18 DNA tend to have poor prognosi s.
, 百拇医药
[Key Words] papillom avirus,human; cervix neoplasms/VI ; tumor virus infections; prognosis
宫颈癌是威胁妇女健康，导致死亡的主要恶性肿瘤之一。很多资料表明，宫 颈癌的发生与病毒感染有关，且近年研究证实在宫颈癌及癌前病变中存在人乳头状瘤病毒( HPV)，但HPV 致癌依据及机理尚不明了，它对宫颈癌的预后有何 影响尚未见文献报道。本文应用生物素标记的HPV-DNA探针在石蜡切片上作原位杂交，探讨 HPV的表达及其感染率与宫颈癌预后的关系，为宫颈癌的防治提供新线索。
1 材料与方法
1.1 临床资料 全部观察对象系湖南省肿瘤医院1985年2月至1986年2月宫 颈癌住院患者共94例。按国际妇产科协会(FIGO)1971年修订的宫颈癌临床分期标准，本组病 例中0期1例，Ⅰ期18例(Ⅰa 1例、Ⅰb 17例)，Ⅱ期60例(Ⅱa 2例、Ⅱ b 58例)，Ⅲ期5例(Ⅲa 1例、Ⅲb 4例)。治疗依照患者的临床分期和机体状况，分别采用根治性 放疗、放疗加化疗或子宫广泛切除加盆腔淋巴结清扫。本组经连续追踪超过10年。
, 百拇医药
1.2 标本采取 采集治疗前均经病理活检诊断为宫颈癌(腺癌8例， 鳞癌86例)的石蜡块。
1.3 方法 常规DNA分子原位杂交法[1]，探针抗体及显色药盒由Be ckmoun Coulter 公司提供。选择免疫组化HPV结构抗原阳性的宫颈湿疣切片作阳性对照，正常皮肤 为阴性对照。HPV 16/18 阳性判断标准：至少一个细胞核内出现棕色颗粒，阳性级别10%～ 33%为+，34%～66%
，>66%为
；观察全部切片无阳性细胞为阴性。
1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 HPV-DNA 16/18 原位杂交 94例标本均同时用HPV-DNA 16/18 探针 进行杂交。镜下阳性细胞及阴性细胞区分清楚，杂交产物均出现于上皮细胞内，可见阳性颗 粒充满增大的细胞核(附图)，间质细胞无阳性表现。
, 百拇医药
2.2 HPV感染率与患者预后的关系 患者按不同生存年限进行分组，比较各 组间HPV阳性率的差异。A组(患者存活年限5年以内)与B组(生存年≥5年，<10年)HPV阳性率 比较差异无显著性(χ2=1.057，P>0.05)；而C组(存活年限<10年)与D组(存活年 限≥10年)HPV阳性率间差异有显著性(χ2=10.142,P<0.01)。见表1。
表1 不同生存年限组宫颈癌患者的HPV-DNA 16/18
杂交阳性 结果比较(例，%) 组别
生存年
例数
HPV阳性
A组
, 百拇医药
<5
34
26(76.48)
B组
5～10
10
6(60.00)
C组
<10
44
32(72.70)
D组
≥10
, 百拇医药
50
20(40.00)
按患者的临床分期，各组均以Ⅱb的例数较多，仍按上述生存年限分组 比较HP V阳性率的组间差异。结果表明，A组与B组的HPV阳性率无显著性(P>0.05)，而C组与D组 间HPV阳性率差异有显著性(P<0.01)。见表2。表2 不同生存年限组Ⅱb期宫颈癌患者HPV-DNA 16/18
杂交阳性结果比较(例，%) 组别
生存年
例数
HPV阳性
A组
<5
, 百拇医药
28
18(64.29)
B组
5～10
5
3(60.00)
C组
<10
33
21(63.64)
D组
≥10
35
, http://www.100md.com
14(46.00)
3 讨论
宫颈癌的病因研究一直处于探索阶段，随着分子生物学技术的发展，许多研究已证 实HPV与宫颈癌的发生有关，在宫颈癌及癌前病变中存在HPV[2，4]。通过DNA序列 分析鉴定，人宫颈感染HPV的亚型是HPV6，11，16，18，31，33，35，39，42九型，其中以H PV16，18两型与宫颈癌关系最密切[4]。本文采用生物素标记的HPV16/18探针作原 位杂交，检测94例宫颈癌HPV感染状况，其总阳性率为55.32%，其中生存10年以下患者的HPV 阳性率为72.7%，与文献报道基本一致[4]。宫颈癌患者HPV感染的高阳性率说明HPV 感染是宫颈癌发生的高危因素之一。
为研究HPV感染对宫颈癌患者预后的影响，本文以不同生存年限进行分组比较，5年以内生存 年限的A组与存活5～10年的B组间HPV阳性差异无显著性，可能系B组病例太少难以显示整体 差异。但10年以下生存年限的C组(A+B)与生存10以上的D组比较，C组的HPV阳性率远远高于D 组(P<0.01)。同样分组比较临床分期均为Ⅱb的患者，结果也是C组的HPV阳性率 远远高于D组。这说明HPV的感染率愈高，则宫颈癌的生存年限愈低，预后愈差；也说明HPV 感染者，抵抗力差，对治疗的敏感性降低。这可能系HPV破坏了患者的免疫系统，降低了患 者的抵抗力所致，但有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
HPV影响宫颈癌患者的抵抗力及其预后的机理尚不明了。有文献报道，HPV感染时，宫颈的La ngerhans细胞(简称LC)也常减少[6，7]，而宫颈LC的减少可削弱机体对外来抗原的 特异性免疫应答能力，导致宫颈呈局部获得性免疫缺陷。宫颈LC的减少及局部免疫缺陷使潜 在恶变的细胞在机体免疫应答缺如或低下的状态下进一步发展为宫颈癌。故HPV感染宫颈癌 患者预后较差，生存年限低。
同时，国外研究也发现在HIV感染的患者中，宫颈HPV阳性患者更常见[8]，由此推 断在宫颈癌与免疫活性的关系中，HIV感染仅仅是普遍概念中的一个极端例子。1986年Carso n等观察研究20例生殖道湿疣与肿瘤的HPV-DNA感染状况，亦发现了宿主免疫活性与病毒特 别是HPV感染之间存在某种关系[9]。本文通过多年追踪观察、比较，证实HPV感染 对患者预后有不良影响，这对防治HPV感染，预防、治疗宫颈癌，改善其的预后均有着重要 的临床意义。
, 百拇医药
[基金项目] 湖南省卫生厅资助课题
[作者简介] 陈亦乐(1956-)，女，湖南 汉寿县人，医学学士，主任医师，毕业后一直从事妇科肿瘤专业临床工作。
[参 考 文 献]
[1] 张志胜，吴宜林，徐立礼，等.应用生物学标记人类乳头状瘤病毒 DNA探针进行原位杂交的研究[J].中华妇产科杂志，1992，6(27)：298-299.
[2] Coleman D,Richam PI.Human papillomavirus infection and c ancer of uterine cervix[J].J Pathol,1985,145(3):207-212.
[3] Richart RM.Cause and management of cervical intraepithelial neopla sia[J].Cancer，1987,60(8):1951-1959.
, 百拇医药
[4] 蔡红岳，陈惠祯，黄树林.子宫颈癌组织中乳头状瘤病毒及巨细胞病毒的研 究[J].中华妇产科杂志，1992，4(27)：230-232.
[5] Rellihan MA,Dooley DP,Burke TW,et al.Rapidly progres sing cervical cancer in a patient with human immunodeficiency virus infection[J ].Gynecol Oncol,1990,36:435-438.
[6] Nakano T,Kuniyuki O,Takahashi T,et al.Roles of langerhans' cel l and T-lymphocytes infiltration cancer tissues in patients treated by radiation therapy for cervical cancer[J].Cancer,1992,70(12):2839-2844.
, 百拇医药
[7] Northfelt DW.Cervical and anal neoplasia and HPV infection in pers on with HIV infection[J].Oncology,1990,8:337.
[8] Carso LF,Twigg LB,Fukrshima M,et al.Human genital papilloma in fections:an evaluation of immunotogic competence in the genital neoplasia papill oma syndrome[J].Am J Obstet Gynecol,1986,25:61-64.
[收稿日期] 2000-05-10, http://www.100md.com
单位：陈亦乐(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；王静(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；陈森林(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；刘保安(湖南省肿瘤医院，中国湖南 长沙 410006)；吴晓英(湖南医科大学电镜中心，中国 湖南 长沙 410078)；张淑安(湖南医科大学电镜中心，中国 湖南 长沙 410078)；彭隆祥(湖南医科大学电镜中心，中国 湖南 长沙 410078)
关键词：乳头状瘤病毒，人；宫颈肿瘤；病毒学；肿瘤病毒感染；预后
湖南医学000506[摘 要]目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌预后的关 系 ，揭示HPV的可能致癌作用。方法用原位杂交的方法测定每例癌组织中HPV的表达，用统 计方法比较不同生存率组HPV阳性率的差异，分析HPV感染对预后的影响。结果在94例 经手术、化疗等治疗宫颈癌患者中，存活10年以下患者组(44例)的HPV阳性率远远高于10年 以上(50例)的 患者组(P<0.01)。比较临床分期为Ⅱb患者，存活10年以内33例患者HPV阳性率明 显高于存活10年以上的35例(P<0.01)。结论HPV感染与宫颈癌预后密切相关，HPV阳 性者预后差。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号]1001-9421(2000)05-0332-03
Relationship Between the Infection of HPV and the
Prognosis of Cer vical Cancer
CHEN Yi-le, WAN Jin
(Department of Female Tumors, Hunan Provincial Tumor Hospital, Changsha, 410 0 06, China)
WU Xiao-ying
(The Center of Electronic Microscopy, Hunan Medical University, Changsha, 410078, China.)
, 百拇医药
[Abstract]Objective To study the relation between the in fection of human papilloma virus (HPV) and the prognosis of cervical canc er ,exploring the possible carcinogenesis of HPV. Methods The expressions of HPV16/18 DNA in cervical cancers were estimated by in situ hybridization, then the relation between the positive rate of HPV16/18 DNA and the prognosis of cervical cancer was compared in different survival groups. ResultsNin ty-four patients with cervical cancer were treated by operation and chemotherap y. The positive rate of HPV16/18 DNA in patients whose survival time were be low 10 years (44 cases) was significantly higher than those whose survival time were over 10 years (50 cases)(P<0.01). Among the patients classified as c linical stage Ⅱb, the positive rate of HPV16/18 DNA in those with survi val time below 10 years (33 cases) was significantly higher than those whose sur vival time were over 10 years (35 cases)(P<0.01).Conclusions The infecti on of HPV is closely correlated with prognosis of cervical cancer. The pati ents showing positive rate of HPV 16/18 DNA tend to have poor prognosi s.
, 百拇医药
[Key Words] papillom avirus,human; cervix neoplasms/VI ; tumor virus infections; prognosis
宫颈癌是威胁妇女健康，导致死亡的主要恶性肿瘤之一。很多资料表明，宫 颈癌的发生与病毒感染有关，且近年研究证实在宫颈癌及癌前病变中存在人乳头状瘤病毒( HPV)，但HPV 致癌依据及机理尚不明了，它对宫颈癌的预后有何 影响尚未见文献报道。本文应用生物素标记的HPV-DNA探针在石蜡切片上作原位杂交，探讨 HPV的表达及其感染率与宫颈癌预后的关系，为宫颈癌的防治提供新线索。
1 材料与方法
1.1 临床资料 全部观察对象系湖南省肿瘤医院1985年2月至1986年2月宫 颈癌住院患者共94例。按国际妇产科协会(FIGO)1971年修订的宫颈癌临床分期标准，本组病 例中0期1例，Ⅰ期18例(Ⅰa 1例、Ⅰb 17例)，Ⅱ期60例(Ⅱa 2例、Ⅱ b 58例)，Ⅲ期5例(Ⅲa 1例、Ⅲb 4例)。治疗依照患者的临床分期和机体状况，分别采用根治性 放疗、放疗加化疗或子宫广泛切除加盆腔淋巴结清扫。本组经连续追踪超过10年。
, 百拇医药
1.2 标本采取 采集治疗前均经病理活检诊断为宫颈癌(腺癌8例， 鳞癌86例)的石蜡块。
1.3 方法 常规DNA分子原位杂交法[1]，探针抗体及显色药盒由Be ckmoun Coulter 公司提供。选择免疫组化HPV结构抗原阳性的宫颈湿疣切片作阳性对照，正常皮肤 为阴性对照。HPV 16/18 阳性判断标准：至少一个细胞核内出现棕色颗粒，阳性级别10%～ 33%为+，34%～66%
，>66%为；观察全部切片无阳性细胞为阴性。1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 HPV-DNA 16/18 原位杂交 94例标本均同时用HPV-DNA 16/18 探针 进行杂交。镜下阳性细胞及阴性细胞区分清楚，杂交产物均出现于上皮细胞内，可见阳性颗 粒充满增大的细胞核(附图)，间质细胞无阳性表现。
, 百拇医药
2.2 HPV感染率与患者预后的关系 患者按不同生存年限进行分组，比较各 组间HPV阳性率的差异。A组(患者存活年限5年以内)与B组(生存年≥5年，<10年)HPV阳性率 比较差异无显著性(χ2=1.057，P>0.05)；而C组(存活年限<10年)与D组(存活年 限≥10年)HPV阳性率间差异有显著性(χ2=10.142,P<0.01)。见表1。
表1 不同生存年限组宫颈癌患者的HPV-DNA 16/18
杂交阳性 结果比较(例，%) 组别
生存年
例数
HPV阳性
A组
, 百拇医药
<5
34
26(76.48)
B组
5～10
10
6(60.00)
C组
<10
44
32(72.70)
D组
≥10
, 百拇医药
50
20(40.00)
按患者的临床分期，各组均以Ⅱb的例数较多，仍按上述生存年限分组 比较HP V阳性率的组间差异。结果表明，A组与B组的HPV阳性率无显著性(P>0.05)，而C组与D组 间HPV阳性率差异有显著性(P<0.01)。见表2。表2 不同生存年限组Ⅱb期宫颈癌患者HPV-DNA 16/18
杂交阳性结果比较(例，%) 组别
生存年
例数
HPV阳性
A组
<5
, 百拇医药
28
18(64.29)
B组
5～10
5
3(60.00)
C组
<10
33
21(63.64)
D组
≥10
35
, http://www.100md.com
14(46.00)
3 讨论
宫颈癌的病因研究一直处于探索阶段，随着分子生物学技术的发展，许多研究已证 实HPV与宫颈癌的发生有关，在宫颈癌及癌前病变中存在HPV[2，4]。通过DNA序列 分析鉴定，人宫颈感染HPV的亚型是HPV6，11，16，18，31，33，35，39，42九型，其中以H PV16，18两型与宫颈癌关系最密切[4]。本文采用生物素标记的HPV16/18探针作原 位杂交，检测94例宫颈癌HPV感染状况，其总阳性率为55.32%，其中生存10年以下患者的HPV 阳性率为72.7%，与文献报道基本一致[4]。宫颈癌患者HPV感染的高阳性率说明HPV 感染是宫颈癌发生的高危因素之一。
为研究HPV感染对宫颈癌患者预后的影响，本文以不同生存年限进行分组比较，5年以内生存 年限的A组与存活5～10年的B组间HPV阳性差异无显著性，可能系B组病例太少难以显示整体 差异。但10年以下生存年限的C组(A+B)与生存10以上的D组比较，C组的HPV阳性率远远高于D 组(P<0.01)。同样分组比较临床分期均为Ⅱb的患者，结果也是C组的HPV阳性率 远远高于D组。这说明HPV的感染率愈高，则宫颈癌的生存年限愈低，预后愈差；也说明HPV 感染者，抵抗力差，对治疗的敏感性降低。这可能系HPV破坏了患者的免疫系统，降低了患 者的抵抗力所致，但有待进一步探讨。
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HPV影响宫颈癌患者的抵抗力及其预后的机理尚不明了。有文献报道，HPV感染时，宫颈的La ngerhans细胞(简称LC)也常减少[6，7]，而宫颈LC的减少可削弱机体对外来抗原的 特异性免疫应答能力，导致宫颈呈局部获得性免疫缺陷。宫颈LC的减少及局部免疫缺陷使潜 在恶变的细胞在机体免疫应答缺如或低下的状态下进一步发展为宫颈癌。故HPV感染宫颈癌 患者预后较差，生存年限低。
同时，国外研究也发现在HIV感染的患者中，宫颈HPV阳性患者更常见[8]，由此推 断在宫颈癌与免疫活性的关系中，HIV感染仅仅是普遍概念中的一个极端例子。1986年Carso n等观察研究20例生殖道湿疣与肿瘤的HPV-DNA感染状况，亦发现了宿主免疫活性与病毒特 别是HPV感染之间存在某种关系[9]。本文通过多年追踪观察、比较，证实HPV感染 对患者预后有不良影响，这对防治HPV感染，预防、治疗宫颈癌，改善其的预后均有着重要 的临床意义。
, 百拇医药
[基金项目] 湖南省卫生厅资助课题
[作者简介] 陈亦乐(1956-)，女，湖南 汉寿县人，医学学士，主任医师，毕业后一直从事妇科肿瘤专业临床工作。
[参 考 文 献]
[1] 张志胜，吴宜林，徐立礼，等.应用生物学标记人类乳头状瘤病毒 DNA探针进行原位杂交的研究[J].中华妇产科杂志，1992，6(27)：298-299.
[2] Coleman D,Richam PI.Human papillomavirus infection and c ancer of uterine cervix[J].J Pathol,1985,145(3):207-212.
[3] Richart RM.Cause and management of cervical intraepithelial neopla sia[J].Cancer，1987,60(8):1951-1959.
, 百拇医药
[4] 蔡红岳，陈惠祯，黄树林.子宫颈癌组织中乳头状瘤病毒及巨细胞病毒的研 究[J].中华妇产科杂志，1992，4(27)：230-232.
[5] Rellihan MA,Dooley DP,Burke TW,et al.Rapidly progres sing cervical cancer in a patient with human immunodeficiency virus infection[J ].Gynecol Oncol,1990,36:435-438.
[6] Nakano T,Kuniyuki O,Takahashi T,et al.Roles of langerhans' cel l and T-lymphocytes infiltration cancer tissues in patients treated by radiation therapy for cervical cancer[J].Cancer,1992,70(12):2839-2844.
, 百拇医药
[7] Northfelt DW.Cervical and anal neoplasia and HPV infection in pers on with HIV infection[J].Oncology,1990,8:337.
[8] Carso LF,Twigg LB,Fukrshima M,et al.Human genital papilloma in fections:an evaluation of immunotogic competence in the genital neoplasia papill oma syndrome[J].Am J Obstet Gynecol,1986,25:61-64.
[收稿日期] 2000-05-10, http://www.100md.com