博唯优单抗法Coombs试验的临床应用
作者：李代渝 罗光弟 雷丽明 赵华
单位：李代渝(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)；罗光弟(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)；雷丽明(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)；赵华(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)
关键词：
临床血液学杂志000516 A、B、O血型及其亚型、Rh血型不合或自身免疫性因素会导致 患者体内产生抗红细胞不完全抗体。过去，临床常用试管抗人球蛋白法和木瓜蛋白酶法检测 红细胞表面(直接反应)和血清中(间接反应)的不完全免疫球蛋白G(IgG)，但结果常不理想。 为此，本文采用博唯优柱凝聚单抗法(以下简称Biovue法)替代常规的试管抗人球蛋白法，经 108例患者临床应用，效果满意，现报告如下。
, http://www.100md.com 1 资料与方法
1.1 一般资料
收集我院1998～1999年住院患者血液标本108例，其中自身免疫性溶血性贫血(简称自免溶贫 )59例，新生儿溶血性贫血(简称新生儿溶贫)18例，系统性红斑狼疮(SLE)31例。
1.2 测试方法
采用博唯优柱凝聚血型分析系统，含气流恒温器和变速离心机各一台(美国强生公司产品)、 博唯优单抗试剂卡及标准红细胞(批号AHC 589 A～605 B，美国澳斯邦公司产品)。选用抗人 IgG抗体、木瓜蛋白酶、抗Rh(D)抗体IgG试剂(批号为9704121和9805181等，南京生物化学研 究所和成都生物制品研究所提供)。
取被检者血液标本2 ml，肝素抗凝，以3 000 r/min速度离心5 min，分离红细胞和血浆。取 40 μl红细胞加入1 ml生理盐水中，配成3%悬液用于Coombs直接法；血浆用于Coombs间接 法。
, 百拇医药
直接法：取待检测3%红细胞悬液10 μl，加入凝聚柱反应腔，变速离心5 min(前2 min按80 0 r/min速度离心，让红细胞通过液体层，并发生抗原体反应；后3 min按1 500 r/min速度 离心，将未凝聚的红细胞压入“V”形底)。
间接法：取待检测血清(浆)40 μl、相对应的3%试剂红细胞悬液10 μl及低离子液25 μl， 加于反应腔中，在37℃气流恒温中置放10 min，用离心机离心5 min。
试管抗人蛋白法和试管木瓜蛋白酶法操作步骤见《全国临床检验操作规程》1997.P.97和《 血型与血库》，1997.1。
1.3 结果判定
阴性反应：所有红细胞穿过玻球间隙到达“V”形底。
阳性反应：红细胞凝结在玻球柱上层或分布在玻球柱之间，根据凝结强度可分为++++，+++ ，++，+。
, http://www.100md.com
2 结果
三种方法的不完全抗体直接反应和间接反应结果见表1和表2。
表1 三种方法的不完全抗体直接反应结果
例(%) 病组
n
Bi ovue法
抗人球蛋白法
木瓜蛋白酶法
P值
自免溶贫
59
5 2(88.0)
, 百拇医药
28(47.0)
30(50.8)
<0.01
新生儿溶贫
18
12(66.0)
3(16.6)
2(11.0)
<0.01
SLE
31
16(51.0)
, http://www.100md.com 1(3.2)
3(9.6)
<0.01
合计
108
80(74.0)
32(29.0)
35(32.0)
<0.01
用χ2检验三种方法的比较表2 三种方法的不完全抗体间接反应结果
例(%) 病组
, http://www.100md.com n
Biovue法
抗人球蛋白法
木瓜蛋白酶法
P值
自免疫贫
59
2 1(35.6)
9(15.2)
10(16.9)
<0.01
新生儿溶贫
, 百拇医药 18
10(55.6)
4(22.2)
2(11.1)
<0.01
SLE
31
14(45.1)
2(6.5)
3(9.6)
<0.01
合计
108
, 百拇医药
45(41.6)
15(13.8)
15(13.8)
<0.01
用χ2检验三种方法的比较 从表1和表2可见，Biovue法无论是Coombs试验直接法还是间接法，均优于传 统试管抗人球蛋白法和试管木瓜蛋白酶法。Biovue试验直接法总阳性率为74.0%，抗人球蛋白法为29.0%，木瓜蛋白酶法为32.0%，经χ2检验 ，Biovue试验直接法与其他两种方法对比差异有显著性意义(P<0.01)。Biovue试验 间接法总阳性率为41.6%，其他两种方法总阳性率均为13.8%，经χ2检验，Bio vue间接法与其他两种方法差异有显著性意义(P<0.01)，表明Biovue法比传统方法 更灵敏。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 Biovue法测定原理
Biovue法测定原理基于Coombs等所描述的人血清组分对应的抗体和Landsteiners所描述的凝 结原理。具体测定原理见图1。从图1可见，密度梯度液层内含有鼠抗人IgG单克隆抗体，可 阻挡血清或血浆中的杂蛋白，仅让红细胞通过，并有洗涤细胞的作用。微小玻球层内充满均 匀、细小的玻珠，间隙仅让分散的细胞通过，到达“V”形底。若细胞凝聚，则被挡在玻球 层上部而不能到达柱底部。
3.2 Biovue法优势
分析Biovue法优于其他两种方法的原因可能是：①Biovue法采用了单克隆抗体，纯度和浓度 均高， 容易捕获相应抗原。②Biovue法密度梯度液层具有洗涤红细胞、防止杂蛋白混入干扰的作用 ，易暴露靶抗原。③微小玻球层使凝结红细胞更加易于判断。可见，Biovue法是理想的Coom bs试验替代法，值得推广应用。
图1 Biovue法测定原理图示
①反应腔；②密度梯度液层；③微小玻球层；④V形底
(编辑 王铨)
(收稿 2000-01-19 修回 2000-05-04), 百拇医药
单位：李代渝(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)；罗光弟(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)；雷丽明(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)；赵华(泸州医学院附属医院输血科、检验科 四川泸 州，646000)
关键词：
临床血液学杂志000516 A、B、O血型及其亚型、Rh血型不合或自身免疫性因素会导致 患者体内产生抗红细胞不完全抗体。过去，临床常用试管抗人球蛋白法和木瓜蛋白酶法检测 红细胞表面(直接反应)和血清中(间接反应)的不完全免疫球蛋白G(IgG)，但结果常不理想。 为此，本文采用博唯优柱凝聚单抗法(以下简称Biovue法)替代常规的试管抗人球蛋白法，经 108例患者临床应用，效果满意，现报告如下。
, http://www.100md.com 1 资料与方法
1.1 一般资料
收集我院1998～1999年住院患者血液标本108例，其中自身免疫性溶血性贫血(简称自免溶贫 )59例，新生儿溶血性贫血(简称新生儿溶贫)18例，系统性红斑狼疮(SLE)31例。
1.2 测试方法
采用博唯优柱凝聚血型分析系统，含气流恒温器和变速离心机各一台(美国强生公司产品)、 博唯优单抗试剂卡及标准红细胞(批号AHC 589 A～605 B，美国澳斯邦公司产品)。选用抗人 IgG抗体、木瓜蛋白酶、抗Rh(D)抗体IgG试剂(批号为9704121和9805181等，南京生物化学研 究所和成都生物制品研究所提供)。
取被检者血液标本2 ml，肝素抗凝，以3 000 r/min速度离心5 min，分离红细胞和血浆。取 40 μl红细胞加入1 ml生理盐水中，配成3%悬液用于Coombs直接法；血浆用于Coombs间接 法。
, 百拇医药
直接法：取待检测3%红细胞悬液10 μl，加入凝聚柱反应腔，变速离心5 min(前2 min按80 0 r/min速度离心，让红细胞通过液体层，并发生抗原体反应；后3 min按1 500 r/min速度 离心，将未凝聚的红细胞压入“V”形底)。
间接法：取待检测血清(浆)40 μl、相对应的3%试剂红细胞悬液10 μl及低离子液25 μl， 加于反应腔中，在37℃气流恒温中置放10 min，用离心机离心5 min。
试管抗人蛋白法和试管木瓜蛋白酶法操作步骤见《全国临床检验操作规程》1997.P.97和《 血型与血库》，1997.1。
1.3 结果判定
阴性反应：所有红细胞穿过玻球间隙到达“V”形底。
阳性反应：红细胞凝结在玻球柱上层或分布在玻球柱之间，根据凝结强度可分为++++，+++ ，++，+。
, http://www.100md.com
2 结果
三种方法的不完全抗体直接反应和间接反应结果见表1和表2。
表1 三种方法的不完全抗体直接反应结果
例(%) 病组
n
Bi ovue法
抗人球蛋白法
木瓜蛋白酶法
P值
自免溶贫
59
5 2(88.0)
, 百拇医药
28(47.0)
30(50.8)
<0.01
新生儿溶贫
18
12(66.0)
3(16.6)
2(11.0)
<0.01
SLE
31
16(51.0)
, http://www.100md.com 1(3.2)
3(9.6)
<0.01
合计
108
80(74.0)
32(29.0)
35(32.0)
<0.01
用χ2检验三种方法的比较表2 三种方法的不完全抗体间接反应结果
例(%) 病组
, http://www.100md.com n
Biovue法
抗人球蛋白法
木瓜蛋白酶法
P值
自免疫贫
59
2 1(35.6)
9(15.2)
10(16.9)
<0.01
新生儿溶贫
, 百拇医药 18
10(55.6)
4(22.2)
2(11.1)
<0.01
SLE
31
14(45.1)
2(6.5)
3(9.6)
<0.01
合计
108
, 百拇医药
45(41.6)
15(13.8)
15(13.8)
<0.01
用χ2检验三种方法的比较 从表1和表2可见，Biovue法无论是Coombs试验直接法还是间接法，均优于传 统试管抗人球蛋白法和试管木瓜蛋白酶法。Biovue试验直接法总阳性率为74.0%，抗人球蛋白法为29.0%，木瓜蛋白酶法为32.0%，经χ2检验 ，Biovue试验直接法与其他两种方法对比差异有显著性意义(P<0.01)。Biovue试验 间接法总阳性率为41.6%，其他两种方法总阳性率均为13.8%，经χ2检验，Bio vue间接法与其他两种方法差异有显著性意义(P<0.01)，表明Biovue法比传统方法 更灵敏。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 Biovue法测定原理
Biovue法测定原理基于Coombs等所描述的人血清组分对应的抗体和Landsteiners所描述的凝 结原理。具体测定原理见图1。从图1可见，密度梯度液层内含有鼠抗人IgG单克隆抗体，可 阻挡血清或血浆中的杂蛋白，仅让红细胞通过，并有洗涤细胞的作用。微小玻球层内充满均 匀、细小的玻珠，间隙仅让分散的细胞通过，到达“V”形底。若细胞凝聚，则被挡在玻球 层上部而不能到达柱底部。
3.2 Biovue法优势
分析Biovue法优于其他两种方法的原因可能是：①Biovue法采用了单克隆抗体，纯度和浓度 均高， 容易捕获相应抗原。②Biovue法密度梯度液层具有洗涤红细胞、防止杂蛋白混入干扰的作用 ，易暴露靶抗原。③微小玻球层使凝结红细胞更加易于判断。可见，Biovue法是理想的Coom bs试验替代法，值得推广应用。
图1 Biovue法测定原理图示
①反应腔；②密度梯度液层；③微小玻球层；④V形底
(编辑 王铨)
(收稿 2000-01-19 修回 2000-05-04), 百拇医药