穿心草*酮抗氧化作用初探
作者:杨东梅 唐孝礼 张奕强 许实波
单位:中山大学生命科学学院药学系 广州 510275
关键词:穿心草;酮丙二醛;脂质过氧化;O÷2;OH
中草药000521穿心草酮抗氧化作用初探
摘 要 以正常大鼠组织匀浆、线粒体为材料研究穿心草酮(1,6-二羟基-3,5-二甲氧基酮,Canscora Xanthon, CX)抗脂质过氧化作用。以丙二醛(MDA)为指标,观察CX对组织匀浆、线粒体体外脂质过氧化产物MDA生成量的影响。以吸光度(A)值为指标,观察CX对邻苯三酚自氧化产生的O÷2及Cu2+-Vit C自由基产生系统产生的.OH的清除作用。结果CX抑制正常大鼠脑、肝、心、肾匀浆的体外过氧化脂质生成,抑制Vit C和FeSO4激发的线粒体膨胀。提示CX能清除O÷2,.OH。
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穿心草Canscora lucidissima(Levl. et Vant.) Hand.-Mazz.分布于广东、广西等地,资源丰富。民间全草常用来治疗肝炎、黄疸、胃痛等疾患[1]。穿心草中含有多种活性成分,其药理作用极少见报道。穿心草口 山酮是中山大学化工学院天然有机室从穿心草全草中分离出来的口 山酮化合物(属黄酮类)。本文首次报道穿心草口 山酮(1,6-二羟基-3,5-二甲氧基口 山酮,简称CX)的体外抗氧化实验研究。其结构式如图1。
1 材料
图1 穿心草酮(CX)
的化学结构
SD大鼠,体重(200±20) g,雌雄均有,由广东省医学实验动物中心提供;CX从穿心草中提取分离得到,以含0.1%二甲基亚砜和0.1%吐温-80的双蒸水悬溶;邻苯三酚(pyrogallol),广州化学试剂厂;三羟甲基氨基甲烷(trisainol, Tris),上海生化试剂厂(AR);细胞色素C,徐州生物化学制药厂;硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA),Sigma产品;三氯乙酸(trichloroacetic acid, TCA),上海试剂三厂。
, 百拇医药
2 方法
2.1 脂质过氧化与丙二醛(MDA)的测定
2.1.1 正常组织匀浆自氧化中MDA的测定:参考文献[2]法,取正常SD系大鼠,脱臼处死,迅速取出内脏组织:心、肝、脑、肾,用冷生理盐水(4 ℃)洗净血液,冷生理盐水中剪碎,加冷生理盐水作5%组织匀浆,取匀浆1 mL,加不同浓度的CX或Vit E 100 μL,空白对照加同体积的溶媒,置37 ℃水浴中温孵1.5 h,取出加10%三氯乙酸1 mL终止反应,加0.67%硫代巴比妥酸1 mL,沸水浴15 min,冷却后1 000 g离心10 min,取上清液测吸光度(A532 nm),根据MDA的消光系数ε=1.56×10-2 cm2/mol计算匀浆脂质过氧化产物MDA的生成量,以nmol/g组织为计量单位。
2.1.2 半胱氨酸-硫酸亚铁自由基发生系统激发的正常组织匀浆脂质过氧化中MDA的测定:方法同实验2.1.1,但反应体系中加半胱氨酸(0.01 mol/L)10 μL、FeSO4.7H2O(0.001 mol/L)20 μL[2]。
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2.2 对大鼠肝脏线粒体膨胀的影响:线粒体的分离参照文献[3],以分级沉淀差速离心法分离。其方法是(200±20)g SD系大鼠,禁食过夜,断椎处死,迅速剖腹,剪开心脏,用注射器吸4 ℃生理盐水20 mL自门静脉灌洗肝脏,取肝称重,冰浴下以0.25 mol/L蔗糖作10%匀浆,冰浴条件下,以双层尼龙织物过滤,收集匀浆放入离心管,1 000 g 10 min(4 ℃)离心,去质膜及细胞碎片,上清液再以3 300 g 20 min离心,其沉淀即为线粒体,以20 mmol/L Tris-HCl缓冲液(含0.125 mol/L KCl,pH 7.4)重悬,经两次洗涤后,配制含蛋白1 mg/mL的线粒体悬液。蛋白定量采用Coomassie亮蓝法[4]。大鼠肝脏线粒体分离如上所述。取线粒体蛋白质0.5 mg,分别加不同浓度药物10 μL,对照组以线粒体分离液代替,再加1 mmol/L FeSO4.7H2O,1 mmol/L Vit C各20 μL,37 ℃温育1 h,721型分光光度计测A520 nm变化,A520 nm降低表示线粒体发生肿胀,设正常对照组,其线粒体悬液不加FeSO4/Vit C。
, 百拇医药
2.3 CX对O÷2的清除作用:邻苯三酚自氧化法[5,6]:邻苯三酚在碱性条件下(pH8.2)发生自氧化,生成有色中间产物和O÷2,而O÷2对自氧化有催化作用,据自氧化速率(A变化)估算O÷2的清除率。具体操作是:2.4 mL Tris-HCl缓冲液(pH 8.2),加0.1 mL不同浓度的CX,混匀后加入7 mmol/L的邻苯酚0.3 mL,混匀后在第4分钟时以10 mol/L的HCl 1滴中止反应,测A325 nm值。
2.4 CX对.OH的清除作用:此实验中的自由基发生系统(free radical generation system, FRGS)的基本原理[7]是:
ascorbateCu2+Cu+→H2O2Cu2+Cu+→.OH+OH-
, 百拇医药
.OH+Cyt.C(Ⅱ)→OH-+Cyt.C(Ⅲ)
还原型细胞色素C[Cyt.C(Ⅱ)]转变为氧化型细胞色素C[Cyt.C(Ⅲ)]的过程中,其颜色由浅红转变为浅黄,据此采用比色法分析.OH的生成量。其具体操作是,反应介质为PBS(pH=7.4)2 mL,含Vit C 100 μmol/L,CuSO4 100 μmol/L,Cyt.C(Ⅱ) 100 μmol/L。另含不同CX浓度或5.8×10-5 mol/L Vit E(作阳性对照)。空白对照组则只含上述反应介质,而不含CX、VitE。加入Cyt.C(Ⅱ)之后,混匀,25 ℃水浴90 min后,7550型分光光度计测A550 nm,据细胞色素C的ε=0.21 cm2/mol,计算.OH生成量。
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3 结果
3.1 CX对正常大鼠脏器组织匀浆脂质过氧化的影响:CX对大鼠正常组织匀浆体外生成过氧化物的自氧化作用有极显著的抑制作用。且其作用在10-6~10-4 mol/L浓度范围内随剂量增加作用增强(表1)。CX极显著地抑制半胱氨酸-硫酸亚铁自由基发生系统激发的过氧化脂质的生成,并随剂量增加作用增强(表2)。
3.2 对大鼠肝脏线粒体膨胀的影响:CX可抑制Vit C和FeSO4激发的线粒体膨胀。线粒体肿胀与脂质过氧化有关。脂质过氧化导致线粒体膜脂质及蛋白质组分改变,进一步改变膜的屏障功能,引起线粒体呼吸状态的改变,使线粒体悬液A520 nm下降。CX具有抑制脂质过氧化,保护线粒体结构的作用(表3)。
3.3 对氧自由基(O÷2)的清除作用:CX具有显著的O÷2清除作用(表4)。
, 百拇医药
3.4 对羟自由基的清除作用:CX具有显著的.OH的清除作用(表5)。
表1 对大鼠体外组织匀浆过氧化脂质生成的影响(±s, n=3) 组别
浓度
(mol/L)
丙二醛(nmol/g)
心脏
肝
脑
肾
NS
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-
259.36±13.31
278.42±15.52
282.11±34.96
229.84±11.29
CX
1.9×10-4
28.60±0.99
90.36±7.33
93.50±9.76
, 百拇医药 58.06±4.84
(88.97)
(67.55)
(66.85)
(74.74)
6.3×10-5
44.87±2.96
100.57±6.25
124.39±3.25
73.39±8.06
, 百拇医药
(82.70)
(63.88)
(55.91)
(68.07)
2.1×10-5
81.36±2.96
143.38±4.96
153.66±6.50
135.48±6.45
(68.63)
, 百拇医药
(48.50)
(45.53)
(41.05)
Vit E
5.8×10-5
178.50±1.97
161.62±3.77
181.30±7.32
164.52±13.71
(31.17)
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(41.95)
(35.73)
(28.42)
与NS比较:P<0.01; P<0.001; ( )内数字为抑制率(%)表2 对半胱氨酸和硫酸亚铁激发正常大鼠脏器过氧化脂质生成的影响(±s, n=3) 组别
终浓度
(mol/L)
丙二醛(nmol/g)
心
肝
, 百拇医药
脑
肾
溶媒对照
-
259.36±13.31
278.42±15.52
282.42±15.52
229.84±11.29
Fe2+-Cys激发
-
606.50±28.11
1 326.36±27.5
, 百拇医药
1 122.5±35.83
770.83±30.83
CX+Fe2++Cys
1.89×10-4
91.72±3.45
98.90±20.44
435.83±14.17
109.17±8.33
(84.88)
(92.60)
, 百拇医药
(61.17)
(85.84)
6.30×10-5
246.55±15.29
287.55±15.66
695.83±51.67
321.67±8.33
(59.35)
(78.36)
(38.01)
, 百拇医药
(158.27)
2.10×10-5
421.10±2.47
445.48±27.54
898.33±21.67
355.75±5.00
(30.57)
(66.44)
(19.97)
(38.27)
, 百拇医药
Vit E+Fe2++Cys
5.80×10-5
509.37±2.47
1 120.00±8.33
1 006.67±10.00
612.50±12.50
(16.01)
(15.56)
(10.32)
(20.54)
, 百拇医药
与Fe2+-Cys激发组比较:P<0.01 P<0.001; ( )内数字为抑制率(%)表3 对硫酸亚铁-Vit C自由基激发系统致大鼠线粒体膨胀的保护作用(±s, n=3) 组别
CX/Vit E浓度
(mol/L)
A520 nm
0 min
5 min
10 min
15 min
, 百拇医药
20 min
30 min
正常
-
0.557±0.022
0.508±0.017
0.501±0.020
0.491±0.017
0.486±0.017
0.470±0.023
Fe2++Vit C损伤
, 百拇医药 -
0.569±0.011
0.485±0.012
0.411±0.034
0.351±0.016
0.330±0.019
0.317±0.015
CX+Vit C+Fe2+
3.79×10-5
0.561±0.039
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0.493±0.024
0.480±0.031
0.464±0.025
0.447±0.013
0.424±0.005
1.89×10-5
0.558±0.002
0.484±0.004
0.457±0.006
0.432±0.012
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0.409±0.013
0.388±0.013
9.40×10-6
0.560±0.017
0.481±0.003
0.438±0.005
0.407±0.010
0.387±0.017.
0.368±0.012
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Fe2++Vit C+Vit E
5.50×10-5
0.561±0.014
0.488±0.007
0.440±0.007
0.420±0.011
0.403±0.008
0.376±0.014
与Fe2++Vit C损伤组比较:P<0.05 P<0.01 P<0.001 表4 对邻苯三酚自氧化产生O÷2的清除作用
, 百拇医药
(±s, n=3) 组 别
终浓度
(mol/L)
O÷2生成量
(△A325/10 min)
抑制率
(%)
溶媒对照组
-
0.825 0±0.006 6
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CX
1.8×10-4
0.536 7±0.078 5
34.95
1.8×10-5
0.676 2±0.008 9
18.04
Vit E
5.0×10-5
0.687 5±0.010 9
, 百拇医药
16.67
与溶媒对照组比较:P<0.01 P<0.001表5 对Cu2++Cyt.C自由基发生系统.OH
自由基的清除作用(±s, n=5)
组 别
终浓度
(mol/L)
.OH浓度
(μ mol/L)
, 百拇医药 抑制率
(%)
溶媒对照组
-
2.95±0.71
0
CX
9.47×10-5
0.62±0.76
79.03
4.73×10-5
0.90±1.00
, 百拇医药
69.35
Vit E
2.30×10-5
1.29±0.71
56.45
与溶媒对照组比较:P<0.01
4 讨论
正常组织匀浆在体外自氧化或受硫酸亚铁-半胱氨酸激发的氧化反应后,均可产生丙二醛,使丙二醛生成量增加,而丙二醛是脂质过氧化反应的终产物,作为评价脂质过氧化反应强弱的指标,本实验观察到CX可使心、肝、脑、肾的脂质过氧化产物丙二醛生成量减少,可抑制Vit C和FeSO4激发的线粒体膨胀,从而进一步证明CX可抑制脂质过氧化,提示CX可减少氧自由基对生物膜的破坏,保护机体各种组织细胞免受氧自由基的损害。
, 百拇医药
CX能直接清除氧自由基。一般认为,含酚羟基的化合物具有明显的清除氧自由基的作用[8],如Vit E、苯甲酸、吩噻嗪类等。CX为黄酮类化合物,其化学结构与Vit E相似,提示其清除氧自由基的作用可能与其带有酚羟基团有关。
本实验初步探讨了穿心草口 山酮的抗氧化作用,实验结果提示:穿心草口 山酮具有抗氧化作用,这种作用可能与其清除O÷2及.OH有关。
Address: Yang Dongmei, Department of Pharmacy, Collgeg of Life Sciences, Sun Yatsen University, Guangzhou
现在中山医科大学药理室读博士后
杨东梅 女,1997年毕业于中山大学生命科学学院药学系,获硕士学位,曾在广东省医学实 验动物中心负责技术工作。现在广东药学院工作。
, 百拇医药
参 考 文 献
1,江苏新医学院编.中药大辞典.下册.上海:上海科学技术出版社,1986:1728
2,钱伯初,等.营养学报,1989,1(4):355
3,徐叔云主编.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1994:278,488
4,王继峰,等.药学学报,1986,2(11):857
5,徐叔云主编.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1994:506
6,邹国林,等.生物化学与生物物理进展,1986,13(4):71
7,王成莲,等.生物化学与生物物理进展,1989,16(6):473
8,胡瑞芳.中国药理学通报,1993,9(1):8
收稿1999-06-25, http://www.100md.com
单位:中山大学生命科学学院药学系 广州 510275
关键词:穿心草;酮丙二醛;脂质过氧化;O÷2;OH
中草药000521穿心草酮抗氧化作用初探
摘 要 以正常大鼠组织匀浆、线粒体为材料研究穿心草酮(1,6-二羟基-3,5-二甲氧基酮,Canscora Xanthon, CX)抗脂质过氧化作用。以丙二醛(MDA)为指标,观察CX对组织匀浆、线粒体体外脂质过氧化产物MDA生成量的影响。以吸光度(A)值为指标,观察CX对邻苯三酚自氧化产生的O÷2及Cu2+-Vit C自由基产生系统产生的.OH的清除作用。结果CX抑制正常大鼠脑、肝、心、肾匀浆的体外过氧化脂质生成,抑制Vit C和FeSO4激发的线粒体膨胀。提示CX能清除O÷2,.OH。
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穿心草Canscora lucidissima(Levl. et Vant.) Hand.-Mazz.分布于广东、广西等地,资源丰富。民间全草常用来治疗肝炎、黄疸、胃痛等疾患[1]。穿心草中含有多种活性成分,其药理作用极少见报道。穿心草口 山酮是中山大学化工学院天然有机室从穿心草全草中分离出来的口 山酮化合物(属黄酮类)。本文首次报道穿心草口 山酮(1,6-二羟基-3,5-二甲氧基口 山酮,简称CX)的体外抗氧化实验研究。其结构式如图1。
1 材料
图1 穿心草酮(CX)
的化学结构
SD大鼠,体重(200±20) g,雌雄均有,由广东省医学实验动物中心提供;CX从穿心草中提取分离得到,以含0.1%二甲基亚砜和0.1%吐温-80的双蒸水悬溶;邻苯三酚(pyrogallol),广州化学试剂厂;三羟甲基氨基甲烷(trisainol, Tris),上海生化试剂厂(AR);细胞色素C,徐州生物化学制药厂;硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA),Sigma产品;三氯乙酸(trichloroacetic acid, TCA),上海试剂三厂。
, 百拇医药
2 方法
2.1 脂质过氧化与丙二醛(MDA)的测定
2.1.1 正常组织匀浆自氧化中MDA的测定:参考文献[2]法,取正常SD系大鼠,脱臼处死,迅速取出内脏组织:心、肝、脑、肾,用冷生理盐水(4 ℃)洗净血液,冷生理盐水中剪碎,加冷生理盐水作5%组织匀浆,取匀浆1 mL,加不同浓度的CX或Vit E 100 μL,空白对照加同体积的溶媒,置37 ℃水浴中温孵1.5 h,取出加10%三氯乙酸1 mL终止反应,加0.67%硫代巴比妥酸1 mL,沸水浴15 min,冷却后1 000 g离心10 min,取上清液测吸光度(A532 nm),根据MDA的消光系数ε=1.56×10-2 cm2/mol计算匀浆脂质过氧化产物MDA的生成量,以nmol/g组织为计量单位。
2.1.2 半胱氨酸-硫酸亚铁自由基发生系统激发的正常组织匀浆脂质过氧化中MDA的测定:方法同实验2.1.1,但反应体系中加半胱氨酸(0.01 mol/L)10 μL、FeSO4.7H2O(0.001 mol/L)20 μL[2]。
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2.2 对大鼠肝脏线粒体膨胀的影响:线粒体的分离参照文献[3],以分级沉淀差速离心法分离。其方法是(200±20)g SD系大鼠,禁食过夜,断椎处死,迅速剖腹,剪开心脏,用注射器吸4 ℃生理盐水20 mL自门静脉灌洗肝脏,取肝称重,冰浴下以0.25 mol/L蔗糖作10%匀浆,冰浴条件下,以双层尼龙织物过滤,收集匀浆放入离心管,1 000 g 10 min(4 ℃)离心,去质膜及细胞碎片,上清液再以3 300 g 20 min离心,其沉淀即为线粒体,以20 mmol/L Tris-HCl缓冲液(含0.125 mol/L KCl,pH 7.4)重悬,经两次洗涤后,配制含蛋白1 mg/mL的线粒体悬液。蛋白定量采用Coomassie亮蓝法[4]。大鼠肝脏线粒体分离如上所述。取线粒体蛋白质0.5 mg,分别加不同浓度药物10 μL,对照组以线粒体分离液代替,再加1 mmol/L FeSO4.7H2O,1 mmol/L Vit C各20 μL,37 ℃温育1 h,721型分光光度计测A520 nm变化,A520 nm降低表示线粒体发生肿胀,设正常对照组,其线粒体悬液不加FeSO4/Vit C。
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2.3 CX对O÷2的清除作用:邻苯三酚自氧化法[5,6]:邻苯三酚在碱性条件下(pH8.2)发生自氧化,生成有色中间产物和O÷2,而O÷2对自氧化有催化作用,据自氧化速率(A变化)估算O÷2的清除率。具体操作是:2.4 mL Tris-HCl缓冲液(pH 8.2),加0.1 mL不同浓度的CX,混匀后加入7 mmol/L的邻苯酚0.3 mL,混匀后在第4分钟时以10 mol/L的HCl 1滴中止反应,测A325 nm值。
2.4 CX对.OH的清除作用:此实验中的自由基发生系统(free radical generation system, FRGS)的基本原理[7]是:
ascorbateCu2+Cu+→H2O2Cu2+Cu+→.OH+OH-
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.OH+Cyt.C(Ⅱ)→OH-+Cyt.C(Ⅲ)
还原型细胞色素C[Cyt.C(Ⅱ)]转变为氧化型细胞色素C[Cyt.C(Ⅲ)]的过程中,其颜色由浅红转变为浅黄,据此采用比色法分析.OH的生成量。其具体操作是,反应介质为PBS(pH=7.4)2 mL,含Vit C 100 μmol/L,CuSO4 100 μmol/L,Cyt.C(Ⅱ) 100 μmol/L。另含不同CX浓度或5.8×10-5 mol/L Vit E(作阳性对照)。空白对照组则只含上述反应介质,而不含CX、VitE。加入Cyt.C(Ⅱ)之后,混匀,25 ℃水浴90 min后,7550型分光光度计测A550 nm,据细胞色素C的ε=0.21 cm2/mol,计算.OH生成量。
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3 结果
3.1 CX对正常大鼠脏器组织匀浆脂质过氧化的影响:CX对大鼠正常组织匀浆体外生成过氧化物的自氧化作用有极显著的抑制作用。且其作用在10-6~10-4 mol/L浓度范围内随剂量增加作用增强(表1)。CX极显著地抑制半胱氨酸-硫酸亚铁自由基发生系统激发的过氧化脂质的生成,并随剂量增加作用增强(表2)。
3.2 对大鼠肝脏线粒体膨胀的影响:CX可抑制Vit C和FeSO4激发的线粒体膨胀。线粒体肿胀与脂质过氧化有关。脂质过氧化导致线粒体膜脂质及蛋白质组分改变,进一步改变膜的屏障功能,引起线粒体呼吸状态的改变,使线粒体悬液A520 nm下降。CX具有抑制脂质过氧化,保护线粒体结构的作用(表3)。
3.3 对氧自由基(O÷2)的清除作用:CX具有显著的O÷2清除作用(表4)。
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3.4 对羟自由基的清除作用:CX具有显著的.OH的清除作用(表5)。
表1 对大鼠体外组织匀浆过氧化脂质生成的影响(±s, n=3) 组别
浓度
(mol/L)
丙二醛(nmol/g)
心脏
肝
脑
肾
NS
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-
259.36±13.31
278.42±15.52
282.11±34.96
229.84±11.29
CX
1.9×10-4
28.60±0.99
90.36±7.33
93.50±9.76
, 百拇医药 58.06±4.84
(88.97)
(67.55)
(66.85)
(74.74)
6.3×10-5
44.87±2.96
100.57±6.25
124.39±3.25
73.39±8.06
, 百拇医药
(82.70)
(63.88)
(55.91)
(68.07)
2.1×10-5
81.36±2.96
143.38±4.96
153.66±6.50
135.48±6.45
(68.63)
, 百拇医药
(48.50)
(45.53)
(41.05)
Vit E
5.8×10-5
178.50±1.97
161.62±3.77
181.30±7.32
164.52±13.71
(31.17)
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(41.95)
(35.73)
(28.42)
与NS比较:P<0.01; P<0.001; ( )内数字为抑制率(%)表2 对半胱氨酸和硫酸亚铁激发正常大鼠脏器过氧化脂质生成的影响(±s, n=3) 组别
终浓度
(mol/L)
丙二醛(nmol/g)
心
肝
, 百拇医药
脑
肾
溶媒对照
-
259.36±13.31
278.42±15.52
282.42±15.52
229.84±11.29
Fe2+-Cys激发
-
606.50±28.11
1 326.36±27.5
, 百拇医药
1 122.5±35.83
770.83±30.83
CX+Fe2++Cys
1.89×10-4
91.72±3.45
98.90±20.44
435.83±14.17
109.17±8.33
(84.88)
(92.60)
, 百拇医药
(61.17)
(85.84)
6.30×10-5
246.55±15.29
287.55±15.66
695.83±51.67
321.67±8.33
(59.35)
(78.36)
(38.01)
, 百拇医药
(158.27)
2.10×10-5
421.10±2.47
445.48±27.54
898.33±21.67
355.75±5.00
(30.57)
(66.44)
(19.97)
(38.27)
, 百拇医药
Vit E+Fe2++Cys
5.80×10-5
509.37±2.47
1 120.00±8.33
1 006.67±10.00
612.50±12.50
(16.01)
(15.56)
(10.32)
(20.54)
, 百拇医药
与Fe2+-Cys激发组比较:P<0.01 P<0.001; ( )内数字为抑制率(%)表3 对硫酸亚铁-Vit C自由基激发系统致大鼠线粒体膨胀的保护作用(±s, n=3) 组别
CX/Vit E浓度
(mol/L)
A520 nm
0 min
5 min
10 min
15 min
, 百拇医药
20 min
30 min
正常
-
0.557±0.022
0.508±0.017
0.501±0.020
0.491±0.017
0.486±0.017
0.470±0.023
Fe2++Vit C损伤
, 百拇医药 -
0.569±0.011
0.485±0.012
0.411±0.034
0.351±0.016
0.330±0.019
0.317±0.015
CX+Vit C+Fe2+
3.79×10-5
0.561±0.039
, http://www.100md.com
0.493±0.024
0.480±0.031
0.464±0.025
0.447±0.013
0.424±0.005
1.89×10-5
0.558±0.002
0.484±0.004
0.457±0.006
0.432±0.012
, http://www.100md.com
0.409±0.013
0.388±0.013
9.40×10-6
0.560±0.017
0.481±0.003
0.438±0.005
0.407±0.010
0.387±0.017.
0.368±0.012
, http://www.100md.com
Fe2++Vit C+Vit E
5.50×10-5
0.561±0.014
0.488±0.007
0.440±0.007
0.420±0.011
0.403±0.008
0.376±0.014
与Fe2++Vit C损伤组比较:P<0.05 P<0.01 P<0.001 表4 对邻苯三酚自氧化产生O÷2的清除作用
, 百拇医药
(±s, n=3) 组 别
终浓度
(mol/L)
O÷2生成量
(△A325/10 min)
抑制率
(%)
溶媒对照组
-
0.825 0±0.006 6
, http://www.100md.com
CX
1.8×10-4
0.536 7±0.078 5
34.95
1.8×10-5
0.676 2±0.008 9
18.04
Vit E
5.0×10-5
0.687 5±0.010 9
, 百拇医药
16.67
与溶媒对照组比较:P<0.01 P<0.001表5 对Cu2++Cyt.C自由基发生系统.OH
自由基的清除作用(±s, n=5)
组 别
终浓度
(mol/L)
.OH浓度
(μ mol/L)
, 百拇医药 抑制率
(%)
溶媒对照组
-
2.95±0.71
0
CX
9.47×10-5
0.62±0.76
79.03
4.73×10-5
0.90±1.00
, 百拇医药
69.35
Vit E
2.30×10-5
1.29±0.71
56.45
与溶媒对照组比较:P<0.01
4 讨论
正常组织匀浆在体外自氧化或受硫酸亚铁-半胱氨酸激发的氧化反应后,均可产生丙二醛,使丙二醛生成量增加,而丙二醛是脂质过氧化反应的终产物,作为评价脂质过氧化反应强弱的指标,本实验观察到CX可使心、肝、脑、肾的脂质过氧化产物丙二醛生成量减少,可抑制Vit C和FeSO4激发的线粒体膨胀,从而进一步证明CX可抑制脂质过氧化,提示CX可减少氧自由基对生物膜的破坏,保护机体各种组织细胞免受氧自由基的损害。
, 百拇医药
CX能直接清除氧自由基。一般认为,含酚羟基的化合物具有明显的清除氧自由基的作用[8],如Vit E、苯甲酸、吩噻嗪类等。CX为黄酮类化合物,其化学结构与Vit E相似,提示其清除氧自由基的作用可能与其带有酚羟基团有关。
本实验初步探讨了穿心草口 山酮的抗氧化作用,实验结果提示:穿心草口 山酮具有抗氧化作用,这种作用可能与其清除O÷2及.OH有关。
Address: Yang Dongmei, Department of Pharmacy, Collgeg of Life Sciences, Sun Yatsen University, Guangzhou
现在中山医科大学药理室读博士后
杨东梅 女,1997年毕业于中山大学生命科学学院药学系,获硕士学位,曾在广东省医学实 验动物中心负责技术工作。现在广东药学院工作。
, 百拇医药
参 考 文 献
1,江苏新医学院编.中药大辞典.下册.上海:上海科学技术出版社,1986:1728
2,钱伯初,等.营养学报,1989,1(4):355
3,徐叔云主编.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1994:278,488
4,王继峰,等.药学学报,1986,2(11):857
5,徐叔云主编.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1994:506
6,邹国林,等.生物化学与生物物理进展,1986,13(4):71
7,王成莲,等.生物化学与生物物理进展,1989,16(6):473
8,胡瑞芳.中国药理学通报,1993,9(1):8
收稿1999-06-25, http://www.100md.com