活动期系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞及自然杀伤细胞检测
作者：蔡小燕 许艳丽 钟志敏 郑学毅 毛平
单位：蔡小燕(510180 广州市第一人民医院风湿免疫科)；许艳丽(广州市第一人民医院检验科)；钟志敏(广州市第一人民医院检验科)；郑学毅(510180 广州市第一人民医院风湿免疫科)；毛平(广州市第一人民医院血液内科)
关键词：
中华风湿病学杂志000515 系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，存在免疫功能的紊乱。但其发病机制以及机体内免疫调节细胞的具体变化尚未完全明确。我们通过流式细胞仪对38例SLE患者和20例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测，了解T细胞亚群、B细胞以及自然杀伤细胞(NK细胞)在活动期SLE的改变，从而探讨免疫细胞在SLE发病机制中的作用。
1 资料与方法
1.1 检测对象：SLE患者38例，诊断符合美国ARA 1982年修订的SLE分类标准[1]，女36例，男2例，年龄15～59岁，平均31岁。病程1个月～19年，平均2.3年。根据欧洲狼疮活动性指标积分评分[2]，都处于疾病的活动期。其中初发病21例，复发17例。合并狼疮肾炎23例，合并神经精神性狼疮6例。选择20名性别、年龄相匹配之健康人作为正常对照组。
, http://www.100md.com
1.2 研究方法：采用微量全血直接双标记免疫荧光染色及流式细胞仪检测。即分别在100 μl抗凝血中各加入CD3、CD4、CD8、CD19以及CD16、CD56荧光标记单抗(美国Coulter公司产品)20 μl，室温孵育20 min，加溶血素2 ml，摇匀后室温避光放置10 min，1 500 r/min离心5 min，弃上清液，用PBS洗涤2次，加1%甲醛0.5 ml，置流式细胞仪(美国BD公司Facs vantage型号)进行分析，每个样品收集104个细胞。
1.3 统计学处理：采用t检验。
2 结 果
38例SLE患者CD4+细胞低于正常对照组(P<0.01)；CD4+/CD8+比值降低(P<0.01)；CD3+和CD8+细胞与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)；CD19+细胞(B细胞)较对照组明显升高(P<0.001)；而CD16+CD56+细胞(NK细胞)则明显减少(P<0.001)。具体数值见表1。
, 百拇医药
3 讨 论
正常免疫应答过程有赖于各种免疫细胞，特别是各T细胞亚群之间的相互协作和相互制约。若某一T细胞亚群的数量和功能发生异常，机体就出现免疫紊乱，并发生一系列病理变化。SLE是一种自身免疫性疾病，存在免疫调节功能紊乱。国内外对SLE患者T细胞亚群的研究有很多，但结果都不太一致。过去多数报道[3]在SLE活动期，辅助/诱导T细胞(CD4+细胞)升高，抑制/杀伤T细胞(CD8+细胞)下降，CD4+/CD8+比值升高，认为SLE的发病与上述T细胞亚群的改变有关，尤其是CD8+下降引起B细胞多克隆激活及体液免疫异常。但近年的研究[4，5]却发现SLE活动期CD8+细胞变化不大，或者反而升高。本组资料的结果也显示：活动期SLE患者的CD8+细胞与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)，CD4+细胞减少(P<0.05)，CD4+/CD8+比值降低(P<0.01)，CD19+细胞(B细胞)明显升高(P<0.001)与近年的报道一致。有进一步的研究发现，CD8+细胞亚群具有明显的异质性，活动期SLE患者的CD8+细胞几乎全部被反抑制性T细胞(CD8+VV+)取代，不能显示抑制功能，因而阻断了CD8+细胞对CD4+细胞的抑制作用[5]。另一方面，CD4+细胞减少，主要是CD4+亚群中的抑制诱导T细胞(CD4+ 2H4+)降低，不能诱导CD8+细胞对B细胞产生抑制作用[6]。这就解释了活动期SLE患者中，CD4+细胞降低，CD8+细胞正常或升高时，仍然表现出免疫亢进，B细胞增生并产生大量自身抗体的矛盾现象。
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表1 SLE患者外周血淋巴细胞免疫表型(
±s) 组别
例数
CD3+(%)
CD4+(%)
CD8+(%)
CD4+/CD8+
CD19+(%)
CD16+CD56+(%)
, 百拇医药 SLE患者组
38
59.01±10.76
28.19±7.50
27.36±7.07
1.11±0.34
17.78±6.85
7.11±3.69
正常对照组
20
60.10±9.99
33.74±4.55
, 百拇医药
23.66±4.15
1.49±0.26
6.33±2.08
28.38±11.16
P值
>0.05
<0.01
>0.05
<0.01
<0.001
<0.001
本组资料的结果还显示，活动期的SLE患者的NK细胞(CD16+CD56+细胞)活性较正常对照组明显降低(P<0.001)。NK细胞具有多种功能，它不仅是自然防御细胞，而且是体内多种细胞，尤其是T、B淋巴细胞的免疫调节细胞，在机体正常的免疫、防御机制中起重要作用。在生理情况下，NK细胞对抗体的产生具有双相调节作用。SLE活动期，NK细胞活性明显降低，对自身抗体产生的抑制作用减弱，多种自身抗体产生，导致多脏器受损。Erkeller-Yuksel[7]和Stohl等[8]的研究也发现活动期SLE患者NK细胞活性降低，在SLE伴肾脏受累的患者中下降更为明显，治疗后NK细胞活性有所升高，提示NK细胞的变化可以直接地反映机体的免疫失衡状态。
, http://www.100md.com
T细胞亚群、B细胞以及NK细胞的改变在SLE的发病中起很大作用。检测SLE患者外周血淋巴细胞表型，对全面地了解机体的免疫状态，正确判断病情和指导临床治疗有重要意义。 参 考 文 献
1，Tam EM,Cohen AS,Fries JF,et al.The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus (SLE).Arthritis Rheum,1982,25:1271.
2，Vitali C,Bencivelli W,Isenberg DA,et al.Disease activity in systemic lupus erythematosus:report of consensus study group of the European workshop for rheumatology research Ⅱ:identification of the variables indicative of disease activity and their use in the development of an activity score.Clin Exp Rheumatol,1992,10:541.
, http://www.100md.com
3，Raziuddin S,Nur MA,Al-Wabel AA.Increased circulating HLA-DR+CD4+ T cells in systemic lupus erythematosus:alterations associated with prednisolone therapy.Scand J Immunol,1990,31;139-145.
4，Maeda N,Sekigawa I,Iida N,et al.Relationship between CD4+/CD8+ T cell ratio and T cell activation in systemic lupus erythematosus.Scand J Rheumatol,1999,28:166-170.
5，张冬春、王林军，马安伦，等.SLE中的反抑制细胞与γδTCR阳性T细胞.风湿病学杂志，1997，2：1-4.
, http://www.100md.com
6，蒋明，孙华瑜，朱立平，等.系统性红斑狼疮患者外周血中的T4+2H4+细胞的研究.中华内科杂志，1991，30：426-428.
7，Erkeller-Yuksel FM,Lydyard PM,Isenberg DA.Lack of NK cells in lupus patients with renal involvement.Lupus,1997,6:708-712.
8，Stoh W,Elliott JE,Hamilton AS,et al.Impaired recovery and cytolytic function of CD56+ T and non-T cells in systemic lupus erythematosus following in vitro polyclonal T cell stimulation:studies in unselected patients and monozygotic disense-discordant twins.Arthritis Rheum,1996,39:1840-1851.
(收稿日期：1999-11-22), http://www.100md.com
单位：蔡小燕(510180 广州市第一人民医院风湿免疫科)；许艳丽(广州市第一人民医院检验科)；钟志敏(广州市第一人民医院检验科)；郑学毅(510180 广州市第一人民医院风湿免疫科)；毛平(广州市第一人民医院血液内科)
关键词：
中华风湿病学杂志000515 系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，存在免疫功能的紊乱。但其发病机制以及机体内免疫调节细胞的具体变化尚未完全明确。我们通过流式细胞仪对38例SLE患者和20例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测，了解T细胞亚群、B细胞以及自然杀伤细胞(NK细胞)在活动期SLE的改变，从而探讨免疫细胞在SLE发病机制中的作用。
1 资料与方法
1.1 检测对象：SLE患者38例，诊断符合美国ARA 1982年修订的SLE分类标准[1]，女36例，男2例，年龄15～59岁，平均31岁。病程1个月～19年，平均2.3年。根据欧洲狼疮活动性指标积分评分[2]，都处于疾病的活动期。其中初发病21例，复发17例。合并狼疮肾炎23例，合并神经精神性狼疮6例。选择20名性别、年龄相匹配之健康人作为正常对照组。
, http://www.100md.com
1.2 研究方法：采用微量全血直接双标记免疫荧光染色及流式细胞仪检测。即分别在100 μl抗凝血中各加入CD3、CD4、CD8、CD19以及CD16、CD56荧光标记单抗(美国Coulter公司产品)20 μl，室温孵育20 min，加溶血素2 ml，摇匀后室温避光放置10 min，1 500 r/min离心5 min，弃上清液，用PBS洗涤2次，加1%甲醛0.5 ml，置流式细胞仪(美国BD公司Facs vantage型号)进行分析，每个样品收集104个细胞。
1.3 统计学处理：采用t检验。
2 结 果
38例SLE患者CD4+细胞低于正常对照组(P<0.01)；CD4+/CD8+比值降低(P<0.01)；CD3+和CD8+细胞与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)；CD19+细胞(B细胞)较对照组明显升高(P<0.001)；而CD16+CD56+细胞(NK细胞)则明显减少(P<0.001)。具体数值见表1。
, 百拇医药
3 讨 论
正常免疫应答过程有赖于各种免疫细胞，特别是各T细胞亚群之间的相互协作和相互制约。若某一T细胞亚群的数量和功能发生异常，机体就出现免疫紊乱，并发生一系列病理变化。SLE是一种自身免疫性疾病，存在免疫调节功能紊乱。国内外对SLE患者T细胞亚群的研究有很多，但结果都不太一致。过去多数报道[3]在SLE活动期，辅助/诱导T细胞(CD4+细胞)升高，抑制/杀伤T细胞(CD8+细胞)下降，CD4+/CD8+比值升高，认为SLE的发病与上述T细胞亚群的改变有关，尤其是CD8+下降引起B细胞多克隆激活及体液免疫异常。但近年的研究[4，5]却发现SLE活动期CD8+细胞变化不大，或者反而升高。本组资料的结果也显示：活动期SLE患者的CD8+细胞与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)，CD4+细胞减少(P<0.05)，CD4+/CD8+比值降低(P<0.01)，CD19+细胞(B细胞)明显升高(P<0.001)与近年的报道一致。有进一步的研究发现，CD8+细胞亚群具有明显的异质性，活动期SLE患者的CD8+细胞几乎全部被反抑制性T细胞(CD8+VV+)取代，不能显示抑制功能，因而阻断了CD8+细胞对CD4+细胞的抑制作用[5]。另一方面，CD4+细胞减少，主要是CD4+亚群中的抑制诱导T细胞(CD4+ 2H4+)降低，不能诱导CD8+细胞对B细胞产生抑制作用[6]。这就解释了活动期SLE患者中，CD4+细胞降低，CD8+细胞正常或升高时，仍然表现出免疫亢进，B细胞增生并产生大量自身抗体的矛盾现象。
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表1 SLE患者外周血淋巴细胞免疫表型(
±s) 组别例数
CD3+(%)
CD4+(%)
CD8+(%)
CD4+/CD8+
CD19+(%)
CD16+CD56+(%)
, 百拇医药 SLE患者组
38
59.01±10.76
28.19±7.50
27.36±7.07
1.11±0.34
17.78±6.85
7.11±3.69
正常对照组
20
60.10±9.99
33.74±4.55
, 百拇医药
23.66±4.15
1.49±0.26
6.33±2.08
28.38±11.16
P值
>0.05
<0.01
>0.05
<0.01
<0.001
<0.001
本组资料的结果还显示，活动期的SLE患者的NK细胞(CD16+CD56+细胞)活性较正常对照组明显降低(P<0.001)。NK细胞具有多种功能，它不仅是自然防御细胞，而且是体内多种细胞，尤其是T、B淋巴细胞的免疫调节细胞，在机体正常的免疫、防御机制中起重要作用。在生理情况下，NK细胞对抗体的产生具有双相调节作用。SLE活动期，NK细胞活性明显降低，对自身抗体产生的抑制作用减弱，多种自身抗体产生，导致多脏器受损。Erkeller-Yuksel[7]和Stohl等[8]的研究也发现活动期SLE患者NK细胞活性降低，在SLE伴肾脏受累的患者中下降更为明显，治疗后NK细胞活性有所升高，提示NK细胞的变化可以直接地反映机体的免疫失衡状态。
, http://www.100md.com
T细胞亚群、B细胞以及NK细胞的改变在SLE的发病中起很大作用。检测SLE患者外周血淋巴细胞表型，对全面地了解机体的免疫状态，正确判断病情和指导临床治疗有重要意义。 参 考 文 献
1，Tam EM,Cohen AS,Fries JF,et al.The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus (SLE).Arthritis Rheum,1982,25:1271.
2，Vitali C,Bencivelli W,Isenberg DA,et al.Disease activity in systemic lupus erythematosus:report of consensus study group of the European workshop for rheumatology research Ⅱ:identification of the variables indicative of disease activity and their use in the development of an activity score.Clin Exp Rheumatol,1992,10:541.
, http://www.100md.com
3，Raziuddin S,Nur MA,Al-Wabel AA.Increased circulating HLA-DR+CD4+ T cells in systemic lupus erythematosus:alterations associated with prednisolone therapy.Scand J Immunol,1990,31;139-145.
4，Maeda N,Sekigawa I,Iida N,et al.Relationship between CD4+/CD8+ T cell ratio and T cell activation in systemic lupus erythematosus.Scand J Rheumatol,1999,28:166-170.
5，张冬春、王林军，马安伦，等.SLE中的反抑制细胞与γδTCR阳性T细胞.风湿病学杂志，1997，2：1-4.
, http://www.100md.com
6，蒋明，孙华瑜，朱立平，等.系统性红斑狼疮患者外周血中的T4+2H4+细胞的研究.中华内科杂志，1991，30：426-428.
7，Erkeller-Yuksel FM,Lydyard PM,Isenberg DA.Lack of NK cells in lupus patients with renal involvement.Lupus,1997,6:708-712.
8，Stoh W,Elliott JE,Hamilton AS,et al.Impaired recovery and cytolytic function of CD56+ T and non-T cells in systemic lupus erythematosus following in vitro polyclonal T cell stimulation:studies in unselected patients and monozygotic disense-discordant twins.Arthritis Rheum,1996,39:1840-1851.
(收稿日期：1999-11-22), http://www.100md.com