喉癌组织中树突状细胞S-100蛋白的免疫组化及临床研究
作者：胡孙宏 孙晓南
单位：胡孙宏(浙江大学医学院附属邵逸夫医院耳鼻咽喉科-头颈外科 杭州 310016)；孙晓南(浙江大学医学院附属邵逸夫医院放疗科)
关键词：喉肿瘤；免疫组化；S-100蛋白
肿瘤000521 摘要：目的 探讨S-100蛋白检测与喉癌的生物学行为及预后关系。方法 采用免疫组化方法以抗S-100蛋白抗体标记68例喉癌组织和21例非喉癌组织中S-100蛋白树突状阳性细胞。结果 68例喉癌组织中S-100蛋白细胞阳性检出率为63.2%(43/68)，主要散在于肿瘤细胞间和间质中，非喉癌组织中很少见到S-100蛋白阳性细胞(按同一标准S-100蛋白细胞阳性检出率为0 %)，在癌组织中它与喉癌的病理分级、临床分期相关(P<0.05)，病理分化程度越差、临床分期越高，S-100蛋白细胞的检出发率越低。且发现它的分布情况与喉癌预后有关，S-100蛋白阳性者术后生率(68.7%)明显高于阴性者(39.3%)(P<0.05)。结论 喉癌组织中出现S-100蛋白阳性细胞者，预后好，在临床上，S-100蛋白细胞的检测，对判断喉癌预后有一定参考价值。
, http://www.100md.com
中图分类号：R739.65 文献标识码：A
文章编号：1000-7431(2000)05-0373-02
IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF S-100 PROTEIN IN LARYNGEAL CARCINOMA
HU Sun-hong,SUN Xiao-nan.
(Department of Otorhinolaryngy and Head Neck Surgery, Sir Run Shaw Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310016,China)
Abstract：Objective To study the distribution of S-100 protein and the relationship between S-100 protein and protein and prognosis in laryngeal carcinoma.Methods S-100 protein was observed by immunohistochemical methods using anti-S-100 protein antibody in 68 laryngeal carcinoma and non-cancer laryngeal tissues. Results The results showed that S-100 protein positive was found 43(63.24%) in 68 laryngeal carcinoma patients. S-100 protein positive cells were interspersed among the tumor cells and in the stroma. S-100 protein were rare in the non-cancer laryngeal tissues. The detection of S-100 protein was related to tumor grade and stage. The prooer the differentiation of laryngeal carcinoma, The less the number of S-100 protein positive cells. S-100 protein ngeative was more seen in advanced stages of carcinoma. The five year survival rate in patients with S-100 protein positive was significatly higher than that in patients with S-100 protein negative. Conclusion Our results indicated that the detection of S-100 protein was of value for the prognostic analysis in patients with laryngeal carcinoma.
, 百拇医药
Key words：Laryngeal neoplasms； Immunohistochemical; S-100 protein
在研究机体免疫功能状态时，人们注意到一种特殊类型的组织细胞——树状突细胞，它能合成和分泌S-100蛋白质，简称S-100蛋白阳性细胞[1]，在机体抗肿瘤免疫中，S-100蛋白阳性细胞通过处理抗原，递呈抗原，激发T细胞增殖，启动机体免疫应答来参与肿瘤免疫，因此，S-100蛋白阳性细胞的浸润被认为是机体抗肿瘤免疫反应标志之一。
材料与方法
随机抽取68例 1985～1995年间术前未行放疗或化疗的原发性喉癌石蜡标本，病理分级和临床分期参考UICC 1997年方案，病理分级：Ⅰ级25例，Ⅱ级29例，Ⅲ～Ⅳ级14例，均行HE染色，并经病理渤检查核实；临床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期22例。68例中年龄38～68岁，中位年龄52岁，均有随访资料，术后一个月内死亡及死于其他疾病者不在估计预后。同时取2例尸检声带标本、10例喉不典型增生，9例喉乳头状瘤为对照组。
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将每个蜡块作连续切片，约5 μm，共切2张，常规HE染色1张，另1张做免疫组化染色(ABC法)。
ABC法 石蜡切片以二甲苯常规脱蜡，酒精脱水，置冰箱过夜；0.2 %胃蛋白酶和0.1 N HCL消化；0.3 % H2O2甲醛阻断内源性过氧化物酶；正常血清封闭非特异性位点；加抗S-100蛋白抗体于湿合中，4 ℃冰箱过夜(阴性对照用PBS代替Ⅰ抗)；置室温2 h后PBS漂洗；加生物素化羊抗兔或鼠IgG(37 ℃) 1 h；加ABC试剂，37 ℃，1 h；DAB显色；酒精脱水；二甲苯透明；中性树胶封片。
结果均在Olympus显微镜下观察，S-100蛋白阳性细胞在癌肿中×400镜下观察，随机10个视野，计其均数，每个视野少于5个为S-100蛋白阴性，多于或等于为阳性。各组数据之间采用χ2检验，生存率用寿命表法计算，生存率曲线采用Kaplan-Meier方法描绘，生存率比较用对数秩和检验(Long-rank test)。
, 百拇医药
结 果
在正常及良性喉病变组织中仅见少量S-100蛋白阳性细胞散在分布于间质中，根据观察标准其S-100蛋白阳性率为0。68例喉癌组织中有43例发现S-100蛋白阳性，S-100蛋白阳性细胞均被染色深棕色，胞浆呈树突状，有分枝，有的伸入癌细胞间。在高分化喉癌巢旁表现明显。在整个癌组织中S-100蛋白阳性细胞分布不均匀，高分化鳞癌中多为阳性，低分化鳞癌中分布很少，有的呈阴性。S-100蛋白主要散在分布于癌巢及巢旁的结缔组织中，多位于癌巢周边，而中央区域少。
从表1、表2中可见S-100蛋白阳性细胞的分布与喉癌的病理分级，临床分期相关。喉癌病理分化程度越差或临床分期越高，S-100蛋白阳性率越低。本组68例病例均有随访资料，按寿命表法推算[2]，术后五年生存率为51.8%，S-100蛋白阳性喉癌术后生存率为68.7%，阴性者为39.3%，两者经对数秩和检验，差异有显著性意义(P<0.05)，生存率曲线经Long-rank test检验，S-100蛋白阳性喉癌的生存率明显高于S-100蛋白阴性喉癌的生存率(P<0.05)。
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表1 S-100蛋白阳性细胞与喉癌病理分级的关系 病理分级
S-100蛋白阳性
S-100蛋白阴性
病例数
病例数
(%)
病例数
(%)
Ⅰ级
22
(88.0)
3
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(12.0)
25
Ⅱ级
15
(51.7)
14
(48.3)
29
Ⅲ～Ⅳ级
6
(42.9)
8
(57.1)
, http://www.100md.com
14
合计
43
(63.2)
25
(36.8)
68
P<0.05表2 S-100蛋白阳性细胞与喉癌临床分期的关系 临床分期
S-100蛋白阳性
S-100蛋白阴性
病例数
病例数
, 百拇医药
(%)
病例数
(%)
Ⅰ级
23
(82.1)
5
(17.9)
28
Ⅱ级
10
(55.6)
8
, http://www.100md.com
(44.4)
18
Ⅲ～Ⅳ级
10
(45.5)
12
(54.5)
22
合计
43
(63.2)
25
(36.8)
, 百拇医药
68
P<0.05
讨 论
在免疫组织化学上，S-100蛋白可用于常规石蜡组织中的检测。早在1980年Schenk等[3]在电镜下发现喉鳞状细胞癌组织中有S-100蛋白树状突阳性细胞的浸润。本文应用免疫组化方法用S-100蛋白质标记喉癌中的S-100蛋白阳性细胞，观察到它多位于邻近正常组织的癌组织中，在癌巢中则多位于周边，癌巢中央区域很少。本研究发现喉癌组织中S-100蛋白阳性细胞的分布与预后有密切的关系。S-100蛋白阳性病人术后五年生存率明显高于阴性病人(P<0.05)，且发现喉癌中S-100蛋白的分布与喉癌的侵袭也相关。Ambe等[4]在结肠腺癌中也发现了S-100蛋白的分布与预后有密切关系，认为癌组织中S-100蛋白数量多的患者术后生存率明显长于癌组织中S-100蛋白数量少的病人。相似的结论见于肺癌、鼻咽癌、口腔癌、甲状腺乳头状腺癌。这些结果表明S-100蛋白阳性细胞具有抑制肿瘤生长和复发，参与机体抗肿瘤免疫，代表机体免疫潜力，因此，S-100蛋白的检测可用于估计肿瘤预后的标志。
, http://www.100md.com
S-100蛋白阳性细胞在肿瘤中的浸润作用已有文献报道，认为它参与机体抗肿瘤免疫。在参与机体抗肿瘤免疫时，需其他细胞协同作用，尤其是T淋巴细胞。许多研究也证实了S-100蛋白阳性细胞发挥作用需T细胞参与，且发现它的浸润与T辅助细胞及T诱导细胞呈明显的正相关。S-100蛋白阳性细胞抗肿瘤免疫中被认为先移于肿瘤细胞之间，通过它的树突与肿瘤细胞密切接触，获得肿瘤抗原后，移行到局部淋巴结，将肿瘤抗原递呈给T细胞，发挥T细胞的细胞毒作用而杀伤破坏肿瘤细胞，形成有效的免疫监视。
作者简介：胡孙宏，男，硕士，主治医师。
参考文献
[1]Takahashi K. Immunohischemical and immunoelectron microscope localization of S-100 protein in the interdigitating reticulum cell of the human lymph node〔J〕. Virchows Arch B Cell Pathol,1981,37:125
, 百拇医药
[2]倪宗瓒主编.医学统计学〔M〕.人民卫生出版社，1990：196
[3]Schenk CS. Larynxkarazinom laryngol rhinol otol〔J〕. Ihre grenzed,1980,59:232
[4]Ambe K, Mori M, Enjoji M. S-100 protein-positive dendritic cells in colorectal adenocarcinomas〔J〕. Cancer,1989,63:498
(收稿日期：2000-04-28；修回日期：2000-08-24), 百拇医药
单位：胡孙宏(浙江大学医学院附属邵逸夫医院耳鼻咽喉科-头颈外科 杭州 310016)；孙晓南(浙江大学医学院附属邵逸夫医院放疗科)
关键词：喉肿瘤；免疫组化；S-100蛋白
肿瘤000521 摘要：目的 探讨S-100蛋白检测与喉癌的生物学行为及预后关系。方法 采用免疫组化方法以抗S-100蛋白抗体标记68例喉癌组织和21例非喉癌组织中S-100蛋白树突状阳性细胞。结果 68例喉癌组织中S-100蛋白细胞阳性检出率为63.2%(43/68)，主要散在于肿瘤细胞间和间质中，非喉癌组织中很少见到S-100蛋白阳性细胞(按同一标准S-100蛋白细胞阳性检出率为0 %)，在癌组织中它与喉癌的病理分级、临床分期相关(P<0.05)，病理分化程度越差、临床分期越高，S-100蛋白细胞的检出发率越低。且发现它的分布情况与喉癌预后有关，S-100蛋白阳性者术后生率(68.7%)明显高于阴性者(39.3%)(P<0.05)。结论 喉癌组织中出现S-100蛋白阳性细胞者，预后好，在临床上，S-100蛋白细胞的检测，对判断喉癌预后有一定参考价值。
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中图分类号：R739.65 文献标识码：A
文章编号：1000-7431(2000)05-0373-02
IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF S-100 PROTEIN IN LARYNGEAL CARCINOMA
HU Sun-hong,SUN Xiao-nan.
(Department of Otorhinolaryngy and Head Neck Surgery, Sir Run Shaw Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310016,China)
Abstract：Objective To study the distribution of S-100 protein and the relationship between S-100 protein and protein and prognosis in laryngeal carcinoma.Methods S-100 protein was observed by immunohistochemical methods using anti-S-100 protein antibody in 68 laryngeal carcinoma and non-cancer laryngeal tissues. Results The results showed that S-100 protein positive was found 43(63.24%) in 68 laryngeal carcinoma patients. S-100 protein positive cells were interspersed among the tumor cells and in the stroma. S-100 protein were rare in the non-cancer laryngeal tissues. The detection of S-100 protein was related to tumor grade and stage. The prooer the differentiation of laryngeal carcinoma, The less the number of S-100 protein positive cells. S-100 protein ngeative was more seen in advanced stages of carcinoma. The five year survival rate in patients with S-100 protein positive was significatly higher than that in patients with S-100 protein negative. Conclusion Our results indicated that the detection of S-100 protein was of value for the prognostic analysis in patients with laryngeal carcinoma.
, 百拇医药
Key words：Laryngeal neoplasms； Immunohistochemical; S-100 protein
在研究机体免疫功能状态时，人们注意到一种特殊类型的组织细胞——树状突细胞，它能合成和分泌S-100蛋白质，简称S-100蛋白阳性细胞[1]，在机体抗肿瘤免疫中，S-100蛋白阳性细胞通过处理抗原，递呈抗原，激发T细胞增殖，启动机体免疫应答来参与肿瘤免疫，因此，S-100蛋白阳性细胞的浸润被认为是机体抗肿瘤免疫反应标志之一。
材料与方法
随机抽取68例 1985～1995年间术前未行放疗或化疗的原发性喉癌石蜡标本，病理分级和临床分期参考UICC 1997年方案，病理分级：Ⅰ级25例，Ⅱ级29例，Ⅲ～Ⅳ级14例，均行HE染色，并经病理渤检查核实；临床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期22例。68例中年龄38～68岁，中位年龄52岁，均有随访资料，术后一个月内死亡及死于其他疾病者不在估计预后。同时取2例尸检声带标本、10例喉不典型增生，9例喉乳头状瘤为对照组。
, http://www.100md.com
将每个蜡块作连续切片，约5 μm，共切2张，常规HE染色1张，另1张做免疫组化染色(ABC法)。
ABC法 石蜡切片以二甲苯常规脱蜡，酒精脱水，置冰箱过夜；0.2 %胃蛋白酶和0.1 N HCL消化；0.3 % H2O2甲醛阻断内源性过氧化物酶；正常血清封闭非特异性位点；加抗S-100蛋白抗体于湿合中，4 ℃冰箱过夜(阴性对照用PBS代替Ⅰ抗)；置室温2 h后PBS漂洗；加生物素化羊抗兔或鼠IgG(37 ℃) 1 h；加ABC试剂，37 ℃，1 h；DAB显色；酒精脱水；二甲苯透明；中性树胶封片。
结果均在Olympus显微镜下观察，S-100蛋白阳性细胞在癌肿中×400镜下观察，随机10个视野，计其均数，每个视野少于5个为S-100蛋白阴性，多于或等于为阳性。各组数据之间采用χ2检验，生存率用寿命表法计算，生存率曲线采用Kaplan-Meier方法描绘，生存率比较用对数秩和检验(Long-rank test)。
, 百拇医药
结 果
在正常及良性喉病变组织中仅见少量S-100蛋白阳性细胞散在分布于间质中，根据观察标准其S-100蛋白阳性率为0。68例喉癌组织中有43例发现S-100蛋白阳性，S-100蛋白阳性细胞均被染色深棕色，胞浆呈树突状，有分枝，有的伸入癌细胞间。在高分化喉癌巢旁表现明显。在整个癌组织中S-100蛋白阳性细胞分布不均匀，高分化鳞癌中多为阳性，低分化鳞癌中分布很少，有的呈阴性。S-100蛋白主要散在分布于癌巢及巢旁的结缔组织中，多位于癌巢周边，而中央区域少。
从表1、表2中可见S-100蛋白阳性细胞的分布与喉癌的病理分级，临床分期相关。喉癌病理分化程度越差或临床分期越高，S-100蛋白阳性率越低。本组68例病例均有随访资料，按寿命表法推算[2]，术后五年生存率为51.8%，S-100蛋白阳性喉癌术后生存率为68.7%，阴性者为39.3%，两者经对数秩和检验，差异有显著性意义(P<0.05)，生存率曲线经Long-rank test检验，S-100蛋白阳性喉癌的生存率明显高于S-100蛋白阴性喉癌的生存率(P<0.05)。
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表1 S-100蛋白阳性细胞与喉癌病理分级的关系 病理分级
S-100蛋白阳性
S-100蛋白阴性
病例数
病例数
(%)
病例数
(%)
Ⅰ级
22
(88.0)
3
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(12.0)
25
Ⅱ级
15
(51.7)
14
(48.3)
29
Ⅲ～Ⅳ级
6
(42.9)
8
(57.1)
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14
合计
43
(63.2)
25
(36.8)
68
P<0.05表2 S-100蛋白阳性细胞与喉癌临床分期的关系 临床分期
S-100蛋白阳性
S-100蛋白阴性
病例数
病例数
, 百拇医药
(%)
病例数
(%)
Ⅰ级
23
(82.1)
5
(17.9)
28
Ⅱ级
10
(55.6)
8
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(44.4)
18
Ⅲ～Ⅳ级
10
(45.5)
12
(54.5)
22
合计
43
(63.2)
25
(36.8)
, 百拇医药
68
P<0.05
讨 论
在免疫组织化学上，S-100蛋白可用于常规石蜡组织中的检测。早在1980年Schenk等[3]在电镜下发现喉鳞状细胞癌组织中有S-100蛋白树状突阳性细胞的浸润。本文应用免疫组化方法用S-100蛋白质标记喉癌中的S-100蛋白阳性细胞，观察到它多位于邻近正常组织的癌组织中，在癌巢中则多位于周边，癌巢中央区域很少。本研究发现喉癌组织中S-100蛋白阳性细胞的分布与预后有密切的关系。S-100蛋白阳性病人术后五年生存率明显高于阴性病人(P<0.05)，且发现喉癌中S-100蛋白的分布与喉癌的侵袭也相关。Ambe等[4]在结肠腺癌中也发现了S-100蛋白的分布与预后有密切关系，认为癌组织中S-100蛋白数量多的患者术后生存率明显长于癌组织中S-100蛋白数量少的病人。相似的结论见于肺癌、鼻咽癌、口腔癌、甲状腺乳头状腺癌。这些结果表明S-100蛋白阳性细胞具有抑制肿瘤生长和复发，参与机体抗肿瘤免疫，代表机体免疫潜力，因此，S-100蛋白的检测可用于估计肿瘤预后的标志。
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S-100蛋白阳性细胞在肿瘤中的浸润作用已有文献报道，认为它参与机体抗肿瘤免疫。在参与机体抗肿瘤免疫时，需其他细胞协同作用，尤其是T淋巴细胞。许多研究也证实了S-100蛋白阳性细胞发挥作用需T细胞参与，且发现它的浸润与T辅助细胞及T诱导细胞呈明显的正相关。S-100蛋白阳性细胞抗肿瘤免疫中被认为先移于肿瘤细胞之间，通过它的树突与肿瘤细胞密切接触，获得肿瘤抗原后，移行到局部淋巴结，将肿瘤抗原递呈给T细胞，发挥T细胞的细胞毒作用而杀伤破坏肿瘤细胞，形成有效的免疫监视。
作者简介：胡孙宏，男，硕士，主治医师。
参考文献
[1]Takahashi K. Immunohischemical and immunoelectron microscope localization of S-100 protein in the interdigitating reticulum cell of the human lymph node〔J〕. Virchows Arch B Cell Pathol,1981,37:125
, 百拇医药
[2]倪宗瓒主编.医学统计学〔M〕.人民卫生出版社，1990：196
[3]Schenk CS. Larynxkarazinom laryngol rhinol otol〔J〕. Ihre grenzed,1980,59:232
[4]Ambe K, Mori M, Enjoji M. S-100 protein-positive dendritic cells in colorectal adenocarcinomas〔J〕. Cancer,1989,63:498
(收稿日期：2000-04-28；修回日期：2000-08-24), 百拇医药