脑梗死患者可溶性E-和P-选择素水平变化及意义
作者：曾杨滨 杨期东 彭光莹 许治强
单位：曾杨滨(广州市第二人民医院神经内科 510150)；彭光莹(广州市第二人民医院神经内科 510150)；许治强(广州市第二人民医院神经内科 510150)；杨期东(湖南医科大学附属湘雅医院神经内科)
关键词：脑梗死；选择素族；肿瘤坏死因子；白介素-6
脑与神经疾病杂志000504
摘 要 目的：探讨E-和P-选择素与脑梗死的关系。方法 应用ELISA方法测定30例脑梗死患者，25例脑出血患者及28例正常人的sE-和sP-选择素血清水平。结果 急性期脑便死患者sE-和sP-选择素血清水平明显高于脑出血患者及正常人。急性期脑梗死患者sE-和sP-选择素水平分别与WBC、N%、IL-6水平呈正相关关系，sP-选择素水平还与TNF水平呈正相关关系。结论 sE-和sP-选择素血清水平增高反映脑便死急性期E-和P-选择素可能在TNF和IL-6的刺激下，参与脑梗死损伤过程。
, 百拇医药
The significance of the changes of soluble E- and P- selectins in patients with acute cerebral infarction
Zeng Yangbin Yang Qidong Peng Guangying et al.
(Department of Neurology,Guangzhou Second Hospital,Guangzhou,510150)
Abstract Objective To determine the roles of E-and P-selectins in the pathogenesis of cerebral infarction.Methods:The serum concentrations of sE-and sP-selectns were measured with ELISA in 30 cerebral infarction,25cerebral haemorrhage and 28 healthy control subjects.Result:The serum levels of sE-and sP-selectins in acute stage of cerebral infarction group were significantly higher than those in cerebral haemorrhage and those in healthy control group.In sE-selectin,as well as the level of sP- selectin,was observed in positive correlation with the WBC,N%,or the level of IL-6 respectively.The level of sP-selectin was also positively correlated with the level of TNF.Conclusions:The increased levels of sE-and sP- selectins reflected these two selectins might be enhanced the endotheliocyte- leukocyte adhesion,under the stimulations of TNF and IL-6,so as to be involved in the cerebral injury after acute cerebral infarction.
, 百拇医药
Key words Cerebral infarction Selectins TNF IL-6
E-选择素由活化的血管内皮细胞合成并在其表面表达，P-选择素存在于血管内皮细胞和血小板内，在炎症反应或缺血等情况刺激下，才在这些细胞膜上表达。实验已证明，E-和P-选择素介导白细胞与血管内皮细胞最初粘附。急性脑梗死时，局灶区E-和P-选择素表达明显增强[1～2]。可溶性E-选择素(sE-选择素)是E-选择素从血管内皮细胞膜脱落而来，可溶性P-选择素(sP-选择素)则来自于血管内皮细胞及血小板的膜型P-选择素。目前有些学者报道可溶性选择素与脑梗死的临床改变存在一定的关系[3，4]。为进一步探讨选择素在脑梗死过程中的作用，本研究采用ELISA双抗体夹心法测定脑梗死患者sE-和sP-选择素的血清水平的变化，并与脑出血及正常对照组作比较，同时分析它们与外周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(N%)以及肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-6(IL-6)等前炎性细胞因子的关系，结果报道如下。
, 百拇医药
材 料 和 方 法
一、一般资料
1.脑梗死组： 随机选择在我科住院的急性脑梗死患者30例，均经临床体检及头颅CT确诊，诊断标准按第4届全国脑血管病会议所制订的标准[5]。并排除炎症、肿瘤及免疫性疾病。梗死部位： 脑叶8例，基底节区16例，丘脑4例，脑干2例。根据Pullitono提出的公式计算梗死灶体积，小于4cm3者7例，4-10cm3者14例，大于10cm3者9例。其中男15例，女15例，平均年龄66.8±9.0岁。
2.脑出血对照组： 随机选择脑出血患者25例，无感染、肿瘤和免疫性疾病，其中男14例，女11例，平均年龄64.4±7.8岁。
3.正常人对照组： 随机选择门诊体检者28例，经临床体检及实验室检查，排除心、肝、肾、脑等器质性病变以及高血压、糖尿病、各种炎症、肿瘤以及免疫性疾病。其中男16例，女12例，平均年龄62.5±8.6岁。各组在年龄、性别方面具有可比性(P>0.05)。
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二、实验指标及检测方法： 脑梗死组、脑出血组急性期(发病3天内)、恢复期(发病第3周末)以及正常对照组经禁食8～10小时后清晨卧位抽静脉血。sE-和sP-选择素水平测定采用ELISA双抗体夹心法，试剂盒由奥地利Bender Medsystems Diagnostics GmbH公司产。IL-6血清水平测定亦采用ELISA双抗体夹心法，试剂盒由美国Endogen公司产。TNF血清水平测定采用液相竞争放免法，试剂盒由北京东亚免疫技术研究所产。白细胞计数及中性粒细胞百分比测定采用美国CELL-DYN3500R血常规分析仪。
三、统计学处理： 所有数据用
±s表示。组间数据比较先作方差分析，再作q检验，各变量间关系作直接相关分析。
结 果
1.脑梗死组、脑出血组与正常对照组sE-和sP-选择素血清水平、WBC、N%、TNF及IL-6血清水平测定结果见表1。
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表1 脑梗死组、脑出血组与正常对照组sE-和sP-选择素血清水平、WBC、N%、TNF和IL-6血清水平的测定结果 组别
例数
sE-选择素
(ng/ml)
sP-选择素
(ng/ml)
WBC
(X109/L)
N%
%
TNF
, 百拇医药
(ng/ml)
IL-6
(pg/ml)
脑梗死组
急性期
30
65.2±39.4△#**
399±134△△**##
7.50±2.0△*#
69.8±7.0△**
1.69±0.66△△**
, 百拇医药
49.6±12.3△△**
恢复期
25
46.8±17.7
209±108
6.31±0.9
61.5±7.14
1.15±0.53
25.8±7.21**
脑出血组
急性期
25
, 百拇医药
44.6±11.8
243±112
9.41±2.70△△**
73.7±12.7△**
1.55±0.49△△**
54.1±15.3△△**
恢复期
20
45.7±10.1
220±118
6.60±1.21
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60.3±7.30
1.08±0.41
30.6±9.72**
对照组
28
40.5±12.5
227±106
6.17±1.33
59.7±8.87
1.02±0.35
14.4±6.10
注： 与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01； 同组不同期之间比较，△P<0.05，△△P<0.01； 脑梗死与脑出血组同期之间比较，#P<0.05，##P<0.01
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2.脑梗死及脑出血患者sE-和sP-选择素血清水平之间关系及它们与WBC、N%、TNF及IL-6血清水平关系的相关性分析结果： 脑梗死急性期sE-选择与sP-选择素水平、WBC、N%和IL-6血清水平均呈正相关关系(r值分别为0.475，0.376，0.452和0.385，P值均小于0.05)，sP-选择素水平与WBC、N%、IL-6和TNF血清水平均呈正相关关系(r值分别为0.479，0.386，0.499和0.608，P值均小于0.05)； 脑梗死恢复期、脑出血急性期和恢复期上述各指标间均无直线相关关系。
讨 论
本研究结果显示，sE-和sP-选择素在急性期脑梗死患者中的血清水平明显高于脑出血患者及正常人，而该组患者恢复期这两种选择素血清水平则无明显升高。这一结果与E-和P-选择素在脑梗死局灶区表达增强是一致的，这提示sE-和sP-选择素血清水平的增高反映了这两种选择素直接参与了脑梗死的发病过程。同时，本研究结果表明，脑梗死急性期sE-选择素与sP-选择素水平呈明显正相关关系。这提示两者脑梗死过程中，可能相互协同作用，共同促进白细胞的粘附。
, 百拇医药
实验已证明，脑缺血有一个急性炎症反应的过程[6]。本研究结果提示，脑梗死急性期外周血白细胞计数及中性粒细胞百分比与同期sE-和sP-选择素血清水平均呈正相关关系。这一结果表明，在脑梗死早期，外周血白细胞的变化与sE-和sP-选择素血清水平的变化密切相关。此时血液中的白细胞需完成与血管壁的接触，在血管内皮细胞上滚动、牢固结合以及跨内皮细胞转运等过程，才能进入脑实质。而这些过程需各种粘附分子的参与，其中E-和P-选择素介导白细胞与血管内皮细胞的“滚动”粘附，同时，E-选择素还能激活中性粒细胞的CD11b整合素促进白细胞与血管内皮细胞的牢固结合。由于sE-和sP-选择素分别是膜型E-和P-选择素的可溶性分子形式，所以它们血清水平的增高反映了在脑梗死早期这两种选择素所介导的白细胞与血管内皮细胞粘附作用的增强。
有文献报道，当脑梗死发生时，在脑缺血部位前炎性细胞因子IL-6、TNF的表达增加，并可以诱导E-和P-选择素的表达[7]。本文结果发现，脑梗死急性期患者sE-和sP-选择素水平与IL-6血清水平均存在正相关关系，sP-选择素水平还与TNF血清水平呈正相关关系。据此推测，脑梗死后血清TNF及IL-6水平增高，刺激血管内皮细胞表达E-和P-选择素以及血小板表达P-选择素，以至这两种选择素血清水平升高。
, 百拇医药
综上所述，sE-和sP-选择素水平增高反映了这两种选择素可能在前炎性细胞因子TNF和IL-6的刺激下，共同促进白细胞与内皮细胞的粘附，从而参与了脑梗死损伤过程。深入研究选择素与脑梗死的关系，有助于更好地预防和治疗缺血性脑血管病。
参考文献
1，Zhang RL,Chopp M,Zhang ZG,et al.The expression of P- and E- selectins in three models of middle cerebral artery occlusion.Brain Res,1998,785(2)∶207～214.
2，Zhang RL,Chopp M,Zhang ZG,et al.E-selectin in focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat.J Cereb Blood Flow and Metab,1996,16(6)∶1126～1136.
, 百拇医药
3，Bitsch A,Klone W,Murtada,L,et al.A longitudinal prospective study of soluble adhesion molecules in acute stroke.Stroke,1998,29(10)∶2129～2135.
4，Frijns CJ,Kappelle LT,van Gijn J,et al.Soluble adhesion molecules reflect endothelial cell activation in ischemic stroke and in carotid atherosclerosis.Stroke,1997,28(11)∶2214～2218.
5，中华神经科学会，中华神经外科学会.各类脑血管疾病诊断要点.中华神经科杂志，1996，29(6)∶379～380.
6，Garcia JH,Liu KF,Yoshida Y,et al.Influx of leukocytes and platelets in anevolving brain infart(Wistar rat).Am J Pathol,1994,144(1)∶188～199.
7，del Zoppo GJ.Microvascular responses to cerebral ischemia/in flammation.Ann N Y Acad Sci,1997,823∶132～147.
收稿日期：2000-04-11, 百拇医药
单位：曾杨滨(广州市第二人民医院神经内科 510150)；彭光莹(广州市第二人民医院神经内科 510150)；许治强(广州市第二人民医院神经内科 510150)；杨期东(湖南医科大学附属湘雅医院神经内科)
关键词：脑梗死；选择素族；肿瘤坏死因子；白介素-6
脑与神经疾病杂志000504
摘 要 目的：探讨E-和P-选择素与脑梗死的关系。方法 应用ELISA方法测定30例脑梗死患者，25例脑出血患者及28例正常人的sE-和sP-选择素血清水平。结果 急性期脑便死患者sE-和sP-选择素血清水平明显高于脑出血患者及正常人。急性期脑梗死患者sE-和sP-选择素水平分别与WBC、N%、IL-6水平呈正相关关系，sP-选择素水平还与TNF水平呈正相关关系。结论 sE-和sP-选择素血清水平增高反映脑便死急性期E-和P-选择素可能在TNF和IL-6的刺激下，参与脑梗死损伤过程。
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The significance of the changes of soluble E- and P- selectins in patients with acute cerebral infarction
Zeng Yangbin Yang Qidong Peng Guangying et al.
(Department of Neurology,Guangzhou Second Hospital,Guangzhou,510150)
Abstract Objective To determine the roles of E-and P-selectins in the pathogenesis of cerebral infarction.Methods:The serum concentrations of sE-and sP-selectns were measured with ELISA in 30 cerebral infarction,25cerebral haemorrhage and 28 healthy control subjects.Result:The serum levels of sE-and sP-selectins in acute stage of cerebral infarction group were significantly higher than those in cerebral haemorrhage and those in healthy control group.In sE-selectin,as well as the level of sP- selectin,was observed in positive correlation with the WBC,N%,or the level of IL-6 respectively.The level of sP-selectin was also positively correlated with the level of TNF.Conclusions:The increased levels of sE-and sP- selectins reflected these two selectins might be enhanced the endotheliocyte- leukocyte adhesion,under the stimulations of TNF and IL-6,so as to be involved in the cerebral injury after acute cerebral infarction.
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Key words Cerebral infarction Selectins TNF IL-6
E-选择素由活化的血管内皮细胞合成并在其表面表达，P-选择素存在于血管内皮细胞和血小板内，在炎症反应或缺血等情况刺激下，才在这些细胞膜上表达。实验已证明，E-和P-选择素介导白细胞与血管内皮细胞最初粘附。急性脑梗死时，局灶区E-和P-选择素表达明显增强[1～2]。可溶性E-选择素(sE-选择素)是E-选择素从血管内皮细胞膜脱落而来，可溶性P-选择素(sP-选择素)则来自于血管内皮细胞及血小板的膜型P-选择素。目前有些学者报道可溶性选择素与脑梗死的临床改变存在一定的关系[3，4]。为进一步探讨选择素在脑梗死过程中的作用，本研究采用ELISA双抗体夹心法测定脑梗死患者sE-和sP-选择素的血清水平的变化，并与脑出血及正常对照组作比较，同时分析它们与外周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(N%)以及肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-6(IL-6)等前炎性细胞因子的关系，结果报道如下。
, 百拇医药
材 料 和 方 法
一、一般资料
1.脑梗死组： 随机选择在我科住院的急性脑梗死患者30例，均经临床体检及头颅CT确诊，诊断标准按第4届全国脑血管病会议所制订的标准[5]。并排除炎症、肿瘤及免疫性疾病。梗死部位： 脑叶8例，基底节区16例，丘脑4例，脑干2例。根据Pullitono提出的公式计算梗死灶体积，小于4cm3者7例，4-10cm3者14例，大于10cm3者9例。其中男15例，女15例，平均年龄66.8±9.0岁。
2.脑出血对照组： 随机选择脑出血患者25例，无感染、肿瘤和免疫性疾病，其中男14例，女11例，平均年龄64.4±7.8岁。
3.正常人对照组： 随机选择门诊体检者28例，经临床体检及实验室检查，排除心、肝、肾、脑等器质性病变以及高血压、糖尿病、各种炎症、肿瘤以及免疫性疾病。其中男16例，女12例，平均年龄62.5±8.6岁。各组在年龄、性别方面具有可比性(P>0.05)。
, 百拇医药
二、实验指标及检测方法： 脑梗死组、脑出血组急性期(发病3天内)、恢复期(发病第3周末)以及正常对照组经禁食8～10小时后清晨卧位抽静脉血。sE-和sP-选择素水平测定采用ELISA双抗体夹心法，试剂盒由奥地利Bender Medsystems Diagnostics GmbH公司产。IL-6血清水平测定亦采用ELISA双抗体夹心法，试剂盒由美国Endogen公司产。TNF血清水平测定采用液相竞争放免法，试剂盒由北京东亚免疫技术研究所产。白细胞计数及中性粒细胞百分比测定采用美国CELL-DYN3500R血常规分析仪。
三、统计学处理： 所有数据用
±s表示。组间数据比较先作方差分析，再作q检验，各变量间关系作直接相关分析。结 果
1.脑梗死组、脑出血组与正常对照组sE-和sP-选择素血清水平、WBC、N%、TNF及IL-6血清水平测定结果见表1。
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表1 脑梗死组、脑出血组与正常对照组sE-和sP-选择素血清水平、WBC、N%、TNF和IL-6血清水平的测定结果 组别
例数
sE-选择素
(ng/ml)
sP-选择素
(ng/ml)
WBC
(X109/L)
N%
%
TNF
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(ng/ml)
IL-6
(pg/ml)
脑梗死组
急性期
30
65.2±39.4△#**
399±134△△**##
7.50±2.0△*#
69.8±7.0△**
1.69±0.66△△**
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49.6±12.3△△**
恢复期
25
46.8±17.7
209±108
6.31±0.9
61.5±7.14
1.15±0.53
25.8±7.21**
脑出血组
急性期
25
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44.6±11.8
243±112
9.41±2.70△△**
73.7±12.7△**
1.55±0.49△△**
54.1±15.3△△**
恢复期
20
45.7±10.1
220±118
6.60±1.21
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60.3±7.30
1.08±0.41
30.6±9.72**
对照组
28
40.5±12.5
227±106
6.17±1.33
59.7±8.87
1.02±0.35
14.4±6.10
注： 与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01； 同组不同期之间比较，△P<0.05，△△P<0.01； 脑梗死与脑出血组同期之间比较，#P<0.05，##P<0.01
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2.脑梗死及脑出血患者sE-和sP-选择素血清水平之间关系及它们与WBC、N%、TNF及IL-6血清水平关系的相关性分析结果： 脑梗死急性期sE-选择与sP-选择素水平、WBC、N%和IL-6血清水平均呈正相关关系(r值分别为0.475，0.376，0.452和0.385，P值均小于0.05)，sP-选择素水平与WBC、N%、IL-6和TNF血清水平均呈正相关关系(r值分别为0.479，0.386，0.499和0.608，P值均小于0.05)； 脑梗死恢复期、脑出血急性期和恢复期上述各指标间均无直线相关关系。
讨 论
本研究结果显示，sE-和sP-选择素在急性期脑梗死患者中的血清水平明显高于脑出血患者及正常人，而该组患者恢复期这两种选择素血清水平则无明显升高。这一结果与E-和P-选择素在脑梗死局灶区表达增强是一致的，这提示sE-和sP-选择素血清水平的增高反映了这两种选择素直接参与了脑梗死的发病过程。同时，本研究结果表明，脑梗死急性期sE-选择素与sP-选择素水平呈明显正相关关系。这提示两者脑梗死过程中，可能相互协同作用，共同促进白细胞的粘附。
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实验已证明，脑缺血有一个急性炎症反应的过程[6]。本研究结果提示，脑梗死急性期外周血白细胞计数及中性粒细胞百分比与同期sE-和sP-选择素血清水平均呈正相关关系。这一结果表明，在脑梗死早期，外周血白细胞的变化与sE-和sP-选择素血清水平的变化密切相关。此时血液中的白细胞需完成与血管壁的接触，在血管内皮细胞上滚动、牢固结合以及跨内皮细胞转运等过程，才能进入脑实质。而这些过程需各种粘附分子的参与，其中E-和P-选择素介导白细胞与血管内皮细胞的“滚动”粘附，同时，E-选择素还能激活中性粒细胞的CD11b整合素促进白细胞与血管内皮细胞的牢固结合。由于sE-和sP-选择素分别是膜型E-和P-选择素的可溶性分子形式，所以它们血清水平的增高反映了在脑梗死早期这两种选择素所介导的白细胞与血管内皮细胞粘附作用的增强。
有文献报道，当脑梗死发生时，在脑缺血部位前炎性细胞因子IL-6、TNF的表达增加，并可以诱导E-和P-选择素的表达[7]。本文结果发现，脑梗死急性期患者sE-和sP-选择素水平与IL-6血清水平均存在正相关关系，sP-选择素水平还与TNF血清水平呈正相关关系。据此推测，脑梗死后血清TNF及IL-6水平增高，刺激血管内皮细胞表达E-和P-选择素以及血小板表达P-选择素，以至这两种选择素血清水平升高。
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综上所述，sE-和sP-选择素水平增高反映了这两种选择素可能在前炎性细胞因子TNF和IL-6的刺激下，共同促进白细胞与内皮细胞的粘附，从而参与了脑梗死损伤过程。深入研究选择素与脑梗死的关系，有助于更好地预防和治疗缺血性脑血管病。
参考文献
1，Zhang RL,Chopp M,Zhang ZG,et al.The expression of P- and E- selectins in three models of middle cerebral artery occlusion.Brain Res,1998,785(2)∶207～214.
2，Zhang RL,Chopp M,Zhang ZG,et al.E-selectin in focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat.J Cereb Blood Flow and Metab,1996,16(6)∶1126～1136.
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3，Bitsch A,Klone W,Murtada,L,et al.A longitudinal prospective study of soluble adhesion molecules in acute stroke.Stroke,1998,29(10)∶2129～2135.
4，Frijns CJ,Kappelle LT,van Gijn J,et al.Soluble adhesion molecules reflect endothelial cell activation in ischemic stroke and in carotid atherosclerosis.Stroke,1997,28(11)∶2214～2218.
5，中华神经科学会，中华神经外科学会.各类脑血管疾病诊断要点.中华神经科杂志，1996，29(6)∶379～380.
6，Garcia JH,Liu KF,Yoshida Y,et al.Influx of leukocytes and platelets in anevolving brain infart(Wistar rat).Am J Pathol,1994,144(1)∶188～199.
7，del Zoppo GJ.Microvascular responses to cerebral ischemia/in flammation.Ann N Y Acad Sci,1997,823∶132～147.
收稿日期：2000-04-11, 百拇医药