活动性结核标志物与PCR对照检测诊断肺结核的临床应用探讨
作者：刘建英 冯明丽
单位：563002 贵州省遵义地区医院
关键词：活动性结核标志物；聚合酶链反应；结核，肺；诊断；生物学标记
实用医学杂志000620 摘 要 目的：探讨活动性结核标志物(ATM)和PCR对肺结核的临床应用价值。方法：对163例患者分别进行痰、血PCR检测和痰涂片结核菌检查的同时用同一患者血清行ATM检测，观察其阳性率。结果：42例肺结核、54例疑诊肺结核、27例结核性胸液患者经痰、血PCR和血清ATM检测，两种检测方法阳性率差异无显著意义(P>0.05)，痰PCR检测阳性率高于血PCR检测。两种检测方法与痰涂片结核菌检查差异具有非常显著意义(P<0.01)。结论：ATM检测法与PCR技术对结核病的诊断具有同样的敏感性，特异性。由于PCR操作过程中易受污染，故ATM检测法的特异性更加令人满意。两种方法均具有省时、简便、可行、低廉的特点。而ATM检测在一定程度上弥补了PCR法不能诊断肺外结核的不足。
, 百拇医药
聚合酶链反应(PCR)技术为结核的快速诊断提供了新方法。但因其高敏感性所致的操作技术中存在的问题，如标本易污染等，在应用中有一定局限性[1]。我院于1997～1998年间对163例肺结核、疑诊肺结核、肺癌患者进行痰、血PCR检测的同时，采用患者血清进行活动性结核标志物(active tuberculosis mark,ATM)检测，以探讨其对肺结核的诊断价值和临床意义。
1 资料与方法
1.1 资料来源 (1)肺结核：42例均根据病史、临床症状、胸片及痰结核菌检测确诊。其中浸润性肺结核32例，慢性纤维空洞性肺结核10例，年龄14～52岁，平均34.6岁。(2)疑诊肺结核：54例为肺部浸润性疾病收入内科住院患者，其中诊断肺炎24例，慢性支气管炎30例。54例患者入院后经联合抗炎综合治疗，其效果不佳或无效，胸片示病灶无吸收或较前进展。(3)肺癌：28例均经组织学或细胞学证实。肺内无陈旧性结核病灶，患者无结核中毒症状。年龄32～72岁，>50岁25例。(4)胸腔积液：27例结核性胸水患者入院后经胸穿抽胸水检查确诊，年龄15～38岁，平均22.1岁。12例癌性胸水经细胞学确诊，>50岁9例。
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1.2 标本收集和方法 (1)ATM检测：采用成都军区实验诊断研究所制备的ATM检测试剂盒。取受试者静脉血1 ml，及时分离，取血清10 μ l，加入反应板小孔中置37℃，湿度饱和环境，反应6 h，经0.85%NaCl浸泡去除未因反应结合的杂蛋白，取出待干燥后氨基黑B染色。孔周呈现圆形蓝色着色环为阳性，同背景无色透明者为阴性[2]。胸腔积液者取胸水1 ml参照上述方法行ATM检测。(2)PCR检测：用同一患者的血、痰行PCR检测的同时，分别行痰涂片结核菌检查3次。PCR试剂盒由华美生物工程公司(SABC)成都分公司提供，扩增仪为美国BIORAD公司生产。结核菌DNA的提取参照SABC方法进行。扩增物经25%琼脂糖电泳后，在紫外线灯下观察到一条清晰的245 bp为阳性，否则为阴性。
1.3 统计学分析 资料用χ2检验进行统计学处理，P<0.05有统计学意义。
2 结果
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2.1 各组患者检测结果 见表1。
表1 三种方法检测结核菌阳性结果比较[例(%)] 疾病
例
数
ATM(+)
PCR(+)
痰涂片(+)
血清
胸水
血
痰
肺结核
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42
35(83.3)*△
32(76.2)*
37(88.1)*
9(21.4)
疑诊肺结核
54
31(57.4)*△
32(59.3)*
35(64.8)*
4(7.4)
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肺癌
28
0(0)
1(3.6)
2(7.2)
0(0)
结核性胸液
27
22(81.5)*△
25(92.6)
21(77.8)*
16(59.3)
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1(3.7)
癌性胸液
12
0(0)
0(0)
0(0)
1(8.3)
0(0)
注：与痰涂片法比较 * P<0.01，与血PCR检测法比较 △ P>0.05
2.2 疑诊肺结核 54例疑诊肺结核患者经给予四联抗结核治疗后，临床症状缓解，X线胸片动态观察病灶吸收，支持肺结核诊断。
3 讨论
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ATM是近年发现的一类蛋白生物素物质，仅存在于各系统，包括肺内、肺外结核病患者的体液中，当人体自然感染结核菌或体内旧结核病灶复发处于活动期时，该物质可在特定的试验条件下被检出[3]。此方法的应用为临床提供了一个全新的免疫学方法。本组采用ATM与PCR对照检测结果表明，两种方法无明显差异，对肺结核病的检测具有同样的敏感性和特异性。本组肺结核者痰PCR阳性率高于血PCR检测，与李国利等[3]报道相符，而结核性胸液者痰PCR检测阳性率低，可能与非深部痰或未收集到痰标本有关。而PCR虽有高敏感性，但在操作过程中易造成污染。本组28例肺癌，1例血PCR，2例痰PCR阳性说明偶然性污染造成假阳性仍是一个值得重视的问题[2]。本组27例结核性胸水ATM检测，25例阳性，阳性率达92.6%，而肺癌和癌性胸水的血清及胸水ATM检测无一例阳性，从而表明ATM的特异性更加令人满意。同时胸水ATM的检测为临床结核与非结核性胸腔积液的鉴别诊断提供了一种有效的辅检方法。
ATM和PCR检测与痰涂片检查的阳性率均有明显的差异。痰涂片检查所需的时间与PCR和ATM相同，但阳性率远低于该两种方法，且特异性差。ATM检测不仅省时、简便、易行，且费用较PCR低，更适合于各级，尤其是基层医院实验室开展。加之检测对象不是抗原、抗体，故解决了肺外结核深部病变取材困难及不受是否预防接种和曾患过结核病的影响，从而避免了其局限性，在一定程度上弥补了PCR法在大量肺外结核中无法开展诊断上的不足[4]。而二者联合使用互补，可明显提高对结核病的检测效率。
, 百拇医药
54例疑诊肺结核患者痰涂片4例阳性，而ATM和PCR检测阳性率分别是57.4%、59.3%和64.8%。由此可见，ATM和PCR检测对可疑结核病患者的诊断和鉴别诊断具有同样的价值。总之，我们研究结果表明，ATM检测与PCR技术在敏感性，特异性方面均优于常用结核病诊断方法，且快速、易行、具有良好的重复性。适用于结核病早期快速诊断，而ATM的操作简便，价廉更适宜临床上大批人群结核病的普查和流行病调查。
参考文献
1，鄂晓轩，张欣然，李明兰，等. 利用聚合酶链反应检测122例结核病患者标本结核菌的研究. 中华结核和呼吸杂志，1994，17(1)：36～37.
2，胡 娟，刘道传，王天然，等. SRID法检测活动性结核标志物的应用探讨. 现代预防医学，1993，21(4)：52～53.
3，李国利，庄玉辉，张晓刚，等. 聚合酶链反应检测结核患者外周血结核杆菌的临床应用价值. 中华结核和呼吸杂志，1995，18(6)：243～245.
4，单培芳，冉 霓，张秋业，等. 接种卡介苗后小儿结核标志物的检测. 青岛医学院学报，1994，30(1)：52～53.
(收稿日期：1999-12-02), 百拇医药
单位：563002 贵州省遵义地区医院
关键词：活动性结核标志物；聚合酶链反应；结核，肺；诊断；生物学标记
实用医学杂志000620 摘 要 目的：探讨活动性结核标志物(ATM)和PCR对肺结核的临床应用价值。方法：对163例患者分别进行痰、血PCR检测和痰涂片结核菌检查的同时用同一患者血清行ATM检测，观察其阳性率。结果：42例肺结核、54例疑诊肺结核、27例结核性胸液患者经痰、血PCR和血清ATM检测，两种检测方法阳性率差异无显著意义(P>0.05)，痰PCR检测阳性率高于血PCR检测。两种检测方法与痰涂片结核菌检查差异具有非常显著意义(P<0.01)。结论：ATM检测法与PCR技术对结核病的诊断具有同样的敏感性，特异性。由于PCR操作过程中易受污染，故ATM检测法的特异性更加令人满意。两种方法均具有省时、简便、可行、低廉的特点。而ATM检测在一定程度上弥补了PCR法不能诊断肺外结核的不足。
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聚合酶链反应(PCR)技术为结核的快速诊断提供了新方法。但因其高敏感性所致的操作技术中存在的问题，如标本易污染等，在应用中有一定局限性[1]。我院于1997～1998年间对163例肺结核、疑诊肺结核、肺癌患者进行痰、血PCR检测的同时，采用患者血清进行活动性结核标志物(active tuberculosis mark,ATM)检测，以探讨其对肺结核的诊断价值和临床意义。
1 资料与方法
1.1 资料来源 (1)肺结核：42例均根据病史、临床症状、胸片及痰结核菌检测确诊。其中浸润性肺结核32例，慢性纤维空洞性肺结核10例，年龄14～52岁，平均34.6岁。(2)疑诊肺结核：54例为肺部浸润性疾病收入内科住院患者，其中诊断肺炎24例，慢性支气管炎30例。54例患者入院后经联合抗炎综合治疗，其效果不佳或无效，胸片示病灶无吸收或较前进展。(3)肺癌：28例均经组织学或细胞学证实。肺内无陈旧性结核病灶，患者无结核中毒症状。年龄32～72岁，>50岁25例。(4)胸腔积液：27例结核性胸水患者入院后经胸穿抽胸水检查确诊，年龄15～38岁，平均22.1岁。12例癌性胸水经细胞学确诊，>50岁9例。
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1.2 标本收集和方法 (1)ATM检测：采用成都军区实验诊断研究所制备的ATM检测试剂盒。取受试者静脉血1 ml，及时分离，取血清10 μ l，加入反应板小孔中置37℃，湿度饱和环境，反应6 h，经0.85%NaCl浸泡去除未因反应结合的杂蛋白，取出待干燥后氨基黑B染色。孔周呈现圆形蓝色着色环为阳性，同背景无色透明者为阴性[2]。胸腔积液者取胸水1 ml参照上述方法行ATM检测。(2)PCR检测：用同一患者的血、痰行PCR检测的同时，分别行痰涂片结核菌检查3次。PCR试剂盒由华美生物工程公司(SABC)成都分公司提供，扩增仪为美国BIORAD公司生产。结核菌DNA的提取参照SABC方法进行。扩增物经25%琼脂糖电泳后，在紫外线灯下观察到一条清晰的245 bp为阳性，否则为阴性。
1.3 统计学分析 资料用χ2检验进行统计学处理，P<0.05有统计学意义。
2 结果
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2.1 各组患者检测结果 见表1。
表1 三种方法检测结核菌阳性结果比较[例(%)] 疾病
例
数
ATM(+)
PCR(+)
痰涂片(+)
血清
胸水
血
痰
肺结核
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42
35(83.3)*△
32(76.2)*
37(88.1)*
9(21.4)
疑诊肺结核
54
31(57.4)*△
32(59.3)*
35(64.8)*
4(7.4)
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肺癌
28
0(0)
1(3.6)
2(7.2)
0(0)
结核性胸液
27
22(81.5)*△
25(92.6)
21(77.8)*
16(59.3)
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1(3.7)
癌性胸液
12
0(0)
0(0)
0(0)
1(8.3)
0(0)
注：与痰涂片法比较 * P<0.01，与血PCR检测法比较 △ P>0.05
2.2 疑诊肺结核 54例疑诊肺结核患者经给予四联抗结核治疗后，临床症状缓解，X线胸片动态观察病灶吸收，支持肺结核诊断。
3 讨论
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ATM是近年发现的一类蛋白生物素物质，仅存在于各系统，包括肺内、肺外结核病患者的体液中，当人体自然感染结核菌或体内旧结核病灶复发处于活动期时，该物质可在特定的试验条件下被检出[3]。此方法的应用为临床提供了一个全新的免疫学方法。本组采用ATM与PCR对照检测结果表明，两种方法无明显差异，对肺结核病的检测具有同样的敏感性和特异性。本组肺结核者痰PCR阳性率高于血PCR检测，与李国利等[3]报道相符，而结核性胸液者痰PCR检测阳性率低，可能与非深部痰或未收集到痰标本有关。而PCR虽有高敏感性，但在操作过程中易造成污染。本组28例肺癌，1例血PCR，2例痰PCR阳性说明偶然性污染造成假阳性仍是一个值得重视的问题[2]。本组27例结核性胸水ATM检测，25例阳性，阳性率达92.6%，而肺癌和癌性胸水的血清及胸水ATM检测无一例阳性，从而表明ATM的特异性更加令人满意。同时胸水ATM的检测为临床结核与非结核性胸腔积液的鉴别诊断提供了一种有效的辅检方法。
ATM和PCR检测与痰涂片检查的阳性率均有明显的差异。痰涂片检查所需的时间与PCR和ATM相同，但阳性率远低于该两种方法，且特异性差。ATM检测不仅省时、简便、易行，且费用较PCR低，更适合于各级，尤其是基层医院实验室开展。加之检测对象不是抗原、抗体，故解决了肺外结核深部病变取材困难及不受是否预防接种和曾患过结核病的影响，从而避免了其局限性，在一定程度上弥补了PCR法在大量肺外结核中无法开展诊断上的不足[4]。而二者联合使用互补，可明显提高对结核病的检测效率。
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54例疑诊肺结核患者痰涂片4例阳性，而ATM和PCR检测阳性率分别是57.4%、59.3%和64.8%。由此可见，ATM和PCR检测对可疑结核病患者的诊断和鉴别诊断具有同样的价值。总之，我们研究结果表明，ATM检测与PCR技术在敏感性，特异性方面均优于常用结核病诊断方法，且快速、易行、具有良好的重复性。适用于结核病早期快速诊断，而ATM的操作简便，价廉更适宜临床上大批人群结核病的普查和流行病调查。
参考文献
1，鄂晓轩，张欣然，李明兰，等. 利用聚合酶链反应检测122例结核病患者标本结核菌的研究. 中华结核和呼吸杂志，1994，17(1)：36～37.
2，胡 娟，刘道传，王天然，等. SRID法检测活动性结核标志物的应用探讨. 现代预防医学，1993，21(4)：52～53.
3，李国利，庄玉辉，张晓刚，等. 聚合酶链反应检测结核患者外周血结核杆菌的临床应用价值. 中华结核和呼吸杂志，1995，18(6)：243～245.
4，单培芳，冉 霓，张秋业，等. 接种卡介苗后小儿结核标志物的检测. 青岛医学院学报，1994，30(1)：52～53.
(收稿日期：1999-12-02), 百拇医药