冠状动脉粥样硬化患者血清抗HCMV抗体和抗血管内皮细胞抗体的检测及临床意义
作者：姚磊 宋文全 张征 余明芳
单位：第三军医大学新桥医院检验科 重庆 400037
关键词：动脉粥样硬化；抗巨细胞病毒抗体；抗内皮细胞抗体
重庆医学000609
摘 要 目的 探讨冠状动脉粥样硬化患者的血清抗巨细胞病毒 (HCMV)抗体和抗内皮细胞抗体(AECA)的水平及其与动脉粥样硬化(AS)的关系。方 法 应用细胞酶联免疫反应(C-ELISA)和ELISA技术检测41例冠状动脉粥样硬化患 者血清中AECA和抗HCMV抗体(IgG)。结果 41例冠心病组抗HCMVIgG抗 体的阳性率为73.2%，而对照组阳性率为31.0%。冠心病组AECA的阳性率为34.1%。结论 冠心病患者AECA和抗HCMV抗体阳性率明显增高，表明HCMV和AECA可 能在动脉粥样硬化发生发展过程中起重要作用。
, 百拇医药
Detection of Anti-endothelial Cell Antibodies and Anti-Cytom egalovirus Antibodies in the Serum of Patient with coronary atherosclerotic he ar t disease
Yao Lei, Song Wenquan,Zhang Zheng et al.
(Department of Clinical Laboratory Medicine,Xinqiao Hospital of the Third Miliatary Medical University, Chongqing 400037)
(Department of Clinical Laboratory Class 94 of the Third Miliat ary Medical University)
, 百拇医药
Abstract Objective:Detection of anti-endothelial cell antibodies and anti-cytomegalovirus antibodies in the serum of patient with co ronary atherosclerotic heart disease and to explore the relationship among CMV, AECA and atherosclerosis.Methods:AEAC were detected in ser um samples of 41 patients with AS using cell enzyme-linked immunosorbent assay( C-ELISA); the CMV(IgG)was analyzed by indirect ELISA.Results:The postive rate of AECA (34.1%)is significantly higher than that in control people;the postive rate of CMV IgG(73.2%) is higher than that of healthy people (31.0%)(P<0.01).Conclusion:CMV infection and AECA are rela ted to atherosclerosis.
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Key words:Atherosclerosis Anti-cytomegalovirus antibody Anti-endothelial cell antibody
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统的常见病，自1978年Fabricant等[ 1]用禽类疱疹病毒诱发鸡人动脉粥样硬化以来，有关巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV )感染与动脉粥样硬化的关系逐渐受到人们的重视。CMV感染血管内皮细胞(human endotheli al cell,HEC)在AS的发生发展过程中起非常重要作用[2]，我们检测了41例冠心病 患者与29例健康人抗血管内皮细胞抗体(anti-endothelial cell antibody,AECA)和抗HCMV 抗体(IgG)，目的在于探讨HCMV、HEC与AS发生发展的相互关系。
1 对象与方法
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1.1 材料
血清标本采自住院冠心病患者血清41例(男24例，女17例)，年龄在44～85岁之间，冠心病诊 断符合国际心脏病学会和协会及世界卫生组织通过的缺血性心脏病的命名及诊断标准。正常 对照组29例为健康体检者。所有标本采集后分离血清-20℃保存。
1.2 HCMV抗体的检测
HCMVIgG抗体采用间接ELISA方法进行检测，测定IgG抗体时样本按试剂盒规定做1∶40稀释， 试剂盒由兰州蓝十字生物技术有限公司提供(批号990412)，结果由美国基因公司Vmax酶标仪 进行判定。
1.3 AECA的检测
1.3.1 HEC培养及鉴定，按本室常规方法进行。
1.3.2 将培养好的人脐带静脉内皮细胞转种于96孔组织培养板(GIBCO)2 ～3天形成单层，然后用PBS液洗3次，再用0.1%戊二醛4℃固定15分钟。每孔加用PBS液1∶8 0稀释的样品100μl(空白对照只加PBS液100μl)，室温放置2小时后用PBS液洗4次，加100 μl 1∶500稀释的辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG(由本校微生物学教研室提供)，室温放 置1小时。PBS液洗后加TMB显色10分钟，HCL终止反应。波长450nm用酶标比色仪测定其OD值 。结果判定以正常对照组实际测得OD值上限(
+3s)作为阳性阈值，超过者为阳 性。
, 百拇医药
1.4 统计学分析 抗体间结合指数相关性分析采用直线回归相关性分析， 两组率的比较采用x2检验，以P<0.05相差显著，P<0.01示相差非常显著。
2 结果
2.1 抗HCMV抗体及AECA检测结果(见表1)
表1 冠心病组与正常对照组血清抗HCMV IgG
抗体及AECA的检测结果 组 别
例数
抗CMV抗体(+)
阳性率
AECA(+)
阳性率
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冠心病组
41
30
73.2%
14
34.1%
对照组
29
9
31.0%
/
/
41例冠心病患者血清中抗IgG阳性30例，阳性率73.3%。29例正常对照组中抗IgG阳性9例， 阳性率31.0%。两者相差非常显著(x2＝16.6 P<0.01)；以正常对照组实际测得OD值 上限(+3s)作为阳性阈值，超过者为阳性，41例冠心病患者AECA检测结果共 有14例阳性，阳性率为34.1%，显著高于对照组。
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2.2 抗HCMV抗体与AECA的相关性分析(见表2)表2 冠心病患者IgG-HCMV和IgG-AECA检测情况 项 目
IgG-AECA+
IgG-AECA-
合计
IgG-HCMV+
10*
20
30
IgG-HCMV-
4
7
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11
合计
14
27
41
*与IgG-HCMV阴性组相比P<0.05
AECA抗体阳性14例中有10例抗HCMV抗体也出现阳性，两者具有一定相关性，相关系数r＝0. 416。
3 讨论
动脉粥样硬化严重威胁人类健康，有关AS的病毒病因学研究逐渐受到重视，高血压、高血脂 、吸烟等危险因子只是AS病变过程中的促进因子。近年来大量的血清流行病学和分子生物学 的研究资料表明，CMV的抗原及DNA序列存在于AS的病灶组织且主要见于血管内皮细胞，CMV 感染HEC可能在AS的发生、发展过程中起重要作用。
, 百拇医药
本组检测41例冠心病患者CMV抗体，发现其检出率明显高于对照。这与Sorlie等[3] 的结果基本相似，也进一步提示CMV可能是AS形成的一个诱因。Melnick[4]对13 4例需手术治疗的AS患者和无AS症状人群进行CMV抗体检测，发现高水平血清抗体检出率两组 间有显著差异(分别为70%和43%，P<0.01)。Blum等[5]通过对冠心病患者CMV抗体 检测后发现高滴度抗体(1∶800)以上患者其患动脉再狭窄的机率远远高于低抗体滴度的患者 (P<0.05)，作者认为高滴度的CMVIgG抗体可能是冠心病的出现的较强信号，可能预示冠脉球 囊成型术后再狭窄，病毒感染导致的长期慢性免疫反应在AS形成中具有重要作用。
CMV是一组广泛感染人群的双股DNA病毒，病毒DNA能够整合到宿主细胞的染色体DNA中，这种 持续性或潜伏性感染的病毒在一些因素(高血压、高血脂、某些病毒感染等)作用下周期性的 被激活、复发，引起CMV病毒抗原表达于受染细胞表面，诱发机体产生高滴度抗体，进而促 使血管壁细胞，特别是HEC的免疫病理损伤，促使AS的形成。
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AS患者体内出现AECA是否与CMV长期潜伏感染有关呢?本实验结果显示AECA的阳性率达34.1% ，明显高于正常对照，提示AECA阳性可能与AS有关，Toyoda[6]等对心肾同种移植 患者体内AECA进行了检测，作者认为体内AEAC的出现与CMV感染诱发机体体液免疫对EC的抗 原抗体反应有关，但是其详细机制尚不清楚。HCMV有可导致细胞转化的三个形态转化区Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ(mtrⅠ、mtrⅡ、mtrⅢ)以及可调控细胞生长的病毒立早期基因(IE)，病毒DNA和蛋白 质合成会对宿主细胞蛋白质的合成表达产生影响，这种转化和长期的慢性感染可能使感染细 胞表型发生改变，从而刺激机体产生AECA。AEAC可与血管内皮结合，改变EC功能，或通过补 体介导及抗体依赖的细胞毒性作用破坏EC，导致内皮炎症的发生[7]，所以高滴度 AEAC的出现可能会加重AS患者血管损伤。有学者认为AECA阳性是内皮功能障碍的标志[ 8]，深入研究AECA的特性有助于揭示内皮损伤的原发机制。
, http://www.100md.com 总之，CMV长期慢性感染HEC，一方面促使病毒抗原表达，诱发机体产生抗体，另一方面促使 EC的表型改变，诱发机体产生AECA，二者共同作用，可使HEC产生免疫病理损伤，加速AS的 病理进程，对AS患者上述两种抗体联合检测可能对其严重程度做出判断，所以有必要对CMV 抗体与AECA的相互关系及致病机理进行进一步的研究。
参考文献
1，Fabricant CG, Fabricant J, Minick, et al. Herpesvirus induced atherogenesis. JEXP Med,1978,148:335～339
2，Melnick JL, Adam E, DeBakey ME. Cytomegalovirus and atheroscle rosis. Arch Immunol Ther Exp-arsz,1996,44(5～6)：297～302
, http://www.100md.com
3，Sorlie PD, Adam E, Melnick SL, et al. Cytomegalovirus/Herpesvi rus and Carotid Atherosclerosis: The ARIC Study. J Med Virol. 1994,42(1):33～37
4，Melnick JL,Adam E, Debakey ME. Possible role of cytomegaloviru s in atherosclerosis. JAMA, 1990,203(5):2204～2207
5，Blum A, Giladi M, Weinberg M, et al. High anti-cytomegaloviru s(CMV)IgG antibody titer is associated with coronary artery disease and may pred ict postcoronary balloon angioplasty restenosis. An J Cardiol,1998,81:7,866～868
, 百拇医药
6，Toyoda M, Galfayan K, Galera OA, et al. Cytomegalovirus infect ion induces anti-endothelial cell antibodies in cardiac and renal allograft rec ipients. Transpl Immunol,1997,5:2,104～111
7，Fox R. Antibodies to endothelial cells. Lancet,1991,337:649～6 52
8，Rosenbaun J, Pottinger BE, Woo P, et al. Measurement and chara cterization of circulating anti-endothelial cell IgG connective tissue disease. Clin Exp Immunol,1988,72:450～456
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单位：第三军医大学新桥医院检验科 重庆 400037
关键词：动脉粥样硬化；抗巨细胞病毒抗体；抗内皮细胞抗体
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摘 要 目的 探讨冠状动脉粥样硬化患者的血清抗巨细胞病毒 (HCMV)抗体和抗内皮细胞抗体(AECA)的水平及其与动脉粥样硬化(AS)的关系。方 法 应用细胞酶联免疫反应(C-ELISA)和ELISA技术检测41例冠状动脉粥样硬化患 者血清中AECA和抗HCMV抗体(IgG)。结果 41例冠心病组抗HCMVIgG抗 体的阳性率为73.2%，而对照组阳性率为31.0%。冠心病组AECA的阳性率为34.1%。结论 冠心病患者AECA和抗HCMV抗体阳性率明显增高，表明HCMV和AECA可 能在动脉粥样硬化发生发展过程中起重要作用。
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Detection of Anti-endothelial Cell Antibodies and Anti-Cytom egalovirus Antibodies in the Serum of Patient with coronary atherosclerotic he ar t disease
Yao Lei, Song Wenquan,Zhang Zheng et al.
(Department of Clinical Laboratory Medicine,Xinqiao Hospital of the Third Miliatary Medical University, Chongqing 400037)
(Department of Clinical Laboratory Class 94 of the Third Miliat ary Medical University)
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Abstract Objective:Detection of anti-endothelial cell antibodies and anti-cytomegalovirus antibodies in the serum of patient with co ronary atherosclerotic heart disease and to explore the relationship among CMV, AECA and atherosclerosis.Methods:AEAC were detected in ser um samples of 41 patients with AS using cell enzyme-linked immunosorbent assay( C-ELISA); the CMV(IgG)was analyzed by indirect ELISA.Results:The postive rate of AECA (34.1%)is significantly higher than that in control people;the postive rate of CMV IgG(73.2%) is higher than that of healthy people (31.0%)(P<0.01).Conclusion:CMV infection and AECA are rela ted to atherosclerosis.
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Key words:Atherosclerosis Anti-cytomegalovirus antibody Anti-endothelial cell antibody
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统的常见病，自1978年Fabricant等[ 1]用禽类疱疹病毒诱发鸡人动脉粥样硬化以来，有关巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV )感染与动脉粥样硬化的关系逐渐受到人们的重视。CMV感染血管内皮细胞(human endotheli al cell,HEC)在AS的发生发展过程中起非常重要作用[2]，我们检测了41例冠心病 患者与29例健康人抗血管内皮细胞抗体(anti-endothelial cell antibody,AECA)和抗HCMV 抗体(IgG)，目的在于探讨HCMV、HEC与AS发生发展的相互关系。
1 对象与方法
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1.1 材料
血清标本采自住院冠心病患者血清41例(男24例，女17例)，年龄在44～85岁之间，冠心病诊 断符合国际心脏病学会和协会及世界卫生组织通过的缺血性心脏病的命名及诊断标准。正常 对照组29例为健康体检者。所有标本采集后分离血清-20℃保存。
1.2 HCMV抗体的检测
HCMVIgG抗体采用间接ELISA方法进行检测，测定IgG抗体时样本按试剂盒规定做1∶40稀释， 试剂盒由兰州蓝十字生物技术有限公司提供(批号990412)，结果由美国基因公司Vmax酶标仪 进行判定。
1.3 AECA的检测
1.3.1 HEC培养及鉴定，按本室常规方法进行。
1.3.2 将培养好的人脐带静脉内皮细胞转种于96孔组织培养板(GIBCO)2 ～3天形成单层，然后用PBS液洗3次，再用0.1%戊二醛4℃固定15分钟。每孔加用PBS液1∶8 0稀释的样品100μl(空白对照只加PBS液100μl)，室温放置2小时后用PBS液洗4次，加100 μl 1∶500稀释的辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG(由本校微生物学教研室提供)，室温放 置1小时。PBS液洗后加TMB显色10分钟，HCL终止反应。波长450nm用酶标比色仪测定其OD值 。结果判定以正常对照组实际测得OD值上限(
+3s)作为阳性阈值，超过者为阳 性。, 百拇医药
1.4 统计学分析 抗体间结合指数相关性分析采用直线回归相关性分析， 两组率的比较采用x2检验，以P<0.05相差显著，P<0.01示相差非常显著。
2 结果
2.1 抗HCMV抗体及AECA检测结果(见表1)
表1 冠心病组与正常对照组血清抗HCMV IgG
抗体及AECA的检测结果 组 别
例数
抗CMV抗体(+)
阳性率
AECA(+)
阳性率
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冠心病组
41
30
73.2%
14
34.1%
对照组
29
9
31.0%
/
/
41例冠心病患者血清中抗IgG阳性30例，阳性率73.3%。29例正常对照组中抗IgG阳性9例， 阳性率31.0%。两者相差非常显著(x2＝16.6 P<0.01)；以正常对照组实际测得OD值 上限(
+3s)作为阳性阈值，超过者为阳性，41例冠心病患者AECA检测结果共 有14例阳性，阳性率为34.1%，显著高于对照组。, http://www.100md.com
2.2 抗HCMV抗体与AECA的相关性分析(见表2)表2 冠心病患者IgG-HCMV和IgG-AECA检测情况 项 目
IgG-AECA+
IgG-AECA-
合计
IgG-HCMV+
10*
20
30
IgG-HCMV-
4
7
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11
合计
14
27
41
*与IgG-HCMV阴性组相比P<0.05
AECA抗体阳性14例中有10例抗HCMV抗体也出现阳性，两者具有一定相关性，相关系数r＝0. 416。
3 讨论
动脉粥样硬化严重威胁人类健康，有关AS的病毒病因学研究逐渐受到重视，高血压、高血脂 、吸烟等危险因子只是AS病变过程中的促进因子。近年来大量的血清流行病学和分子生物学 的研究资料表明，CMV的抗原及DNA序列存在于AS的病灶组织且主要见于血管内皮细胞，CMV 感染HEC可能在AS的发生、发展过程中起重要作用。
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本组检测41例冠心病患者CMV抗体，发现其检出率明显高于对照。这与Sorlie等[3] 的结果基本相似，也进一步提示CMV可能是AS形成的一个诱因。Melnick[4]对13 4例需手术治疗的AS患者和无AS症状人群进行CMV抗体检测，发现高水平血清抗体检出率两组 间有显著差异(分别为70%和43%，P<0.01)。Blum等[5]通过对冠心病患者CMV抗体 检测后发现高滴度抗体(1∶800)以上患者其患动脉再狭窄的机率远远高于低抗体滴度的患者 (P<0.05)，作者认为高滴度的CMVIgG抗体可能是冠心病的出现的较强信号，可能预示冠脉球 囊成型术后再狭窄，病毒感染导致的长期慢性免疫反应在AS形成中具有重要作用。
CMV是一组广泛感染人群的双股DNA病毒，病毒DNA能够整合到宿主细胞的染色体DNA中，这种 持续性或潜伏性感染的病毒在一些因素(高血压、高血脂、某些病毒感染等)作用下周期性的 被激活、复发，引起CMV病毒抗原表达于受染细胞表面，诱发机体产生高滴度抗体，进而促 使血管壁细胞，特别是HEC的免疫病理损伤，促使AS的形成。
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AS患者体内出现AECA是否与CMV长期潜伏感染有关呢?本实验结果显示AECA的阳性率达34.1% ，明显高于正常对照，提示AECA阳性可能与AS有关，Toyoda[6]等对心肾同种移植 患者体内AECA进行了检测，作者认为体内AEAC的出现与CMV感染诱发机体体液免疫对EC的抗 原抗体反应有关，但是其详细机制尚不清楚。HCMV有可导致细胞转化的三个形态转化区Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ(mtrⅠ、mtrⅡ、mtrⅢ)以及可调控细胞生长的病毒立早期基因(IE)，病毒DNA和蛋白 质合成会对宿主细胞蛋白质的合成表达产生影响，这种转化和长期的慢性感染可能使感染细 胞表型发生改变，从而刺激机体产生AECA。AEAC可与血管内皮结合，改变EC功能，或通过补 体介导及抗体依赖的细胞毒性作用破坏EC，导致内皮炎症的发生[7]，所以高滴度 AEAC的出现可能会加重AS患者血管损伤。有学者认为AECA阳性是内皮功能障碍的标志[ 8]，深入研究AECA的特性有助于揭示内皮损伤的原发机制。
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参考文献
1，Fabricant CG, Fabricant J, Minick, et al. Herpesvirus induced atherogenesis. JEXP Med,1978,148:335～339
2，Melnick JL, Adam E, DeBakey ME. Cytomegalovirus and atheroscle rosis. Arch Immunol Ther Exp-arsz,1996,44(5～6)：297～302
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3，Sorlie PD, Adam E, Melnick SL, et al. Cytomegalovirus/Herpesvi rus and Carotid Atherosclerosis: The ARIC Study. J Med Virol. 1994,42(1):33～37
4，Melnick JL,Adam E, Debakey ME. Possible role of cytomegaloviru s in atherosclerosis. JAMA, 1990,203(5):2204～2207
5，Blum A, Giladi M, Weinberg M, et al. High anti-cytomegaloviru s(CMV)IgG antibody titer is associated with coronary artery disease and may pred ict postcoronary balloon angioplasty restenosis. An J Cardiol,1998,81:7,866～868
, 百拇医药
6，Toyoda M, Galfayan K, Galera OA, et al. Cytomegalovirus infect ion induces anti-endothelial cell antibodies in cardiac and renal allograft rec ipients. Transpl Immunol,1997,5:2,104～111
7，Fox R. Antibodies to endothelial cells. Lancet,1991,337:649～6 52
8，Rosenbaun J, Pottinger BE, Woo P, et al. Measurement and chara cterization of circulating anti-endothelial cell IgG connective tissue disease. Clin Exp Immunol,1988,72:450～456
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