硫氮卓酮对失血性休克犬肺泡Ⅱ型细胞的影响
作者：张玉芹 欧阳静萍 李端详 涂淑珍
单位：张玉芹(武汉科技大学医学院 430080)；欧阳静萍 李端详 涂淑珍(湖北医科大学基础学院)
关键词：犬；失血性休克；硫氮卓酮；肺泡；Ⅱ型细胞
中国现代医学杂志000605 目的：探讨硫氮卓酮(Diltiazem简称Dil)对失血性体克犬肺泡Ⅱ型细胞的影响。方法：动脉放血，使血压降低至5.33～6.67kPa(40～50mmHg)，维持90min后回输血液进行复苏。在休克30min时，分别给动物输注生理盐水和Dil。结果：Dil能明显提高失血性休克动物的平均动脉压(MAP)；降低肺组织中的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性；电镜显示使用Dil后肺泡Ⅱ型细胞板层体较多，微绒毛完整。结论：Dil对失血性休克犬的肺泡Ⅱ型细胞具有保护作用。
分类号 R605.971
, 百拇医药
INFLUENCE OF DILTIAZEM TO THE ALVELOUS
CELL Ⅱ OF THE HEMORRHAGIC SHOCK DOGS
Zhang Yuqing
Medical College of Wuhan Science and Technology, Wuhan 430080
Ouyang Jingping，Li Duanxiang，Tu shuzheng
Basic College of Hubei Medical University
[Abstract] Objective: To discuss the diltiazem's influence to the alveolus cell Ⅱ of the hemorrhagic shock dogs. Methods: The experimental dogs ' blood pressure were reduced to 5.33～6.67kPa (40～50mmHg) by artery bloodletting. After 30 min ut es of shocking, normal salt and Diltiazem were infused into the dog seperately. Then recover the dogs by transfusing blood after 90 minutes. Results: Diltiazem can remarkablly enhance the MAP of the hemorrhagic shock dogs, and reduce the co ntent of MDA and the activation of SOD in lung tissue. After using Dil, there ar e more lamellar bodies in alveolus cell Ⅱ and the mini-villuses are complete un der the electron microscope. Conclusions: Dil has protective fun ction to the alveolus cell Ⅱ of the hemorrhagic shock dogs.
, 百拇医药
Key words: Dog; Hemorrhagic Shock; Diltiazem; Alveolus Cell Ⅱ
休克时出现呼吸困难症侯群，这是休克发展过程中导致休克肺的重要表现，进一步引起组织细胞缺血、缺氧，使线粒体磷酸化速度减慢，细胞内ATP减少，胞浆内钙离子大量蓄积，氧自由基(OFR)产生增多，膜脂质过氧化(LPO)增强，引起组织细胞死亡，功能受损，导致了休克的不可逆性。Dil是钙通道的阻滞剂，对失血性休克时犬的肝、肾组织能起到有效的保护作用[1]。目前，关于休克肺的研究普遍受到重视，已知肺泡Ⅱ型细胞在维持肺的通气、交换功能上起着重要的作用，Ⅱ型细胞是否受损是引起休克肺的关键。本实验研究了在休克时，Dil对肺泡Ⅱ型细胞的影响。并检测了肺组织中的MDA含量和SOD活性，以探讨Dil对肺组织的保护作用及机理。
1 材料与方法
健康成年杂种犬11只，雌雄不拘，体重10～12kg。戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉，肝素抗凝。右股动脉插管通过压力换能器输入四导生理记录仪(上海医用电子仪器厂)记录股动脉平均动脉压(MAP)。左股动脉插管连接可调压的储血瓶，备放血。一侧股静脉插管供输血、输液和给药用。股动脉放血在30min内使MAP降至5.33～6.67kPa(40～50mmHg)，维持30min后随机分成两组。对照组(n=5)，从静脉匀速输注生理盐水0.2ml/kg/min，15min输完。实验组(n=6),Dil(上海淮海制约厂提供)0.6mg/kg，用等量生理盐水稀释，从股静脉输入，15min内输完。休克90min后开始回输放出的血液，60min内输完。实验结束后用空气栓塞法处死动物，并快速取出肺组织，先后置于2.5%的戊二醛和1%的锇酸中固定，系列乙醇脱水，环树脂包埋后超薄切片，在Hitachi透射电镜下观察肺泡Ⅱ型细胞。肺组织中MDA含量按Ohkawa法测定，SOD活性按Misra法检测。实验数据用平均数±标准差(
±s)表示，两组间均数比较采用两样本均数t检验[1]。
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2 实验结果
2.1 静脉输入Dil对失血性休克犬MAP的影响
休克后60min～180min内检测到的MAP，见表1。
表1 Dil对失血性休克犬MAP(kPa)的影响 (±s) 组别
n
放血前
休克时
给药后即刻
15min
30min
, 百拇医药
60min
90min
120min
150min
180min
对照组
5
18.34±1.47
6.22±0.51
6.73±2.41
7.39±3.00
11.33±3.59
, 百拇医药
13.33±3.07
13.27±2.07
12.00±2.11
11.92±2.51
12.12±2.92
实验组
6
16.91±3.29
6.00±0.31
6.86±1.21
7.34±1.45
12.91±3.14
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14.82±1.851)
15.39±1.471)
15.79±1.462)
15.67±1.592)
15.72±1.642)
注：与对照组比较1)P<0.05 2)P<0.01
2.2 Dil对失血性休克犬肝脏组织MDA及SOD的影响
休克时肺组织中MDA含量和SOD活性均明显降低，见表2。表2 Dil对失血性休克犬肺组织MDA及SOD的影响 (±s) 组别
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n
MDA(nmol/mg.pro)
SOD(U/mg.pro)
对照组
5
7.7975±2.2938
248.22±49.01
实验组
6
4.6043±0.8916
164.63±75.9
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注：与对照值比较P<0.01
2.3 肺泡Ⅱ型细胞的超微结构变化
对照组肺组织的超微结构显示：肺泡Ⅱ型细胞内板层数量少，而且大部分变成空泡。实验组肺组织超微结构显示；肺泡Ⅱ型细胞板层体数量多，微绒毛完整。两组间差异非常显著(见附图)。
附图 Dil对失血休克犬肺超微结构的影响
A. 对照组：肺泡Ⅱ型细胞板层体变成空泡。
B. Dil组：肺泡Ⅱ型细胞板层体较多，微绒毛完整。
3 讨论
肺泡组织由Ⅰ、Ⅱ型细胞构成，Ⅱ型细胞胞质内富含线粒体、粗面内质网、高尔基复合体、板层体，板层体以吐胞的形式分泌表面活性物质(主要成分为二棕榈酰卵磷脂)，其半衰期为15h，肺泡内表面活性物质可能每18～24h更换1次。正常情况下，表面活性物质能使肺泡回缩力降低，减少吸气阻力，使吸气大为省力；吸气末时，增强肺泡的回缩力，防止肺泡过于膨大；而在呼气末时使肺泡回缩力减少，避免肺泡萎缩。此外，Ⅱ型细胞在Ⅰ型细胞损伤后(因Ⅰ型细胞无增殖能力)，分裂增殖转化为Ⅰ型细胞。因此Ⅱ细胞在肺的组织结构和功能上极为重要[2]。
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有实验发现，失血性休克几小时后，肺泡表面活性物质的作用显著降低。Henry用放射性同位素P32测定，发现在肺萎缩前，肺磷脂代谢己发生变化，使表面活性物质的生成减少，引起肺萎缩。由于肺萎缩渗出液易进入肺间质引起肺水肿；还可以使肺的顺应性降低，改变肺的压力-容积关系，使肺泡难以继续扩大，肺循环分流率增加，从而引起机体缺氧[2]。组织缺血、缺氧，使ATP大量分解、中性粒细胞自由基释放的激活以及线粒体内单价泄漏增多，是OFR生成增多的途径，OFR与细胞膜以及具有膜结构的亚细胞器不饱和脂肪酸的LPO作用是引起细胞损害的主要途径。不饱和脂肪酸与OFR作用，最终降解为MDA[3]，因此测量肺组织中的MDA的含量，不仅可反映休克时OFR的生成与否，同时也反映了OFR对细胞的损伤程度。
钙通道阻断剂和OFR清除剂对失血性休克犬显示了有益的作用。在实验中，我们观察休克犬静脉输入Dil后能显著提高MAP，已知，采取多种方法提高血压，是抗休克的重要手段之一，MAP的提高，保证了组织的有效循环灌流，增加肺循环血量，保证了肺泡的灌流，为休克的转归提供有利的条件。实验组犬肺组织中MDA含量明显降低，表明Dil具有显著减弱LPO过程；我们还能通过电镜结果：Dil组肺泡Ⅱ型内板层数量多，微绒毛完整，表面活性物质分泌功能好；而对照组的板层体呈空泡样改变，更进一步证明实验组使用Dil抗休克，不是通过SOD清除OFR起作用，因为在应用Dil后，肺组织中的SOD的活性并没有增加，反而低于对照组。而是Dil作为一种钙拮抗剂，通过阻断Ca2+的内流减少OFR生成，降低LPO过程，对肺泡Ⅱ型细胞起了极为有效的保护作用。
参考文献
1，夏志雄，李彦树，刘志军，等.硫氮卓酮对失血性休克犬肝的保护作用及机理.中国现代医学杂志，1999；9(10)：18～19
2，李晓林，李守朝.临床休克.西安：陕西科技出版社，1991：49～191
3，Freeman BA,Crapo ID.Free radical and tissue damge.Lab Invest,1982;47:412～414, http://www.100md.com
单位：张玉芹(武汉科技大学医学院 430080)；欧阳静萍 李端详 涂淑珍(湖北医科大学基础学院)
关键词：犬；失血性休克；硫氮卓酮；肺泡；Ⅱ型细胞
中国现代医学杂志000605 目的：探讨硫氮卓酮(Diltiazem简称Dil)对失血性体克犬肺泡Ⅱ型细胞的影响。方法：动脉放血，使血压降低至5.33～6.67kPa(40～50mmHg)，维持90min后回输血液进行复苏。在休克30min时，分别给动物输注生理盐水和Dil。结果：Dil能明显提高失血性休克动物的平均动脉压(MAP)；降低肺组织中的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性；电镜显示使用Dil后肺泡Ⅱ型细胞板层体较多，微绒毛完整。结论：Dil对失血性休克犬的肺泡Ⅱ型细胞具有保护作用。
分类号 R605.971
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INFLUENCE OF DILTIAZEM TO THE ALVELOUS
CELL Ⅱ OF THE HEMORRHAGIC SHOCK DOGS
Zhang Yuqing
Medical College of Wuhan Science and Technology, Wuhan 430080
Ouyang Jingping，Li Duanxiang，Tu shuzheng
Basic College of Hubei Medical University
[Abstract] Objective: To discuss the diltiazem's influence to the alveolus cell Ⅱ of the hemorrhagic shock dogs. Methods: The experimental dogs ' blood pressure were reduced to 5.33～6.67kPa (40～50mmHg) by artery bloodletting. After 30 min ut es of shocking, normal salt and Diltiazem were infused into the dog seperately. Then recover the dogs by transfusing blood after 90 minutes. Results: Diltiazem can remarkablly enhance the MAP of the hemorrhagic shock dogs, and reduce the co ntent of MDA and the activation of SOD in lung tissue. After using Dil, there ar e more lamellar bodies in alveolus cell Ⅱ and the mini-villuses are complete un der the electron microscope. Conclusions: Dil has protective fun ction to the alveolus cell Ⅱ of the hemorrhagic shock dogs.
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Key words: Dog; Hemorrhagic Shock; Diltiazem; Alveolus Cell Ⅱ
休克时出现呼吸困难症侯群，这是休克发展过程中导致休克肺的重要表现，进一步引起组织细胞缺血、缺氧，使线粒体磷酸化速度减慢，细胞内ATP减少，胞浆内钙离子大量蓄积，氧自由基(OFR)产生增多，膜脂质过氧化(LPO)增强，引起组织细胞死亡，功能受损，导致了休克的不可逆性。Dil是钙通道的阻滞剂，对失血性休克时犬的肝、肾组织能起到有效的保护作用[1]。目前，关于休克肺的研究普遍受到重视，已知肺泡Ⅱ型细胞在维持肺的通气、交换功能上起着重要的作用，Ⅱ型细胞是否受损是引起休克肺的关键。本实验研究了在休克时，Dil对肺泡Ⅱ型细胞的影响。并检测了肺组织中的MDA含量和SOD活性，以探讨Dil对肺组织的保护作用及机理。
1 材料与方法
健康成年杂种犬11只，雌雄不拘，体重10～12kg。戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉，肝素抗凝。右股动脉插管通过压力换能器输入四导生理记录仪(上海医用电子仪器厂)记录股动脉平均动脉压(MAP)。左股动脉插管连接可调压的储血瓶，备放血。一侧股静脉插管供输血、输液和给药用。股动脉放血在30min内使MAP降至5.33～6.67kPa(40～50mmHg)，维持30min后随机分成两组。对照组(n=5)，从静脉匀速输注生理盐水0.2ml/kg/min，15min输完。实验组(n=6),Dil(上海淮海制约厂提供)0.6mg/kg，用等量生理盐水稀释，从股静脉输入，15min内输完。休克90min后开始回输放出的血液，60min内输完。实验结束后用空气栓塞法处死动物，并快速取出肺组织，先后置于2.5%的戊二醛和1%的锇酸中固定，系列乙醇脱水，环树脂包埋后超薄切片，在Hitachi透射电镜下观察肺泡Ⅱ型细胞。肺组织中MDA含量按Ohkawa法测定，SOD活性按Misra法检测。实验数据用平均数±标准差(
±s)表示，两组间均数比较采用两样本均数t检验[1]。, http://www.100md.com
2 实验结果
2.1 静脉输入Dil对失血性休克犬MAP的影响
休克后60min～180min内检测到的MAP，见表1。
表1 Dil对失血性休克犬MAP(kPa)的影响 (
±s) 组别n
放血前
休克时
给药后即刻
15min
30min
, 百拇医药
60min
90min
120min
150min
180min
对照组
5
18.34±1.47
6.22±0.51
6.73±2.41
7.39±3.00
11.33±3.59
, 百拇医药
13.33±3.07
13.27±2.07
12.00±2.11
11.92±2.51
12.12±2.92
实验组
6
16.91±3.29
6.00±0.31
6.86±1.21
7.34±1.45
12.91±3.14
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14.82±1.851)
15.39±1.471)
15.79±1.462)
15.67±1.592)
15.72±1.642)
注：与对照组比较1)P<0.05 2)P<0.01
2.2 Dil对失血性休克犬肝脏组织MDA及SOD的影响
休克时肺组织中MDA含量和SOD活性均明显降低，见表2。表2 Dil对失血性休克犬肺组织MDA及SOD的影响 (
±s) 组别, http://www.100md.com
n
MDA(nmol/mg.pro)
SOD(U/mg.pro)
对照组
5
7.7975±2.2938
248.22±49.01
实验组
6
4.6043±0.8916
164.63±75.9
, http://www.100md.com
注：与对照值比较P<0.01
2.3 肺泡Ⅱ型细胞的超微结构变化
对照组肺组织的超微结构显示：肺泡Ⅱ型细胞内板层数量少，而且大部分变成空泡。实验组肺组织超微结构显示；肺泡Ⅱ型细胞板层体数量多，微绒毛完整。两组间差异非常显著(见附图)。
附图 Dil对失血休克犬肺超微结构的影响
A. 对照组：肺泡Ⅱ型细胞板层体变成空泡。
B. Dil组：肺泡Ⅱ型细胞板层体较多，微绒毛完整。
3 讨论
肺泡组织由Ⅰ、Ⅱ型细胞构成，Ⅱ型细胞胞质内富含线粒体、粗面内质网、高尔基复合体、板层体，板层体以吐胞的形式分泌表面活性物质(主要成分为二棕榈酰卵磷脂)，其半衰期为15h，肺泡内表面活性物质可能每18～24h更换1次。正常情况下，表面活性物质能使肺泡回缩力降低，减少吸气阻力，使吸气大为省力；吸气末时，增强肺泡的回缩力，防止肺泡过于膨大；而在呼气末时使肺泡回缩力减少，避免肺泡萎缩。此外，Ⅱ型细胞在Ⅰ型细胞损伤后(因Ⅰ型细胞无增殖能力)，分裂增殖转化为Ⅰ型细胞。因此Ⅱ细胞在肺的组织结构和功能上极为重要[2]。
, http://www.100md.com
有实验发现，失血性休克几小时后，肺泡表面活性物质的作用显著降低。Henry用放射性同位素P32测定，发现在肺萎缩前，肺磷脂代谢己发生变化，使表面活性物质的生成减少，引起肺萎缩。由于肺萎缩渗出液易进入肺间质引起肺水肿；还可以使肺的顺应性降低，改变肺的压力-容积关系，使肺泡难以继续扩大，肺循环分流率增加，从而引起机体缺氧[2]。组织缺血、缺氧，使ATP大量分解、中性粒细胞自由基释放的激活以及线粒体内单价泄漏增多，是OFR生成增多的途径，OFR与细胞膜以及具有膜结构的亚细胞器不饱和脂肪酸的LPO作用是引起细胞损害的主要途径。不饱和脂肪酸与OFR作用，最终降解为MDA[3]，因此测量肺组织中的MDA的含量，不仅可反映休克时OFR的生成与否，同时也反映了OFR对细胞的损伤程度。
钙通道阻断剂和OFR清除剂对失血性休克犬显示了有益的作用。在实验中，我们观察休克犬静脉输入Dil后能显著提高MAP，已知，采取多种方法提高血压，是抗休克的重要手段之一，MAP的提高，保证了组织的有效循环灌流，增加肺循环血量，保证了肺泡的灌流，为休克的转归提供有利的条件。实验组犬肺组织中MDA含量明显降低，表明Dil具有显著减弱LPO过程；我们还能通过电镜结果：Dil组肺泡Ⅱ型内板层数量多，微绒毛完整，表面活性物质分泌功能好；而对照组的板层体呈空泡样改变，更进一步证明实验组使用Dil抗休克，不是通过SOD清除OFR起作用，因为在应用Dil后，肺组织中的SOD的活性并没有增加，反而低于对照组。而是Dil作为一种钙拮抗剂，通过阻断Ca2+的内流减少OFR生成，降低LPO过程，对肺泡Ⅱ型细胞起了极为有效的保护作用。
参考文献
1，夏志雄，李彦树，刘志军，等.硫氮卓酮对失血性休克犬肝的保护作用及机理.中国现代医学杂志，1999；9(10)：18～19
2，李晓林，李守朝.临床休克.西安：陕西科技出版社，1991：49～191
3，Freeman BA,Crapo ID.Free radical and tissue damge.Lab Invest,1982;47:412～414, http://www.100md.com