三叉神经脱髓鞘病变中T细胞检测的意义
作者：叶廷军 刘会敏 陈泳莲 姜晓钟
单位：叶廷军(第二军医大学长征医院病理科，上海 200003)；刘会敏(第二军医大学长征医院病理科，上海 200003)；陈泳莲(第二军医大学长征医院病理科，上海 200003)；姜晓钟(第二军医大学长征医院口腔科，上海 200003)
关键词：三叉神经；脱髓鞘；T淋巴细胞
第二军医大学学报000635 【中图分类号】 R 593 【文献标识码】 B
【文章编号】 0258-879X(2000)06-0596-02
三叉神经脱髓鞘病变过程中的T细胞增多，其病理特点为血管周围的单核细胞浸润和节段性髓鞘脱失，此型脱髓鞘病变均是一种细胞免疫介导的疾病。参与细胞免疫应答的T细胞成分有两大群，即CD4+和CD8+。它们可直接介导发生损害，并且诱导B细胞产生病变原性自身抗体而攻击靶器官。研究T细胞及其亚群对三叉神经的作用，对探讨脱髓鞘病变的发生机制及探索有效的防治方法具有指导意义。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 临床资料 50例于1995～1998年入本院治疗的三叉神经痛患者，均经临床及必要的辅助性检查，诊断为原发性三叉神经痛32例，继发性18例。其中，男性30例，女性20例；年龄45～66岁，平均51.7岁；病程3～7年。患病部位：右Ⅱ10例，右Ⅲ10例，左Ⅱ10例，左Ⅲ10例，左Ⅱ，Ⅲ10例。经药物治疗及局部封闭治疗均无效，其中18例为经一次手术治疗后复发者，手术治疗均采用经口内行三叉神经撕脱术。
1.2 标本 上述50例患者病变的神经组织标本置于10%甲醛溶液中固定24 h。分别取横切面、纵切面，纵切面长度为1 cm，常规石蜡包埋，经苏木精-伊红(H-E)染色及脱髓鞘染色(Weil铁苏木精染色)后，诊断为轻度脱髓鞘病变20例，中度脱髓鞘病变17例，重度脱髓鞘病变13例。
1.3 免疫组化染色 对上述标本进行免疫组化染色，采用ABC免疫酶标法。CD3，CD4+，CD8+ ，生物素化兔抗鼠，ABC复合物均为Dako公司产品。另取10份正常神经组织作为实验对照。
, 百拇医药
1.4 判断与分析 在物镜40倍显微镜下观察CD3，CD4+，CD8+阳性细胞在病变神经中的分布特征。淋巴细胞阳性程度判断标准：细胞质着色呈浅棕色者计为(+)，棕色者(++)，深棕色者(+++)，与背景不能分辨者(±)；(+)～(+++)者判断为阳性。此外，对不同脱髓鞘病变组织标本中的T淋巴细胞进行计数分析，计数范围: 纵切面计数长度为1 cm，横切面计数为0.2 cm2；每例标本均观测10个不同视野，计数染色阳性的淋巴细胞。
1.5 统计学处理 采用方差分析及多组均数两两比较的q检验。
2 结 果
2.1 T淋巴细胞在神经组织中的分布及形态学特征 T淋巴细胞及其亚群在三叉神经组织中的免疫组化阳性表达呈棕色，特点为：沿血管壁外膜浸润分布，在神经纤维衣束膜间呈灶状和散在分布。病变区域的T淋巴细胞阳性表达增强(图1显示部分结果)，阳性细胞数增多；阳性细胞呈节段性、局灶性分布，神经纤维呈轻、中度损害伴水肿。病变处的毛细血管内皮细胞突起处可见CD4+，CD8+表达阳性的淋巴细胞由管腔内向血管壁外穿越及炎细胞浸润。
, 百拇医药
图 1 三叉神经病变区CD4+ 表达阳性(ABC×400)
2.2 各病变组CD3，CD4+，CD8+的阳性表达结果 50例病变的三叉神经组织标本，CD3，CD4+，CD8+的总阳性表达率分别为70%(35/50),60%(30/50)和60%(30/50)。原发性三叉神经痛者，CD3，CD4+，CD8+的阳性表达率分别为53.1%(17/32)，50.0%(16/32)和43.8%(14/32)；继发性者阳性表达率分别为61.1%(11/18)，50.0%(9/18)和44.4%(8/18)，均无显著差异。病变组CD3，CD4+，CD8+阳性表达细胞计数均明显高于对照组(P<0.05)；不同程度脱髓鞘病变组之间CD3阳性表达细胞计数无显著性差异，轻、重度病变组CD4+表达均低于中度病变组，而轻、中度病变组CD8+表达均低于重度病变组(表1)。
, 百拇医药
表 1 各病变组中CD3,CD4+,CD8+
表达阳性的细胞计数(
±s) 分组
例数
CD3
CD4+
CD8+
正常
10
1.43±0.5
0.45±0.3
, http://www.100md.com
0.62±0.1
轻度
20
2.85±0.62*
1.54±0.6*△
1.24±0.2*△
中度
17
3.23±0.51*
2.86±0.2*
2.03±0.5*
, 百拇医药
重度
13
3.01±0.42*
1.51±0.2*△
3.02±0.4*△
*P<0.05 与正常组比较；△P<0.05 与中度组比较
3 讨 论
参与三叉神经脱髓鞘病变的T细胞免疫作用具有三大特点：(1)细胞免疫异常，病变可见T淋巴细胞及其亚群增多及增生活跃。(2)针对周围神经髓鞘成分的细胞免疫异常，表现为淋巴细胞转化实验及白细胞移动实验高于正常人的2倍。(3)细胞免疫攻击靶细胞，病理表现为周围神经髓鞘成分变化，有少许部位的细胞浸润(代表着神经损伤的特征)，这种浸润通常表现在损伤早期或中期病变，由淋巴细胞环绕着一个淋巴管或一个血管组成，然后这些细胞数量增多并浸入病变的神经组织中，浸润的T淋巴细胞及其亚群产生免疫应答，直接损害神经组织和雪旺细胞，使炎症区域扩大[1～3]。本实验观察到病变神经组织中的炎症细胞大多数围绕血管分布及散在分布，血管内皮细胞开放处可见淋巴细胞穿越现象，免疫组化显示主要成分是淋巴细胞。本组病例各病变组CD3，CD4+，CD8+总阳性表达率分别为70%,60%和60%，在原发组和复发组间无明显差异。将浸润的淋巴细胞进行分类比较，结果发现，病变组CD3，CD4+，CD8+阳性表达细胞计数均明显高于对照组；CD3阳性表达细胞计数在各病变组之间无明显变化；而CD4+阳性细胞计数在中度脱髓鞘病变组显著高于轻度及重度病变组；CD8+在不同程度病变组中的表达呈上升趋势，重度脱髓鞘病变组阳性细胞计数显著高于轻度、中度组。重度病变组中CD4+与CD8+的阳性表达细胞计数呈负相关(r2=0.125，P<0.05)。
, 百拇医药
关于T淋巴细胞及其亚群在脱髓鞘病变中的作用，CD4+细胞可导致B淋巴细胞克隆增殖并转化为浆细胞，继而产生抗髓鞘的抗体，激活的CD4+细胞还可释放一系列淋巴因子(如IL-2等)趋化到达病变部位，激活的CD8+细胞亚群对雪旺细胞有直接毒性作用和抑制免疫应答功能，抑制T细胞可直接或间接作用于B细胞，从而对体液免疫起调控作用，抑制T细胞也可作用于细胞毒性T细胞而发挥免疫应答[4]。而脱髓鞘病变的发生可能是由于抑制性T细胞功能缺陷，而致细胞毒性T细胞破坏和吞噬“自己”的“髓索”，引发脱髓鞘病变。提示脱髓鞘病变中的T淋巴细胞聚集和增多，可引B淋巴细胞及一系列细胞因子参与免疫应答，破坏和吞噬“自己”的“髓索”，加速和加重脱髓鞘发生和发展。
【作者简介】叶廷军(1954～)，男(汉族)，主管技师
【参考文献】
, 百拇医药 [1] 秦新月.细胞因子在MS发病机制中的作用[J].国外医学*内科学分册，1997, 24(10)：425.
[2] Ford AL, Goodsall AL, Hickey WF, et al. Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting.Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein reactive CD4+ T cells compared[J]. J Immunol, 1995, 154(9): 4309-4321.
[3] Gritchfield JM, Racke MK, Zuniga-Pflucker JC，et al. T cell deletion in high antigen dose therapy of autoimmune encephalomyelitis[J]. Science ,1994, 263(5150): 1139-1143.
[4] Racke MK, Critchfield JM, Quigley L，et al. Intravenous antigen administration as a therapy for autoimmune demyelinating disease[J].Ann Neurol, 1996, 39(1): 46-56
【收稿日期】1999-12-09
【修回日期】2000-04-11, http://www.100md.com
单位：叶廷军(第二军医大学长征医院病理科，上海 200003)；刘会敏(第二军医大学长征医院病理科，上海 200003)；陈泳莲(第二军医大学长征医院病理科，上海 200003)；姜晓钟(第二军医大学长征医院口腔科，上海 200003)
关键词：三叉神经；脱髓鞘；T淋巴细胞
第二军医大学学报000635 【中图分类号】 R 593 【文献标识码】 B
【文章编号】 0258-879X(2000)06-0596-02
三叉神经脱髓鞘病变过程中的T细胞增多，其病理特点为血管周围的单核细胞浸润和节段性髓鞘脱失，此型脱髓鞘病变均是一种细胞免疫介导的疾病。参与细胞免疫应答的T细胞成分有两大群，即CD4+和CD8+。它们可直接介导发生损害，并且诱导B细胞产生病变原性自身抗体而攻击靶器官。研究T细胞及其亚群对三叉神经的作用，对探讨脱髓鞘病变的发生机制及探索有效的防治方法具有指导意义。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 临床资料 50例于1995～1998年入本院治疗的三叉神经痛患者，均经临床及必要的辅助性检查，诊断为原发性三叉神经痛32例，继发性18例。其中，男性30例，女性20例；年龄45～66岁，平均51.7岁；病程3～7年。患病部位：右Ⅱ10例，右Ⅲ10例，左Ⅱ10例，左Ⅲ10例，左Ⅱ，Ⅲ10例。经药物治疗及局部封闭治疗均无效，其中18例为经一次手术治疗后复发者，手术治疗均采用经口内行三叉神经撕脱术。
1.2 标本 上述50例患者病变的神经组织标本置于10%甲醛溶液中固定24 h。分别取横切面、纵切面，纵切面长度为1 cm，常规石蜡包埋，经苏木精-伊红(H-E)染色及脱髓鞘染色(Weil铁苏木精染色)后，诊断为轻度脱髓鞘病变20例，中度脱髓鞘病变17例，重度脱髓鞘病变13例。
1.3 免疫组化染色 对上述标本进行免疫组化染色，采用ABC免疫酶标法。CD3，CD4+，CD8+ ，生物素化兔抗鼠，ABC复合物均为Dako公司产品。另取10份正常神经组织作为实验对照。
, 百拇医药
1.4 判断与分析 在物镜40倍显微镜下观察CD3，CD4+，CD8+阳性细胞在病变神经中的分布特征。淋巴细胞阳性程度判断标准：细胞质着色呈浅棕色者计为(+)，棕色者(++)，深棕色者(+++)，与背景不能分辨者(±)；(+)～(+++)者判断为阳性。此外，对不同脱髓鞘病变组织标本中的T淋巴细胞进行计数分析，计数范围: 纵切面计数长度为1 cm，横切面计数为0.2 cm2；每例标本均观测10个不同视野，计数染色阳性的淋巴细胞。
1.5 统计学处理 采用方差分析及多组均数两两比较的q检验。
2 结 果
2.1 T淋巴细胞在神经组织中的分布及形态学特征 T淋巴细胞及其亚群在三叉神经组织中的免疫组化阳性表达呈棕色，特点为：沿血管壁外膜浸润分布，在神经纤维衣束膜间呈灶状和散在分布。病变区域的T淋巴细胞阳性表达增强(图1显示部分结果)，阳性细胞数增多；阳性细胞呈节段性、局灶性分布，神经纤维呈轻、中度损害伴水肿。病变处的毛细血管内皮细胞突起处可见CD4+，CD8+表达阳性的淋巴细胞由管腔内向血管壁外穿越及炎细胞浸润。
, 百拇医药
图 1 三叉神经病变区CD4+ 表达阳性(ABC×400)
2.2 各病变组CD3，CD4+，CD8+的阳性表达结果 50例病变的三叉神经组织标本，CD3，CD4+，CD8+的总阳性表达率分别为70%(35/50),60%(30/50)和60%(30/50)。原发性三叉神经痛者，CD3，CD4+，CD8+的阳性表达率分别为53.1%(17/32)，50.0%(16/32)和43.8%(14/32)；继发性者阳性表达率分别为61.1%(11/18)，50.0%(9/18)和44.4%(8/18)，均无显著差异。病变组CD3，CD4+，CD8+阳性表达细胞计数均明显高于对照组(P<0.05)；不同程度脱髓鞘病变组之间CD3阳性表达细胞计数无显著性差异，轻、重度病变组CD4+表达均低于中度病变组，而轻、中度病变组CD8+表达均低于重度病变组(表1)。
, 百拇医药
表 1 各病变组中CD3,CD4+,CD8+
表达阳性的细胞计数(
±s) 分组例数
CD3
CD4+
CD8+
正常
10
1.43±0.5
0.45±0.3
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0.62±0.1
轻度
20
2.85±0.62*
1.54±0.6*△
1.24±0.2*△
中度
17
3.23±0.51*
2.86±0.2*
2.03±0.5*
, 百拇医药
重度
13
3.01±0.42*
1.51±0.2*△
3.02±0.4*△
*P<0.05 与正常组比较；△P<0.05 与中度组比较
3 讨 论
参与三叉神经脱髓鞘病变的T细胞免疫作用具有三大特点：(1)细胞免疫异常，病变可见T淋巴细胞及其亚群增多及增生活跃。(2)针对周围神经髓鞘成分的细胞免疫异常，表现为淋巴细胞转化实验及白细胞移动实验高于正常人的2倍。(3)细胞免疫攻击靶细胞，病理表现为周围神经髓鞘成分变化，有少许部位的细胞浸润(代表着神经损伤的特征)，这种浸润通常表现在损伤早期或中期病变，由淋巴细胞环绕着一个淋巴管或一个血管组成，然后这些细胞数量增多并浸入病变的神经组织中，浸润的T淋巴细胞及其亚群产生免疫应答，直接损害神经组织和雪旺细胞，使炎症区域扩大[1～3]。本实验观察到病变神经组织中的炎症细胞大多数围绕血管分布及散在分布，血管内皮细胞开放处可见淋巴细胞穿越现象，免疫组化显示主要成分是淋巴细胞。本组病例各病变组CD3，CD4+，CD8+总阳性表达率分别为70%,60%和60%，在原发组和复发组间无明显差异。将浸润的淋巴细胞进行分类比较，结果发现，病变组CD3，CD4+，CD8+阳性表达细胞计数均明显高于对照组；CD3阳性表达细胞计数在各病变组之间无明显变化；而CD4+阳性细胞计数在中度脱髓鞘病变组显著高于轻度及重度病变组；CD8+在不同程度病变组中的表达呈上升趋势，重度脱髓鞘病变组阳性细胞计数显著高于轻度、中度组。重度病变组中CD4+与CD8+的阳性表达细胞计数呈负相关(r2=0.125，P<0.05)。
, 百拇医药
关于T淋巴细胞及其亚群在脱髓鞘病变中的作用，CD4+细胞可导致B淋巴细胞克隆增殖并转化为浆细胞，继而产生抗髓鞘的抗体，激活的CD4+细胞还可释放一系列淋巴因子(如IL-2等)趋化到达病变部位，激活的CD8+细胞亚群对雪旺细胞有直接毒性作用和抑制免疫应答功能，抑制T细胞可直接或间接作用于B细胞，从而对体液免疫起调控作用，抑制T细胞也可作用于细胞毒性T细胞而发挥免疫应答[4]。而脱髓鞘病变的发生可能是由于抑制性T细胞功能缺陷，而致细胞毒性T细胞破坏和吞噬“自己”的“髓索”，引发脱髓鞘病变。提示脱髓鞘病变中的T淋巴细胞聚集和增多，可引B淋巴细胞及一系列细胞因子参与免疫应答，破坏和吞噬“自己”的“髓索”，加速和加重脱髓鞘发生和发展。
【作者简介】叶廷军(1954～)，男(汉族)，主管技师
【参考文献】
, 百拇医药 [1] 秦新月.细胞因子在MS发病机制中的作用[J].国外医学*内科学分册，1997, 24(10)：425.
[2] Ford AL, Goodsall AL, Hickey WF, et al. Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting.Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein reactive CD4+ T cells compared[J]. J Immunol, 1995, 154(9): 4309-4321.
[3] Gritchfield JM, Racke MK, Zuniga-Pflucker JC，et al. T cell deletion in high antigen dose therapy of autoimmune encephalomyelitis[J]. Science ,1994, 263(5150): 1139-1143.
[4] Racke MK, Critchfield JM, Quigley L，et al. Intravenous antigen administration as a therapy for autoimmune demyelinating disease[J].Ann Neurol, 1996, 39(1): 46-56
【收稿日期】1999-12-09
【修回日期】2000-04-11, http://www.100md.com