微波技术在超微结构病理诊断标本制备中的应用
作者：颜永碧 谢志芳 陆月良
单位：颜永碧(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海200433)；谢志芳(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海200433)；陆月良(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海200433)
关键词：微波；超微结构；显微镜检查，电子
第二军医大学学报000630 【中图分类号】R 361.3 【文献标识码】B
【文章编号】0258-879X(2000)06-0589-01
电镜作为某些疾病的病理检查的一种工具，已为广大医务工作者所熟知。但电镜样品常规制备的方法周期较长，影响及时诊断。近几年来，我们将微波照射作为常规技术应用于电镜标本制备。结果表明，该方法不仅缩短了样品制备时间，同时，还可以满足电镜诊断要求。现已成为本室制备超微结构病理诊断标本的常规技术，介绍如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本固定 选用National NN-680型微波炉，分HI，DEF，MEDHI，MED档，样品包括各种肿瘤组织、肝、肾、肺、软骨及游离细胞(血细胞，培养细胞)。 固定液用4%多聚甲醛或3%戊二醛，加0.1%单宁酸。组织块尽可能的小，一般不超过0.3～1 cm3。用一只较大的培养皿里面放置6只标本瓶，外置蒸馏水(4±0.5)℃至一定高度，每一瓶中装相等量的固定液，即使份数不够，无标本的瓶内也要用装有液体的标本瓶代替其位置。微波固定保持相同的条件，用MEDHI档20～30 s，停数秒，如此重复2～3次，室温放置1 h。游离细胞微波5～10 s，室温放置30 min。组织块经漂洗后，用1%锇酸固定。
1.2 组织块脱水、浸透、包埋及聚合 标本分别在50%，70%，90%酒精及90%丙酮中，MEDHI档20 s，室温停留2 min，纯丙酮3次，各用微波MEDHI档20 s，停留3 min。浸透，纯丙酮:包埋剂＝1∶1。MEDHI档10 s，停留1 min，再照射10 s，停留5 min。纯丙酮∶包埋剂＝1∶3，MDEHI档10 s，停留5 min，重复2次。纯包埋剂MEDHI档10 s，停留1 min，MEDHI档10 s，停留10 min。包埋后聚合的温度为70℃3 min，95℃30 min，110℃ 1 h。
, 百拇医药
1.3 超薄切片染色 醋酸铀MEDHI档30 s，蒸馏水漂洗，枸橼酸铅MEDHI档20 s，水洗，干燥后H-800电镜观察。
2 结果和讨论
电镜下各组织(肿瘤、肝、肾、肺等)细胞内的线粒体、内质网、核糖体丰富，膜结构十分清晰。
通过实验，我们对微波技术引入超微结构病理诊断电镜标本制备有以下体会：(1)微波固定的温度必须控制在37℃以下。我们曾做过比较，温度超过50℃，用光镜观察细胞结构受损不明显，但电镜下观察细胞膜已完全破坏。(2)有些样品在微波固定时须注意，如肺、软骨等，这些组织中的水或气体在进行微波照射时会出现“爆炸”现象，因此对这些组织在微波处理时采用短照射多重复的方法，我们一般是每次只照射5 s，重复4～5次，每次间隔10 s，否则会影响细胞结构。(3)制备酶细胞化学和免疫细胞化学的样品在进行微波固定时，液体中不加单宁酸，温度约15℃，用间隔微波或冰水浴(4±0.5)℃的办法来控制温度，但冰水中不能有冰块，以避免温度不均匀。(4)聚合不必在微波炉中进行。(5)电镜样品从取材到聚合只需几个小时，整个制样过程缩短，接收标本后2～3 d 内能出报告，特别受到临床医生的欢迎，使电镜和临床诊断更紧密地结合，有较好的社会效益和经济效益。
【作者简介】颜永碧(1953～)，女(汉族)，高级实验师
【收稿日期】2000-02-05
【修回日期】2000-06-07, http://www.100md.com
单位：颜永碧(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海200433)；谢志芳(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海200433)；陆月良(第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室，上海200433)
关键词：微波；超微结构；显微镜检查，电子
第二军医大学学报000630 【中图分类号】R 361.3 【文献标识码】B
【文章编号】0258-879X(2000)06-0589-01
电镜作为某些疾病的病理检查的一种工具，已为广大医务工作者所熟知。但电镜样品常规制备的方法周期较长，影响及时诊断。近几年来，我们将微波照射作为常规技术应用于电镜标本制备。结果表明，该方法不仅缩短了样品制备时间，同时，还可以满足电镜诊断要求。现已成为本室制备超微结构病理诊断标本的常规技术，介绍如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本固定 选用National NN-680型微波炉，分HI，DEF，MEDHI，MED档，样品包括各种肿瘤组织、肝、肾、肺、软骨及游离细胞(血细胞，培养细胞)。 固定液用4%多聚甲醛或3%戊二醛，加0.1%单宁酸。组织块尽可能的小，一般不超过0.3～1 cm3。用一只较大的培养皿里面放置6只标本瓶，外置蒸馏水(4±0.5)℃至一定高度，每一瓶中装相等量的固定液，即使份数不够，无标本的瓶内也要用装有液体的标本瓶代替其位置。微波固定保持相同的条件，用MEDHI档20～30 s，停数秒，如此重复2～3次，室温放置1 h。游离细胞微波5～10 s，室温放置30 min。组织块经漂洗后，用1%锇酸固定。
1.2 组织块脱水、浸透、包埋及聚合 标本分别在50%，70%，90%酒精及90%丙酮中，MEDHI档20 s，室温停留2 min，纯丙酮3次，各用微波MEDHI档20 s，停留3 min。浸透，纯丙酮:包埋剂＝1∶1。MEDHI档10 s，停留1 min，再照射10 s，停留5 min。纯丙酮∶包埋剂＝1∶3，MDEHI档10 s，停留5 min，重复2次。纯包埋剂MEDHI档10 s，停留1 min，MEDHI档10 s，停留10 min。包埋后聚合的温度为70℃3 min，95℃30 min，110℃ 1 h。
, 百拇医药
1.3 超薄切片染色 醋酸铀MEDHI档30 s，蒸馏水漂洗，枸橼酸铅MEDHI档20 s，水洗，干燥后H-800电镜观察。
2 结果和讨论
电镜下各组织(肿瘤、肝、肾、肺等)细胞内的线粒体、内质网、核糖体丰富，膜结构十分清晰。
通过实验，我们对微波技术引入超微结构病理诊断电镜标本制备有以下体会：(1)微波固定的温度必须控制在37℃以下。我们曾做过比较，温度超过50℃，用光镜观察细胞结构受损不明显，但电镜下观察细胞膜已完全破坏。(2)有些样品在微波固定时须注意，如肺、软骨等，这些组织中的水或气体在进行微波照射时会出现“爆炸”现象，因此对这些组织在微波处理时采用短照射多重复的方法，我们一般是每次只照射5 s，重复4～5次，每次间隔10 s，否则会影响细胞结构。(3)制备酶细胞化学和免疫细胞化学的样品在进行微波固定时，液体中不加单宁酸，温度约15℃，用间隔微波或冰水浴(4±0.5)℃的办法来控制温度，但冰水中不能有冰块，以避免温度不均匀。(4)聚合不必在微波炉中进行。(5)电镜样品从取材到聚合只需几个小时，整个制样过程缩短，接收标本后2～3 d 内能出报告，特别受到临床医生的欢迎，使电镜和临床诊断更紧密地结合，有较好的社会效益和经济效益。
【作者简介】颜永碧(1953～)，女(汉族)，高级实验师
【收稿日期】2000-02-05
【修回日期】2000-06-07, http://www.100md.com