骨肉瘤P-糖蛋白表达及其与预后的研究
作者：牟江洪 王东 陈俐 李增鹏
单位：牟江洪(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)；王东(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)；陈俐(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)；李增鹏(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)
关键词：骨肉瘤；P-糖蛋白；预后；多药耐药性
第三军医大学学报000634 中图法分类号： R738.03 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)06-0544-01
Expression of P-glycoprotein in osteosarcoma and its prognostic significance
, 百拇医药
人体多种肿瘤均有P-gp的高表达，P-gp介导的多药耐药性(即经典多药耐药性)[1，2]可能是肿瘤化疗不敏感的重要原因，也是影响预后的重要因素。因此我们用SP法检测80例骨肉瘤中P-gp的表达，以期探讨其与骨肉瘤临床病理及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 临床资料
选取我院1968～1993年间长骨中央型骨肉瘤80例，其中男性52例，女性28例，男女比约为2∶1，年龄11～68岁，平均23岁；肿瘤大小5～25cm，平均10cm，其中手术切除标本75例，活检标本5例，均为术前未化疗标本。组织学分级参照Price三级法，组织学分型参照Dahlin′s分型及WHO新分型。全部病例均有随访，随访时间1～25年，总体2年生存率为33.8%，5年生存率为18.3%。
1.2 免疫组化方法 抗人P-gp的鼠单克隆抗体JSB1及S-P免疫组化试剂盒均为ZYMED公司产品(购自北京中山生物技术公司)。80例骨肉瘤标本均经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，5μm石蜡切片。S-P免疫组化染色，方法及步骤参照试剂盒说明进行，DAB显色，苏木精复染。切片需经微波炉抗原修复，一抗1∶50稀释，二、三抗1∶100稀释。用PBS代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.3 统计学处理
P-gp表达与临床病理的关系用χ2检验，P-gp阳性组与阴性组生存率行Kaplan-meier曲线法分析并经Log-rank检验，P<0.05为相差显著。
2 结果
2.1 骨肉瘤P-gp表达
P-gp阳性产物为棕褐色细颗粒状，主要定位于肿瘤细胞膜，部分胞浆中亦可见阳性。阳性细胞呈局灶、散在或弥漫分布。80例骨肉瘤P-gp阳性表达者29例(36%)。
2.2 骨肉瘤P-gp表达与临床病理的关系
骨肉瘤P-gp表达经χ2检验与骨肉瘤患者年龄、性别、肿瘤大小、Price′s分级和Dahlin′s分型无关(P>0.05)，但与WHO新分型显著相关，骨肉瘤骨内高分化型P-gp表达明显低于其它三种类型(P<0.05)。
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2.3 骨肉瘤P-gp表达与预后的关系
将80例骨肉瘤分为P-gp阳性组与阴性组，分别绘制Kaplan-Meier生存曲线。P-gp阳性组2年生存率24.13%，5年生存率为0；阴性组2年生存率49.04%,5年生存率为21.59%,经Log-rank检验,两组生存率相差显著(χ2=12.02,P<0.01),P-gp阳性组生存率明显低于阴性组。
3 讨论
多药耐药性(MDR)的产生是肿瘤化疗失败的主要原因之一。自从1970年发现P-gp以来，人们发现MDR与P-gp、谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione stransferases，GST)、DNA拓扑酶Ⅱ(NDA TopoⅡ)等多种细胞内物质有关，其中P-gp在肿瘤细胞中的高表达是肿瘤产生MDR的重要原因之一[1，2]，已引起广泛的关注。
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P-gp是mdr1基因编码的一种能量依赖性转运蛋白，位于细胞膜，分子量为170×103。研究表明P-gp在肾、肾上腺和胎盘等正常组织中高表达，在脑、肺、肝、脾及结肠等中度表达[3]，并主要定位于一些具有分泌排泄功能的细胞，故认为在正常组织中，P-gp起着对毒性化合物的清除作用[4]。在乳腺癌、肺癌、脑胶质细胞瘤、神经母细胞瘤等多种恶性肿瘤中P-gp均有表达，并证实P-gp能与亲脂性抗肿瘤药物结合，在ATP参与下将药物转运到细胞外，使细胞内药物浓度下降，而产生P-gp介导的MDR(即经典多药耐药性)[2]。
尽管通过术前化疗及术后辅助化疗的改进，骨肉瘤患者生存率有所提高，但5年生存率仍低于50%，其中多药耐药性是重要原因之一。本文对80例骨肉瘤中P-gp的研究结果表明，P-gp表达者有29例(36%)，提示P-gp表达是骨肉瘤产生MDR的重要因素之一可部分解释骨肉瘤内在抗药性的原因，并对指导制订化疗方案有一定临床应用价值。对P-gp阳性的骨肉瘤患者，在化疗中加入抗药性调节剂(或称化学增敏剂)，通过竞争性地与P-gp的特殊位点结合，抑制P-gp对抗肿瘤药物的转运，使MDR得以逆转。
, 百拇医药
Baldini等[5]对92例高分化骨肉瘤的研究表明，28例骨肉瘤P-gp高表达，P-gp高表达组生存率明显降低，而P-gp表达与性别、年龄、坏死程度、组织学分型无关。本文对80例骨肉瘤P-gp的研究发现，29例骨肉瘤有P-gp表达(36%)。P-gp阳性组2年生存率为24.13%,5年生存率为0;阴性组2年生存率为49.4%,5年生存率为21.50%,两者差异显著(χ2=12.02,P<0.01),P-gp阳性组生存率明显低于阴性组,这一结果提示P-gp可能成为骨肉瘤有价值的预后指标。P-gp表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、Price分级及Dahlin′s分型无关(P>0.05),但与WHO新分型显著相关,骨内高分化型骨肉瘤P-gp表达明显低于其它3种类型(P<0.05),这可能是骨内高分化型骨肉瘤预后较好的原因之一。总之，骨肉瘤P-gp的表达是骨肉瘤MDR产生的主要原因之一，并对患者化疗效果、预后的评估，指导制定化疗方案有一定临床价值。
作者简介：牟江洪(1973-)，男，四川省自贡市人，医师，主要从事骨肿瘤方面的研究。电话：(023)68757374
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参考文献：
[1] Bradley G, Juranka P F, Ling V. Mechanisms of multidrug resistance[J]. Biochim Biophys,1988，948(1):87-128.
[2] Gottesman M M, Pastan I. Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporter[J]. Annu Rev Biochem, 1993，63(3):385-427.
[3] 李 羲，郭先健，王 东，等.P-糖蛋白在正常胎儿组织中的表达[J].第三军医大学学报，1995，17(6)：473-476.
[4] Kartner N. Cell surface P-glycoprotein in associated with multidrug resistance in mammalian lines[J]. Science, 1983，221(6):12 855-12 860.
[5] Baldini N, scotlandi K, Manara M.C, et al. Expression of P-glytoprotein in high-grade osteosarcomas in relation to clinical outcome[J]. N Engl J Med,1995，333(3):1 380-1 385.
收稿日期：1999-04-19；修回日期：2000-02-28, http://www.100md.com
单位：牟江洪(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)；王东(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)；陈俐(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)；李增鹏(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所病理科，重庆 400042)
关键词：骨肉瘤；P-糖蛋白；预后；多药耐药性
第三军医大学学报000634 中图法分类号： R738.03 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)06-0544-01
Expression of P-glycoprotein in osteosarcoma and its prognostic significance
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人体多种肿瘤均有P-gp的高表达，P-gp介导的多药耐药性(即经典多药耐药性)[1，2]可能是肿瘤化疗不敏感的重要原因，也是影响预后的重要因素。因此我们用SP法检测80例骨肉瘤中P-gp的表达，以期探讨其与骨肉瘤临床病理及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 临床资料
选取我院1968～1993年间长骨中央型骨肉瘤80例，其中男性52例，女性28例，男女比约为2∶1，年龄11～68岁，平均23岁；肿瘤大小5～25cm，平均10cm，其中手术切除标本75例，活检标本5例，均为术前未化疗标本。组织学分级参照Price三级法，组织学分型参照Dahlin′s分型及WHO新分型。全部病例均有随访，随访时间1～25年，总体2年生存率为33.8%，5年生存率为18.3%。
1.2 免疫组化方法 抗人P-gp的鼠单克隆抗体JSB1及S-P免疫组化试剂盒均为ZYMED公司产品(购自北京中山生物技术公司)。80例骨肉瘤标本均经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，5μm石蜡切片。S-P免疫组化染色，方法及步骤参照试剂盒说明进行，DAB显色，苏木精复染。切片需经微波炉抗原修复，一抗1∶50稀释，二、三抗1∶100稀释。用PBS代替一抗作阴性对照。
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1.3 统计学处理
P-gp表达与临床病理的关系用χ2检验，P-gp阳性组与阴性组生存率行Kaplan-meier曲线法分析并经Log-rank检验，P<0.05为相差显著。
2 结果
2.1 骨肉瘤P-gp表达
P-gp阳性产物为棕褐色细颗粒状，主要定位于肿瘤细胞膜，部分胞浆中亦可见阳性。阳性细胞呈局灶、散在或弥漫分布。80例骨肉瘤P-gp阳性表达者29例(36%)。
2.2 骨肉瘤P-gp表达与临床病理的关系
骨肉瘤P-gp表达经χ2检验与骨肉瘤患者年龄、性别、肿瘤大小、Price′s分级和Dahlin′s分型无关(P>0.05)，但与WHO新分型显著相关，骨肉瘤骨内高分化型P-gp表达明显低于其它三种类型(P<0.05)。
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2.3 骨肉瘤P-gp表达与预后的关系
将80例骨肉瘤分为P-gp阳性组与阴性组，分别绘制Kaplan-Meier生存曲线。P-gp阳性组2年生存率24.13%，5年生存率为0；阴性组2年生存率49.04%,5年生存率为21.59%,经Log-rank检验,两组生存率相差显著(χ2=12.02,P<0.01),P-gp阳性组生存率明显低于阴性组。
3 讨论
多药耐药性(MDR)的产生是肿瘤化疗失败的主要原因之一。自从1970年发现P-gp以来，人们发现MDR与P-gp、谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione stransferases，GST)、DNA拓扑酶Ⅱ(NDA TopoⅡ)等多种细胞内物质有关，其中P-gp在肿瘤细胞中的高表达是肿瘤产生MDR的重要原因之一[1，2]，已引起广泛的关注。
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P-gp是mdr1基因编码的一种能量依赖性转运蛋白，位于细胞膜，分子量为170×103。研究表明P-gp在肾、肾上腺和胎盘等正常组织中高表达，在脑、肺、肝、脾及结肠等中度表达[3]，并主要定位于一些具有分泌排泄功能的细胞，故认为在正常组织中，P-gp起着对毒性化合物的清除作用[4]。在乳腺癌、肺癌、脑胶质细胞瘤、神经母细胞瘤等多种恶性肿瘤中P-gp均有表达，并证实P-gp能与亲脂性抗肿瘤药物结合，在ATP参与下将药物转运到细胞外，使细胞内药物浓度下降，而产生P-gp介导的MDR(即经典多药耐药性)[2]。
尽管通过术前化疗及术后辅助化疗的改进，骨肉瘤患者生存率有所提高，但5年生存率仍低于50%，其中多药耐药性是重要原因之一。本文对80例骨肉瘤中P-gp的研究结果表明，P-gp表达者有29例(36%)，提示P-gp表达是骨肉瘤产生MDR的重要因素之一可部分解释骨肉瘤内在抗药性的原因，并对指导制订化疗方案有一定临床应用价值。对P-gp阳性的骨肉瘤患者，在化疗中加入抗药性调节剂(或称化学增敏剂)，通过竞争性地与P-gp的特殊位点结合，抑制P-gp对抗肿瘤药物的转运，使MDR得以逆转。
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Baldini等[5]对92例高分化骨肉瘤的研究表明，28例骨肉瘤P-gp高表达，P-gp高表达组生存率明显降低，而P-gp表达与性别、年龄、坏死程度、组织学分型无关。本文对80例骨肉瘤P-gp的研究发现，29例骨肉瘤有P-gp表达(36%)。P-gp阳性组2年生存率为24.13%,5年生存率为0;阴性组2年生存率为49.4%,5年生存率为21.50%,两者差异显著(χ2=12.02,P<0.01),P-gp阳性组生存率明显低于阴性组,这一结果提示P-gp可能成为骨肉瘤有价值的预后指标。P-gp表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、Price分级及Dahlin′s分型无关(P>0.05),但与WHO新分型显著相关,骨内高分化型骨肉瘤P-gp表达明显低于其它3种类型(P<0.05),这可能是骨内高分化型骨肉瘤预后较好的原因之一。总之，骨肉瘤P-gp的表达是骨肉瘤MDR产生的主要原因之一，并对患者化疗效果、预后的评估，指导制定化疗方案有一定临床价值。
作者简介：牟江洪(1973-)，男，四川省自贡市人，医师，主要从事骨肿瘤方面的研究。电话：(023)68757374
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参考文献：
[1] Bradley G, Juranka P F, Ling V. Mechanisms of multidrug resistance[J]. Biochim Biophys,1988，948(1):87-128.
[2] Gottesman M M, Pastan I. Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporter[J]. Annu Rev Biochem, 1993，63(3):385-427.
[3] 李 羲，郭先健，王 东，等.P-糖蛋白在正常胎儿组织中的表达[J].第三军医大学学报，1995，17(6)：473-476.
[4] Kartner N. Cell surface P-glycoprotein in associated with multidrug resistance in mammalian lines[J]. Science, 1983，221(6):12 855-12 860.
[5] Baldini N, scotlandi K, Manara M.C, et al. Expression of P-glytoprotein in high-grade osteosarcomas in relation to clinical outcome[J]. N Engl J Med,1995，333(3):1 380-1 385.
收稿日期：1999-04-19；修回日期：2000-02-28, http://www.100md.com