老年牙周炎牙龈组织中SOD和MDA水平的变化
作者：毛钊 曹永安 杨俭 吴织芬
单位：毛钊(南京军区南京总医院口腔科，江苏南京 210002)；曹永安(江苏职工医科大学实验中心)；杨俭(江苏职工医科大学实验中心)；吴织芬(第四军医大学口腔医学院牙周粘膜科)
关键词：老年牙周炎；超氧化物歧化酶(SOD)；丙二醛(MDA)
医学研究生学报000604摘要： 目的：观察老年牙周炎患者局部牙龈组织中抗氧化能力的变化。 方法：测定老年牙周炎患者、健康老年人、成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者牙龈组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，并进行比较。 结果：老年牙周炎患者SOD水平明显低于健康老年人、成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者(P<0.05)；其MDA水平明显高于健康老年人、成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者(P<0.05)。 结论：衰老和牙周炎双重作用造成老年牙周炎患者牙周组织局部抗氧化能力的降低，氧化物质堆积。SOD降低应是老年牙周炎局部牙周组织病理和免疫功能特征性变化的原因之一。
, 百拇医药
中图分类号： R781.42 文献标识码： A
文章编号： 1008-8199(2000)06-0363-02
Changes of gingival SOD and MDA levels in elderly patients with periodontitis
MAO Zhao
(Department of Odontology, Jinling Hospital, Nanjing 210002,Jiangsu,China)
CAO Yong-an, YANG Jian
(Department of Experimental Center, Jiangsu Provincial Hospital, China)
, 百拇医药
WU Zhi-fen
(Department of periodontology, Dental Hospital of the Fourth Military Medical University, China)
Abstract: Objectives: To observe functional changes of antioxidants in gingival tissue of elderly patients with periodontitis. Methods: Levels of SOD and MDA in gingival tissues of elderly patients, adult patients, and juvenile patients with periodontitis and healthy old people were measured and compared. Results: Level of SOD in elderly patient group was significantly lower than those of healthy elderly group, adult patient group and juvenile patient group (P<0.05); Level of MDA in elderly patient group was significantly higher than those of healthy elderly, adult patient and juvenile patient group (P<0.05). Conclusions:Synergistic effects of aging and periodontal inflammation decreased antioxidants functions of gingival tissue in elderly patients with periodontitis, which resulted in the characteristic changes in pathology and immunology of the gingiva in elderly patients with periodontitis.
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Key words: Elderly periodontitis; Superoxide dismutase; MDA
0 引 言
自由基学说认为自由基与机体生物大分子发生反应，影响细胞的活性，造成细胞损伤，促使细胞及机体的衰老。机体具有一定的抗氧化损伤的能力[1]。这一能力随着年龄的增长而降低[2，3]。对成人慢性牙周炎的研究发现，牙周炎的存在也造成了这一能力的降低[4]。那么，炎症和年龄增长是否是“牙周炎随年龄增长而加重”这一众所周知的事实的原因？本研究对老年牙周炎牙龈组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平的变化进行了观察，并与健康老年人、成人慢性牙周炎和青少年牙周炎牙龈组织中的情况进行了比较。
1 对象和方法
1.1 研究对象和分组 经临床检查和口腔全景Ⅹ线片诊断为全口牙周炎；无免疫缺陷病、内分泌疾病、肝肾功能异常、变态反应性疾病和严重心血管疾病；3个月内未做过系统牙周治疗和未服用过抗生素、免疫抑制剂及抗氧化剂(如维生素E等)患者共34例和牙周健康(龈袋≤2 mm)及符合上述其他条件的健康老年人10例。其中老年牙周炎组(A组)14例(男10例，女4例)，平均年龄69.9(65～81)岁；老年健康组(B组)10例(男7例，女3例)，平均年龄67.9(65～72)岁；成人慢性牙周炎组(C组)10例(男6例，女4例)，平均年龄46.7(40～57)岁；青少年牙周炎组(D组)10例(男5例，女5例)，平均年龄24.5(22～30)岁。
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1.2 标本采集 所有牙周炎患者的标本采自牙周手术时切下的牙龈组织或因牙周炎拔除的牙齿周边多余的牙龈组织。健康老年人取自因义齿修复而拔
除的健康牙齿周边多余的牙龈组织。组织块大小约4 mm3,组织取下后用组织匀浆器进行匀浆，配成10%匀浆液，4 000 r/min离心15 min，取上清液即刻进行各项测定。
1.3 牙龈组织超氧化物歧化酶(SOD)水平测定 药盒购自南京聚力生物医学工程研究所。按说明书要求操作，先设置空白管，然后取15 μl样品于测定管内，依次加入测定试剂、蒸馏水和应用液，充分混匀，置37℃水浴30 min，加显色剂混匀，10 min后，550 nm波长，蒸馏水调零，752紫外光栅分光光度计(上海第三分光仪器厂)测吸光度，按说明书内公式算出SOD的水平。
1.4 牙龈组织丙二醛(MDA)水平测定 药盒来源同SOD。按药盒说明书制备标准管和测定管，蒸馏水调零，532 nm处比色(光度计型号及生产厂家同SOD)，按说明书上公式计算出组织中的MDA含量。
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1.5 统计学分析 所有数据用方差分析中多个样本均数的两两比较。
2 结 果
2.1 四组牙龈组织中SOD水平测定 结果见表1。结果提示，老年牙周炎组SOD水平最低，与老年健康组、成人慢性牙周炎组和青少年牙周炎组比较差异显著(P<0.05)。成人慢性牙周炎组水平最高，与青少年牙周炎组比较差异显著(P<0.05)。
2.2 四组牙龈组织中MDA水平测定 结果见表2。结果提示，老年牙周炎组MDA水平最高，与老年健康组、成人慢性牙周炎组和青少年牙周炎组比较差异显著(P<0.05)。
表 1 牙龈组织中SOD水平比较 (nU/ml )
Table 1 Comparing of SOD level in gingival tissue (nU/ml ) Groups
, http://www.100md.com
Eldly patients
Healthy elder
Adult patients
Juvenil periodontitis
(A group )
( B group )
(C group )
( D group)
n
14
10
, http://www.100md.com 10
10
SOD(x±s)
24.74±10.33
37.11±10.34*
48.33±14.68△
33.89±7.66◇☆
* A∶B P<0.05； △ A∶C P<0.05； ◇ A∶D P<0.05； ☆ C∶D P<0.05
表 2 牙龈组织中MDA水平比较 ( nM/ml )
Table 2 Comparing of MDA level in gingival tissue (nM/ml ) Groups
, http://www.100md.com
Eldly periodontitis
Healthy elder
Adult periodontitis
Jurenil periodontitis
( A group )
( B group )
( C group )
( D group )
n
14
10
, http://www.100md.com
10
10
MDA(x±s)
4.69±1.27
3.28±1.2*
3.08±1.02△
3.88±1.12◇
* A∶B P<0.05； △ A∶C P<0.05； ◇ A∶D P<0.05
3 讨 论
近年来认为，机体的免疫防御功能、营养、衰老等都会影响牙周组织的健康。对老年牙周炎的一些研究已经证实，老年牙周炎患者免疫反应能力降低，局部牙龈组织免疫功能紊乱，组织愈合和修复能力降低，其表现与成人慢性牙周炎和青少年牙周炎有所不同[5～8]。这种由于增龄而产生的区别有多种原因，机体抗氧化能力的变化则是重要原因之一。动物实验证明，老龄动物SOD值低于非老龄动物[2,3],有些酶的增龄性变化也是由于氧自由基引起损伤的结果。氧自由基损伤速度发生增龄性增加或消除氧化蛋白能力增龄性降低造成了损伤蛋白的堆积，引起细胞的损伤[9]。本研究发现，老年牙周炎组SOD水平明显低于成人慢性牙周炎组(P<0.05)和青少年牙周炎组(P<0.05)。MDA水平则明显高于成人慢性牙周炎组(P<0.05)和青少年牙周炎组(P<0.05)。这似乎证实了这样一个病理过程：即老年牙周炎患者牙龈组织内SOD水平降低，MDA水平增高，抗氧化能力减弱，局部氧自由基含量增加，抑制了T和B淋巴细胞、NK细胞和淋巴因子激活NK细胞的功能[1]。同时，牙周局部组织细胞的DNA和蛋白质损伤增加，引起牙周炎对牙周局部组织破坏严重程度增加[10]，牙周炎随年龄增加而加重。
, 百拇医药
本研究还发现，老年牙周炎组SOD水平明显低于老年健康组(P<0.05)，MDA水平明显高于老年健康组(P<0.05)，青少年牙周炎组SOD水平又明显低于成人慢性牙周炎组(P<0.05)。这似乎提示了一个重要的方面：局部牙周炎症和不同牙周炎类型均是影响牙周组织局部抗氧化能力变化的重要因素，这和马志君等[4]的研究结果相似。其原因可能是老年牙周炎患者牙周局部炎症发展时间长、细菌和病毒等反复感染，造成白细胞、巨噬细胞和其他吞噬细胞反复增生，生成反应性氧化介质较多。青少年牙周炎与成人慢性牙周炎局部抗氧化能力的差异，可能与青少年牙周炎时局部炎症反应强烈，产生氧化物质多、抗氧化酶消耗多有关。由此可见，由于衰老和牙周炎症双重作用，造成了老年牙周炎患者抗氧化能力的降低，这种降低成为老年牙周炎局部牙周组织产生特征性病理和免疫方面改变[5～8]的原因之一。
作者简介：毛钊(1959-)，男，上海人，副主任医师，从事口腔内科牙周病专业，现为第四军医大学口腔医学院牙周病临床医学博士研究生，导师为吴织芬教授。
, 百拇医药
参考文献：
[1] Ames BN, Shigenage MK,Hagen TM. Oxidants , antioxidants , and the degenerative diseases of aging [J]. Proc Natl Acad Sci USA , 1993, 90 (17) : 7915.
[2] 徐治鸿,孙晓平,华 红，等.固齿健周煎剂对老年小鼠的抗氧化作用[J].中华口腔医学杂志,1998,33 (4) : 219.
[3] 许金廉,刘志民,吴德林，等.实验性多器官功能衰竭大鼠血浆内皮素、超氧化物歧化酶的变化[J].中华老年医学杂志,1996, 15 (6) : 324.
[4] 马志君,张举之.牙周炎患者红细胞SOD血清LPO水平的变化[J].华西口腔医学杂志, 1993 , 11 (1) : 7.
, 百拇医药
[5] 毛钊,杨 俭,丁传林，等.老年牙周炎患者中性粒细胞的研究[J].医学研究生学报, 2000, 13 (2) : 89.
[6] 毛 钊,丁传林,杨 俭.老年牙周炎患者外周血NK细胞活性的研究[J].南京大学学报(自然科学), 1998, 34 (5) : 578.
[7] 毛 钊,赖仁胜.老年人牙周炎牙龈组织病理学比较研究[J]. 南京医科大学学报,1998, 18 (1) : 40.
[8] 毛 钊,杨 俭,赖仁胜.老年人牙周炎牙龈组织内T和B淋巴细胞免疫组织化学研究[J].牙体牙髓牙周病学杂志, 1998, 8 (4) : 240.
[9] Stadtman ER. Protein oxidation and aging [J].Science, 1992, 257 (5974) : 1220 .
[10] 孟 琳,张举之,郑光静.固齿丸抗自由基损伤的研究[J].华西口腔医学杂志, 1990, 8 (3) : 208.
收稿日期：2000-06-20, 百拇医药
单位：毛钊(南京军区南京总医院口腔科，江苏南京 210002)；曹永安(江苏职工医科大学实验中心)；杨俭(江苏职工医科大学实验中心)；吴织芬(第四军医大学口腔医学院牙周粘膜科)
关键词：老年牙周炎；超氧化物歧化酶(SOD)；丙二醛(MDA)
医学研究生学报000604摘要： 目的：观察老年牙周炎患者局部牙龈组织中抗氧化能力的变化。 方法：测定老年牙周炎患者、健康老年人、成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者牙龈组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，并进行比较。 结果：老年牙周炎患者SOD水平明显低于健康老年人、成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者(P<0.05)；其MDA水平明显高于健康老年人、成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者(P<0.05)。 结论：衰老和牙周炎双重作用造成老年牙周炎患者牙周组织局部抗氧化能力的降低，氧化物质堆积。SOD降低应是老年牙周炎局部牙周组织病理和免疫功能特征性变化的原因之一。
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中图分类号： R781.42 文献标识码： A
文章编号： 1008-8199(2000)06-0363-02
Changes of gingival SOD and MDA levels in elderly patients with periodontitis
MAO Zhao
(Department of Odontology, Jinling Hospital, Nanjing 210002,Jiangsu,China)
CAO Yong-an, YANG Jian
(Department of Experimental Center, Jiangsu Provincial Hospital, China)
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WU Zhi-fen
(Department of periodontology, Dental Hospital of the Fourth Military Medical University, China)
Abstract: Objectives: To observe functional changes of antioxidants in gingival tissue of elderly patients with periodontitis. Methods: Levels of SOD and MDA in gingival tissues of elderly patients, adult patients, and juvenile patients with periodontitis and healthy old people were measured and compared. Results: Level of SOD in elderly patient group was significantly lower than those of healthy elderly group, adult patient group and juvenile patient group (P<0.05); Level of MDA in elderly patient group was significantly higher than those of healthy elderly, adult patient and juvenile patient group (P<0.05). Conclusions:Synergistic effects of aging and periodontal inflammation decreased antioxidants functions of gingival tissue in elderly patients with periodontitis, which resulted in the characteristic changes in pathology and immunology of the gingiva in elderly patients with periodontitis.
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Key words: Elderly periodontitis; Superoxide dismutase; MDA
0 引 言
自由基学说认为自由基与机体生物大分子发生反应，影响细胞的活性，造成细胞损伤，促使细胞及机体的衰老。机体具有一定的抗氧化损伤的能力[1]。这一能力随着年龄的增长而降低[2，3]。对成人慢性牙周炎的研究发现，牙周炎的存在也造成了这一能力的降低[4]。那么，炎症和年龄增长是否是“牙周炎随年龄增长而加重”这一众所周知的事实的原因？本研究对老年牙周炎牙龈组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平的变化进行了观察，并与健康老年人、成人慢性牙周炎和青少年牙周炎牙龈组织中的情况进行了比较。
1 对象和方法
1.1 研究对象和分组 经临床检查和口腔全景Ⅹ线片诊断为全口牙周炎；无免疫缺陷病、内分泌疾病、肝肾功能异常、变态反应性疾病和严重心血管疾病；3个月内未做过系统牙周治疗和未服用过抗生素、免疫抑制剂及抗氧化剂(如维生素E等)患者共34例和牙周健康(龈袋≤2 mm)及符合上述其他条件的健康老年人10例。其中老年牙周炎组(A组)14例(男10例，女4例)，平均年龄69.9(65～81)岁；老年健康组(B组)10例(男7例，女3例)，平均年龄67.9(65～72)岁；成人慢性牙周炎组(C组)10例(男6例，女4例)，平均年龄46.7(40～57)岁；青少年牙周炎组(D组)10例(男5例，女5例)，平均年龄24.5(22～30)岁。
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1.2 标本采集 所有牙周炎患者的标本采自牙周手术时切下的牙龈组织或因牙周炎拔除的牙齿周边多余的牙龈组织。健康老年人取自因义齿修复而拔
除的健康牙齿周边多余的牙龈组织。组织块大小约4 mm3,组织取下后用组织匀浆器进行匀浆，配成10%匀浆液，4 000 r/min离心15 min，取上清液即刻进行各项测定。
1.3 牙龈组织超氧化物歧化酶(SOD)水平测定 药盒购自南京聚力生物医学工程研究所。按说明书要求操作，先设置空白管，然后取15 μl样品于测定管内，依次加入测定试剂、蒸馏水和应用液，充分混匀，置37℃水浴30 min，加显色剂混匀，10 min后，550 nm波长，蒸馏水调零，752紫外光栅分光光度计(上海第三分光仪器厂)测吸光度，按说明书内公式算出SOD的水平。
1.4 牙龈组织丙二醛(MDA)水平测定 药盒来源同SOD。按药盒说明书制备标准管和测定管，蒸馏水调零，532 nm处比色(光度计型号及生产厂家同SOD)，按说明书上公式计算出组织中的MDA含量。
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1.5 统计学分析 所有数据用方差分析中多个样本均数的两两比较。
2 结 果
2.1 四组牙龈组织中SOD水平测定 结果见表1。结果提示，老年牙周炎组SOD水平最低，与老年健康组、成人慢性牙周炎组和青少年牙周炎组比较差异显著(P<0.05)。成人慢性牙周炎组水平最高，与青少年牙周炎组比较差异显著(P<0.05)。
2.2 四组牙龈组织中MDA水平测定 结果见表2。结果提示，老年牙周炎组MDA水平最高，与老年健康组、成人慢性牙周炎组和青少年牙周炎组比较差异显著(P<0.05)。
表 1 牙龈组织中SOD水平比较 (nU/ml )
Table 1 Comparing of SOD level in gingival tissue (nU/ml ) Groups
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Eldly patients
Healthy elder
Adult patients
Juvenil periodontitis
(A group )
( B group )
(C group )
( D group)
n
14
10
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10
SOD(x±s)
24.74±10.33
37.11±10.34*
48.33±14.68△
33.89±7.66◇☆
* A∶B P<0.05； △ A∶C P<0.05； ◇ A∶D P<0.05； ☆ C∶D P<0.05
表 2 牙龈组织中MDA水平比较 ( nM/ml )
Table 2 Comparing of MDA level in gingival tissue (nM/ml ) Groups
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Eldly periodontitis
Healthy elder
Adult periodontitis
Jurenil periodontitis
( A group )
( B group )
( C group )
( D group )
n
14
10
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10
10
MDA(x±s)
4.69±1.27
3.28±1.2*
3.08±1.02△
3.88±1.12◇
* A∶B P<0.05； △ A∶C P<0.05； ◇ A∶D P<0.05
3 讨 论
近年来认为，机体的免疫防御功能、营养、衰老等都会影响牙周组织的健康。对老年牙周炎的一些研究已经证实，老年牙周炎患者免疫反应能力降低，局部牙龈组织免疫功能紊乱，组织愈合和修复能力降低，其表现与成人慢性牙周炎和青少年牙周炎有所不同[5～8]。这种由于增龄而产生的区别有多种原因，机体抗氧化能力的变化则是重要原因之一。动物实验证明，老龄动物SOD值低于非老龄动物[2,3],有些酶的增龄性变化也是由于氧自由基引起损伤的结果。氧自由基损伤速度发生增龄性增加或消除氧化蛋白能力增龄性降低造成了损伤蛋白的堆积，引起细胞的损伤[9]。本研究发现，老年牙周炎组SOD水平明显低于成人慢性牙周炎组(P<0.05)和青少年牙周炎组(P<0.05)。MDA水平则明显高于成人慢性牙周炎组(P<0.05)和青少年牙周炎组(P<0.05)。这似乎证实了这样一个病理过程：即老年牙周炎患者牙龈组织内SOD水平降低，MDA水平增高，抗氧化能力减弱，局部氧自由基含量增加，抑制了T和B淋巴细胞、NK细胞和淋巴因子激活NK细胞的功能[1]。同时，牙周局部组织细胞的DNA和蛋白质损伤增加，引起牙周炎对牙周局部组织破坏严重程度增加[10]，牙周炎随年龄增加而加重。
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本研究还发现，老年牙周炎组SOD水平明显低于老年健康组(P<0.05)，MDA水平明显高于老年健康组(P<0.05)，青少年牙周炎组SOD水平又明显低于成人慢性牙周炎组(P<0.05)。这似乎提示了一个重要的方面：局部牙周炎症和不同牙周炎类型均是影响牙周组织局部抗氧化能力变化的重要因素，这和马志君等[4]的研究结果相似。其原因可能是老年牙周炎患者牙周局部炎症发展时间长、细菌和病毒等反复感染，造成白细胞、巨噬细胞和其他吞噬细胞反复增生，生成反应性氧化介质较多。青少年牙周炎与成人慢性牙周炎局部抗氧化能力的差异，可能与青少年牙周炎时局部炎症反应强烈，产生氧化物质多、抗氧化酶消耗多有关。由此可见，由于衰老和牙周炎症双重作用，造成了老年牙周炎患者抗氧化能力的降低，这种降低成为老年牙周炎局部牙周组织产生特征性病理和免疫方面改变[5～8]的原因之一。
作者简介：毛钊(1959-)，男，上海人，副主任医师，从事口腔内科牙周病专业，现为第四军医大学口腔医学院牙周病临床医学博士研究生，导师为吴织芬教授。
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参考文献：
[1] Ames BN, Shigenage MK,Hagen TM. Oxidants , antioxidants , and the degenerative diseases of aging [J]. Proc Natl Acad Sci USA , 1993, 90 (17) : 7915.
[2] 徐治鸿,孙晓平,华 红，等.固齿健周煎剂对老年小鼠的抗氧化作用[J].中华口腔医学杂志,1998,33 (4) : 219.
[3] 许金廉,刘志民,吴德林，等.实验性多器官功能衰竭大鼠血浆内皮素、超氧化物歧化酶的变化[J].中华老年医学杂志,1996, 15 (6) : 324.
[4] 马志君,张举之.牙周炎患者红细胞SOD血清LPO水平的变化[J].华西口腔医学杂志, 1993 , 11 (1) : 7.
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[5] 毛钊,杨 俭,丁传林，等.老年牙周炎患者中性粒细胞的研究[J].医学研究生学报, 2000, 13 (2) : 89.
[6] 毛 钊,丁传林,杨 俭.老年牙周炎患者外周血NK细胞活性的研究[J].南京大学学报(自然科学), 1998, 34 (5) : 578.
[7] 毛 钊,赖仁胜.老年人牙周炎牙龈组织病理学比较研究[J]. 南京医科大学学报,1998, 18 (1) : 40.
[8] 毛 钊,杨 俭,赖仁胜.老年人牙周炎牙龈组织内T和B淋巴细胞免疫组织化学研究[J].牙体牙髓牙周病学杂志, 1998, 8 (4) : 240.
[9] Stadtman ER. Protein oxidation and aging [J].Science, 1992, 257 (5974) : 1220 .
[10] 孟 琳,张举之,郑光静.固齿丸抗自由基损伤的研究[J].华西口腔医学杂志, 1990, 8 (3) : 208.
收稿日期：2000-06-20, 百拇医药