比色法测定胱氨酸片的含量
作者：王万岭
单位：221006 徐州市药品检验所
关键词：胱氨酸， 邻二氮菲， 比色法
中国生化药物杂志000609 摘 要 目的：用比色法快速测定胱氨酸的含量。方法：胱氨酸可将Fe3+还原成Fe2+，后者可与邻二氮菲形成稳定的三元络合物，采用比色法直接测定胱氨酸含量。结果：胱氨酸浓度在0.25～2.5 μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率99.90%，RSD=0.58%。结论：比色法简便快速，结果准确可靠，适于生产厂家质量控制。
中图分类号 R927.2
Determination of Cystine Tablets by Colorimetry
, http://www.100md.com
Wang Wanling
(Xuzhou Institute for Drug Control，Xuzhou 221006)
胱氨酸系氨基酸类药，用于慢性肝炎、病后或产后继发性脱发等的治疗。胱氨酸的含量测定，中国药典1998年增补本采用凯氏定氮法[1]，其片剂含量测定用溴量法[2]。本文依据胱氨酸能将Fe3+还原成Fe2+，后者与邻二氮菲形成稳定的三元络合物，在波长512 nm处有最大吸收的原理[3，4]，用比色法直接测定胱氨酸片含量，取得了比较理想的结果。
1 材 料
胱氨酸对照品(GB1296-27)，上海康达氨基酸厂；胱氨酸片，扬州第二制药厂，批号：990505、990607、990112。
, http://www.100md.com
4 mmol/L硫酸铁铵溶液(试液A)：取硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2*12H2O]0.192 g，加少量水溶解后，加盐酸1 ml，再加水稀释至100 ml，避光保存；0.25% 1，10-邻二氮菲溶解(试液B)：取邻二氮菲0.25 g加温水适量使溶解，冷却，再加水至100 ml，避光保存。
UV-260型紫外分光光度计，日本岛津。
2 方法和结果
2.1 标准曲线绘制
精密称取胱氨酸对照品适量至50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度， 分别吸取0.5、 1.0、 1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0ml置25 ml量瓶中，加试液A 6.0 ml，试液B 2.5 ml，于沸水浴20 min后取出冷却至室温并加水稀释至刻度。同法以试剂作空白对照，在400～600 nm浓长范围内扫描，结果在511.8 nm波长处有最大吸收，与文献报道[4]一致。在波长511.8 nm处，分别测定各浓度(C)样品的吸收度(A)，进行线性回归得回归方程A=0.0 486 C-0.0 245,r=0.999 9(n=10)。结果表明胱氨酸在0.25～2.5 μg/ml浓度范围内，浓度与吸收度呈良好线性关系。
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2.2 稳定性试验
取2.1项下的溶液在6 h内每隔1 h测定一次吸收度，结果基本不变，RSD=0.21%(n=6)。
2.3 精密度试验
精密称取胱氨酸对照品适量置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，吸取2.0 ml置25 ml量瓶中，共取5份，照2.1项下方法操作测得吸收度并代入回归方程计算含量，求得含量平均值为99.8%，RSD=0.32%(n=5)。
2.4 回收率试验
精密称取胱氨酸对照品适量，按处方比例加入淀粉、硬脂酸镁等辅料，研细，混匀。精密称取适量置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，过滤，取续滤液2.0 ml置25 ml量瓶中，参考2.1项下方法操作，将测得吸收度代入回归方程计算含量并求出平均回收率为99.90%，RSD=0.58%(n=5)。
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2.5 样品测定
2.5.1 溴量法测定 按文献[2]操作，结果见表1。
2.5.2 比色法测定 取胱氨酸片20粒，精密称定，研细，精密称取适量参照2.3项下方法操作并计算含量，结果见表1。
表1 溴量法和比色法测定结果比较(n=2) 样品批号
胱氨酸片含量(标示量%)
溴量法
比色法
990505
97.2
98.1
, 百拇医药
990607
96.5
97.3
990112
98.4
99.2
3 讨 论
邻二氮菲与Fe2+在微酸性条件下可形成稳定的红色三元络合物[Fe(C12H8N2)3]2+，因此，邻二氮菲在该实验中起显色剂作用，显色剂加入量愈多，愈有利于络合物的形成，但过量显色剂有时会引起干扰[5]。在本实验中，邻二氮菲与Fe2+络合比为3∶1，故邻二氮菲加入量应为Fe2+的三倍。据报道[6]，邻二氮菲与Fe2+形成稳定络合物需10 min，考虑到胱氨酸将Fe3+还原成Fe2+需在沸水浴中反应一定时间，故本实验规定样品在沸水浴中放置20 min。
, 百拇医药
本法与溴量法比较，结果稍偏高，可能是由于溴量法在硫代硫酸钠滴定过程中因溴的挥发，使滴定结果偏低所致。但两法测定结果无显著性差异。本法可用于制药厂对胱氨酸原料及片剂中间体质量控制分析。 参考文献
1，中华人民共和国药典(二部).1995(附录)∶43～44
2，江苏省药品标准.1977∶288
3，Elbrashy AM.Determination of amino acids that contains sulfur by colorimetry.Pharm World Sci,1995,17(2)∶54～57
4，曹玲，顾小平，史咏梅.比色法测定复方卡托普利片中巯甲丙脯酸的含量.江苏药学与临床研究，1999，(1)∶19～20
5，陈椿主编.重要无机化学反应.上海∶上海科学技术出版社，1982∶320
6，缪征明主编.仪器分析.北京∶机械工业出版社，1984∶58
收稿日期 2000-03-29
修回日期 2000-05-22, 百拇医药
单位：221006 徐州市药品检验所
关键词：胱氨酸， 邻二氮菲， 比色法
中国生化药物杂志000609 摘 要 目的：用比色法快速测定胱氨酸的含量。方法：胱氨酸可将Fe3+还原成Fe2+，后者可与邻二氮菲形成稳定的三元络合物，采用比色法直接测定胱氨酸含量。结果：胱氨酸浓度在0.25～2.5 μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率99.90%，RSD=0.58%。结论：比色法简便快速，结果准确可靠，适于生产厂家质量控制。
中图分类号 R927.2
Determination of Cystine Tablets by Colorimetry
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Wang Wanling
(Xuzhou Institute for Drug Control，Xuzhou 221006)
胱氨酸系氨基酸类药，用于慢性肝炎、病后或产后继发性脱发等的治疗。胱氨酸的含量测定，中国药典1998年增补本采用凯氏定氮法[1]，其片剂含量测定用溴量法[2]。本文依据胱氨酸能将Fe3+还原成Fe2+，后者与邻二氮菲形成稳定的三元络合物，在波长512 nm处有最大吸收的原理[3，4]，用比色法直接测定胱氨酸片含量，取得了比较理想的结果。
1 材 料
胱氨酸对照品(GB1296-27)，上海康达氨基酸厂；胱氨酸片，扬州第二制药厂，批号：990505、990607、990112。
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4 mmol/L硫酸铁铵溶液(试液A)：取硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2*12H2O]0.192 g，加少量水溶解后，加盐酸1 ml，再加水稀释至100 ml，避光保存；0.25% 1，10-邻二氮菲溶解(试液B)：取邻二氮菲0.25 g加温水适量使溶解，冷却，再加水至100 ml，避光保存。
UV-260型紫外分光光度计，日本岛津。
2 方法和结果
2.1 标准曲线绘制
精密称取胱氨酸对照品适量至50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度， 分别吸取0.5、 1.0、 1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0ml置25 ml量瓶中，加试液A 6.0 ml，试液B 2.5 ml，于沸水浴20 min后取出冷却至室温并加水稀释至刻度。同法以试剂作空白对照，在400～600 nm浓长范围内扫描，结果在511.8 nm波长处有最大吸收，与文献报道[4]一致。在波长511.8 nm处，分别测定各浓度(C)样品的吸收度(A)，进行线性回归得回归方程A=0.0 486 C-0.0 245,r=0.999 9(n=10)。结果表明胱氨酸在0.25～2.5 μg/ml浓度范围内，浓度与吸收度呈良好线性关系。
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2.2 稳定性试验
取2.1项下的溶液在6 h内每隔1 h测定一次吸收度，结果基本不变，RSD=0.21%(n=6)。
2.3 精密度试验
精密称取胱氨酸对照品适量置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，吸取2.0 ml置25 ml量瓶中，共取5份，照2.1项下方法操作测得吸收度并代入回归方程计算含量，求得含量平均值为99.8%，RSD=0.32%(n=5)。
2.4 回收率试验
精密称取胱氨酸对照品适量，按处方比例加入淀粉、硬脂酸镁等辅料，研细，混匀。精密称取适量置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，过滤，取续滤液2.0 ml置25 ml量瓶中，参考2.1项下方法操作，将测得吸收度代入回归方程计算含量并求出平均回收率为99.90%，RSD=0.58%(n=5)。
, http://www.100md.com
2.5 样品测定
2.5.1 溴量法测定 按文献[2]操作，结果见表1。
2.5.2 比色法测定 取胱氨酸片20粒，精密称定，研细，精密称取适量参照2.3项下方法操作并计算含量，结果见表1。
表1 溴量法和比色法测定结果比较(n=2) 样品批号
胱氨酸片含量(标示量%)
溴量法
比色法
990505
97.2
98.1
, 百拇医药
990607
96.5
97.3
990112
98.4
99.2
3 讨 论
邻二氮菲与Fe2+在微酸性条件下可形成稳定的红色三元络合物[Fe(C12H8N2)3]2+，因此，邻二氮菲在该实验中起显色剂作用，显色剂加入量愈多，愈有利于络合物的形成，但过量显色剂有时会引起干扰[5]。在本实验中，邻二氮菲与Fe2+络合比为3∶1，故邻二氮菲加入量应为Fe2+的三倍。据报道[6]，邻二氮菲与Fe2+形成稳定络合物需10 min，考虑到胱氨酸将Fe3+还原成Fe2+需在沸水浴中反应一定时间，故本实验规定样品在沸水浴中放置20 min。
, 百拇医药
本法与溴量法比较，结果稍偏高，可能是由于溴量法在硫代硫酸钠滴定过程中因溴的挥发，使滴定结果偏低所致。但两法测定结果无显著性差异。本法可用于制药厂对胱氨酸原料及片剂中间体质量控制分析。 参考文献
1，中华人民共和国药典(二部).1995(附录)∶43～44
2，江苏省药品标准.1977∶288
3，Elbrashy AM.Determination of amino acids that contains sulfur by colorimetry.Pharm World Sci,1995,17(2)∶54～57
4，曹玲，顾小平，史咏梅.比色法测定复方卡托普利片中巯甲丙脯酸的含量.江苏药学与临床研究，1999，(1)∶19～20
5，陈椿主编.重要无机化学反应.上海∶上海科学技术出版社，1982∶320
6，缪征明主编.仪器分析.北京∶机械工业出版社，1984∶58
收稿日期 2000-03-29
修回日期 2000-05-22, 百拇医药