墨旱莲醋酸乙酯总提取物对免疫功能的影响
作者：刘雪英 赵越平 蒋永培 汤海峰
单位：刘雪英 赵越平 蒋永培 汤海峰(第四军医大学西京医院药剂科 西安 710032)
关键词：
西北药学杂志000616 中图分类号：R965 文献标识码：A
中药墨旱莲为菊科鳢肠属植物鳢肠(Eclipta prostrata)的干燥地上部分，具有滋肝补血、凉血止血之功能，用于阴虚血热、吐血、衄血、尿血、血痢、崩漏下血、外伤出血等症[1]。近年研究表明墨旱莲有较强的免疫调节作用、止血、保肝、抗炎等多种药理作用，临床上用于多种疾病的治疗[2]。为进一步探讨其免疫调节作用机理及寻找其有效成分，本研究从整体水平观察墨旱莲醋酸乙酯总提物(EAEEP)对机体非特异免疫和体液免疫的影响。
, 百拇医药
1 仪器与材料
1.1 仪器 WZ800-D3A可见紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂)；LDZ5-2型低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)；CH电子显微镜(Olympus optical Co.Ld)。
1.2 药品与试剂 墨旱莲醋酸乙酯总提物(Ethyl acetate extract of Eclipta prostrata, EAEEP，西京医院植化室汤海峰、赵越平药师提供，1g相当于原生药120g。用时以水配制成适宜浓度)；印度墨汁(北京第二化工厂，用前过滤，并稀释5倍。补体为SRBC吸收后的豚鼠血清，按V(SRBC)∶V(补体)＝1∶20的比例混匀，4℃冰箱保存20min后，离心，收集上清液，-20℃保存备用。
1.3 动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，18～22g，6～7周龄(第四军医大学动物中心)。
, 百拇医药 2 方法
取小鼠40只，随机均分为4组：①NS组(20ml/kg)；②EAEEP(4mg/kg)；③EAEEP(8mg/kg)；④EAEEP(16mg/kg)。ig，qd，连续6d。
2.1 免疫器官重量法 末次给药24h后，眼眶放血处死动物，称体重，解剖取胸腺及脾脏，精密称重，计算胸腺指数及脾指数[3]。
2.2 碳粒廓清率法 末次给药30min后，尾静脉注射墨汁0.01ml/g，注射后2，10min用吸管分别从眼眶后静脉丛取血20μl，溶于0.1% NaCO3溶液2ml中摇匀，于650nm测吸收度A[3]。K＝(lgA1-lgA2)/(t2-t1)；α＝k/3×[体重/(肝重+脾重)]。
, http://www.100md.com
2.3 半数溶血值测定法 给药3d后，ip 0.2% SRBC 0.2ml致敏。末次给药后24h，眼眶取血，室温放置1h，2000r/min离心10min，取血清用NS稀释200倍。取稀释血清1ml置试管内，加10% SRBC 0.5ml，1∶10补体1ml；另设不加血清的对照管。置37℃水浴中保温30min，然后将管移入冰浴中终止反应；2000r/min离心10min，取上清液1ml加都氏剂3ml，混匀放置10min，540nm处测吸收度。另取10% SRBC 0.25ml，加都氏剂3.75ml，同法测吸收度，作为SRBC半数溶血值。小鼠血清溶血素抗体含量以样品半数溶血值(HC50)表示。HC50＝[样品吸收度值/SRBC半数溶血值]×稀释倍数[4]。
3 结果
3.1 EAEEP对正常小鼠免疫脏器系数的影响 与NS组比较，EAEEP大、中剂量组均明显降低正常小鼠的脾指数，EAEEP大剂量组的胸腺指数与NS组比较有显著的提高，见表1。
, 百拇医药
3.2 EAEEP对小鼠碳粒廓清率的影响 结果表明，EAEEP大、中剂量组均显著降低正常小鼠的廓清指数(K)及校正廓清指数(α)，见表2。
3.3 EAEEP对小鼠血清溶血素的影响 与NS组比较，ig EAEEP大剂量能显著抑制小鼠溶血素的形成，见表3。
表1 EAEEP对小鼠免疫脏器系数的影响 组 别
剂量(mg/kg)
脾(mg/g)
胸腺(mg/g)
NS
2.9±0.4
2.9±0.6
, 百拇医药
EAEEP
4
2.8±0.8
3.3±0.7
EAEEP
8
2.3±0.4**
3.3±0.7
EAEEP
16
2.3±0.3**
3.5±0.7*
, http://www.100md.com
与NS组比*P<0.05 **P<0.01表2 EAEEP对正常小鼠碳粒廓清率的影响 组 别
剂量(mg/kg)
K(×10-2)
α
NS
5.7±2.0
7.7±1.2
EAEEP
4
4.5±2.6
, http://www.100md.com 6.9±1.3
EAEEP
8
3.7±0.9**
6.5±0.9*
EAEEP
16
3.4±0.9**
6.4±0.7**
与NS组比*P<0.05 **P<0.01
表3 EAEEP对免疫抑制小鼠溶血素水平的影响 组 别
, http://www.100md.com
剂量(mg/kg)
HC50
NS
78±11
EAEEP
8
67±4
EAEEP
16
45±5**
与NS组比**P<0.01
4 讨论
, 百拇医药
单核巨噬细胞系统(mononuclear phagocyte system, MPS)是机体非特异免疫系统的重要组成部分。本研究发现EAEEP显著降低碳粒廓清率，抑制MPS的功能，显著降低小鼠脾系数，抑制脾脏的发育，而使胸腺指数明显提高，这可能与免疫调节剂的双相作用有关。EAEEP显著降低血清溶血素水平，提示EAEEP可能通过直接作用于B淋巴细胞而抑制小鼠体液免疫功能，但其确切机制尚需深入研究。
参考文献
[1]中国药典2000年版.一部.2000：306
[2]胡世莲，陈礼明，刘圣.墨旱莲研究进展.中医药学报，1997，(6)：28
[3]李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：155～157
[4]薛彬主编.免疫毒理学实验技术.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995：27，38，40
(收稿日期：2000-05-17), http://www.100md.com
单位：刘雪英 赵越平 蒋永培 汤海峰(第四军医大学西京医院药剂科 西安 710032)
关键词：
西北药学杂志000616 中图分类号：R965 文献标识码：A
中药墨旱莲为菊科鳢肠属植物鳢肠(Eclipta prostrata)的干燥地上部分，具有滋肝补血、凉血止血之功能，用于阴虚血热、吐血、衄血、尿血、血痢、崩漏下血、外伤出血等症[1]。近年研究表明墨旱莲有较强的免疫调节作用、止血、保肝、抗炎等多种药理作用，临床上用于多种疾病的治疗[2]。为进一步探讨其免疫调节作用机理及寻找其有效成分，本研究从整体水平观察墨旱莲醋酸乙酯总提物(EAEEP)对机体非特异免疫和体液免疫的影响。
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1 仪器与材料
1.1 仪器 WZ800-D3A可见紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂)；LDZ5-2型低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)；CH电子显微镜(Olympus optical Co.Ld)。
1.2 药品与试剂 墨旱莲醋酸乙酯总提物(Ethyl acetate extract of Eclipta prostrata, EAEEP，西京医院植化室汤海峰、赵越平药师提供，1g相当于原生药120g。用时以水配制成适宜浓度)；印度墨汁(北京第二化工厂，用前过滤，并稀释5倍。补体为SRBC吸收后的豚鼠血清，按V(SRBC)∶V(补体)＝1∶20的比例混匀，4℃冰箱保存20min后，离心，收集上清液，-20℃保存备用。
1.3 动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，18～22g，6～7周龄(第四军医大学动物中心)。
, 百拇医药 2 方法
取小鼠40只，随机均分为4组：①NS组(20ml/kg)；②EAEEP(4mg/kg)；③EAEEP(8mg/kg)；④EAEEP(16mg/kg)。ig，qd，连续6d。
2.1 免疫器官重量法 末次给药24h后，眼眶放血处死动物，称体重，解剖取胸腺及脾脏，精密称重，计算胸腺指数及脾指数[3]。
2.2 碳粒廓清率法 末次给药30min后，尾静脉注射墨汁0.01ml/g，注射后2，10min用吸管分别从眼眶后静脉丛取血20μl，溶于0.1% NaCO3溶液2ml中摇匀，于650nm测吸收度A[3]。K＝(lgA1-lgA2)/(t2-t1)；α＝k/3×[体重/(肝重+脾重)]。
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2.3 半数溶血值测定法 给药3d后，ip 0.2% SRBC 0.2ml致敏。末次给药后24h，眼眶取血，室温放置1h，2000r/min离心10min，取血清用NS稀释200倍。取稀释血清1ml置试管内，加10% SRBC 0.5ml，1∶10补体1ml；另设不加血清的对照管。置37℃水浴中保温30min，然后将管移入冰浴中终止反应；2000r/min离心10min，取上清液1ml加都氏剂3ml，混匀放置10min，540nm处测吸收度。另取10% SRBC 0.25ml，加都氏剂3.75ml，同法测吸收度，作为SRBC半数溶血值。小鼠血清溶血素抗体含量以样品半数溶血值(HC50)表示。HC50＝[样品吸收度值/SRBC半数溶血值]×稀释倍数[4]。
3 结果
3.1 EAEEP对正常小鼠免疫脏器系数的影响 与NS组比较，EAEEP大、中剂量组均明显降低正常小鼠的脾指数，EAEEP大剂量组的胸腺指数与NS组比较有显著的提高，见表1。
, 百拇医药
3.2 EAEEP对小鼠碳粒廓清率的影响 结果表明，EAEEP大、中剂量组均显著降低正常小鼠的廓清指数(K)及校正廓清指数(α)，见表2。
3.3 EAEEP对小鼠血清溶血素的影响 与NS组比较，ig EAEEP大剂量能显著抑制小鼠溶血素的形成，见表3。
表1 EAEEP对小鼠免疫脏器系数的影响 组 别
剂量(mg/kg)
脾(mg/g)
胸腺(mg/g)
NS
2.9±0.4
2.9±0.6
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EAEEP
4
2.8±0.8
3.3±0.7
EAEEP
8
2.3±0.4**
3.3±0.7
EAEEP
16
2.3±0.3**
3.5±0.7*
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与NS组比*P<0.05 **P<0.01表2 EAEEP对正常小鼠碳粒廓清率的影响 组 别
剂量(mg/kg)
K(×10-2)
α
NS
5.7±2.0
7.7±1.2
EAEEP
4
4.5±2.6
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EAEEP
8
3.7±0.9**
6.5±0.9*
EAEEP
16
3.4±0.9**
6.4±0.7**
与NS组比*P<0.05 **P<0.01
表3 EAEEP对免疫抑制小鼠溶血素水平的影响 组 别
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剂量(mg/kg)
HC50
NS
78±11
EAEEP
8
67±4
EAEEP
16
45±5**
与NS组比**P<0.01
4 讨论
, 百拇医药
单核巨噬细胞系统(mononuclear phagocyte system, MPS)是机体非特异免疫系统的重要组成部分。本研究发现EAEEP显著降低碳粒廓清率，抑制MPS的功能，显著降低小鼠脾系数，抑制脾脏的发育，而使胸腺指数明显提高，这可能与免疫调节剂的双相作用有关。EAEEP显著降低血清溶血素水平，提示EAEEP可能通过直接作用于B淋巴细胞而抑制小鼠体液免疫功能，但其确切机制尚需深入研究。
参考文献
[1]中国药典2000年版.一部.2000：306
[2]胡世莲，陈礼明，刘圣.墨旱莲研究进展.中医药学报，1997，(6)：28
[3]李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：155～157
[4]薛彬主编.免疫毒理学实验技术.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995：27，38，40
(收稿日期：2000-05-17), http://www.100md.com