狼疮性肾炎患者血清中IL-18和sFas/sFasL水平及意义
作者：戴勇 李富荣 王沙燕 齐晖 黄瑞芳 李体远
单位：518020 广东省深圳市人民医院中心实验室
关键词：狼疮肾炎；白细胞介素18；可溶性Fas；配体
实用医学杂志000606 摘 要 目的：探讨狼疮性肾炎(LN)患者血清中IL-18和sFas/sFasL变化及相关性。方法：利用夹心-ELISA方法检测35例LN患者和18例正常健康人群血清中IL-18，sFas和sFasL水平。结果：IL-18水平比较，LN组和活动期LN组显著高于静止期LN组及正常对照组(P<0.01)，而静止期LN患者与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。sFas水平，各LN患者组均明显高于正常对照组(P<0.01)。其中LN组血清sFas较非LN组显著增高(P<0.01)。sFasL水平在LN患者组和活动期LN患者与正常对照组差异有显著性(P<0.05)。而其它各组间差异无显著意义(P>0.05)。在LN患者组和活动期LN患者血清中IL-18水平与sFas蛋白呈正相关(P<0.01)。结论：IL-18和sFas/sFasL在狼疮性肾炎患者血清中升高，IL-18和sFas水平具有一定相关性，提示可能参与LN发病。
, 百拇医药
系统性红斑狼疮(SLE)是一侵犯多系统的自身免疫性疾病，常伴有肾脏损害(称狼疮性肾炎，LN)。其特征为体内大量自身抗体的产生。LN的发病与多基因、多因素引起机体免疫调节功能紊乱有关，其病因尚不清楚。最近越来越多的研究证明细胞凋亡紊乱在LN发病和病变进展中起着重要作用。Fas/ApoI为一种调节细胞凋亡I型跨膜糖蛋白受体，Fas配体(FasL)为表达在活性T细胞上的Ⅱ型膜蛋白，Fas通过与FasL结合，可以介导细胞凋亡。而IL-18可直接增强FasL表达，导致Fas表达的细胞凋亡。为了探索IL-18与sFas/sFasL在LN中的变化、相互关系及临床意义，我们对LN患者血清中IL-18和sFas/sFasL水平进行了检测。
1 对象与方法
1.1 检测对象 35例患者均符合美国风湿病学会(ARA)修订的SLE诊断标准[1]，均有持续性蛋白尿>0.5 g/24 h，镜下血尿、管型尿或(和)肾功能衰退。其中男2例，女33例，平均年龄24.7岁；病程0.6～20年，平均4.8年。23例为活动期，12例为缓解期，判定标准均按临床表现和实验室检查结果。所有患者近4周内未用过糖皮质激素类、免疫制剂类和血管扩张剂类药物，无感染表现。对照组18例，为健康献血员，其中男2例，女16例，平均年龄22.6岁。
, 百拇医药
1.2 方法 35例患者均在治疗前清晨采血，分离血清贮存-30℃待测。IL-18检测试剂盒购自法国Diaclone公司，sFas和sFasL检测试剂盒购自美国Gemayme公司，操作按说明书进行，酶标仪(帝肯公司RAINBOW型，瑞士)450 nm处测吸光度值。按各自标准绘制标准曲线，计算IL-18，sFas和sFasL浓度值。
1.3 统计学处理 方差分析观察总变异，在总体均数有差异时，再作两两组间均数q检验。IL-18与sFas/sFasL相关性采用直线相关分析，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 LN患者血清IL-18，sFas和sFasL水平测定结果 见表1。
表1 LN患者血清IL-18，sFas和sFasL水平(
±s) 组别
, http://www.100md.com
例数
IL-18(pg/ml)
sFas(ng/ml)
sFasL(ng/ml)
LN组
35
454.02±216.25▲
13.95±6.78▲▲
0.068±0.037▲
LN活动期
23
, 百拇医药
569.87±232.62▲△
18.52±5.44▲▲*
0.064±0.033▲
LN静止期
12
244.83±121.00
8.48±3.63▲▲
0.062±0.037
正常对照组
18
174.38±88.51
, 百拇医药
2.92±1.18
0.048±0.010
注：与正常对照组比较 ▲▲ P<0.01，▲ P<0.05；与静止期比较 * P<0.01，△ P<0.05
2.2 LN患者血清中IL-18水平与sFas及sFasL相关性 对LN患者组、活动期和静止期IL-18与sFas/sFasL水平采用直线相关分析，发现LN患者组IL-18水平与sFas水平增高呈正相关(r＝0.4765，P<0.01)；活动期患者组IL-18水平与sFas水平增高呈正相关(r＝0.4365，P<0.01)；而其它组无相关性(P>0.05)。
3 讨论
对LN免疫病理观察显示，主要是由于免疫复合物沉积于肾小球系膜区或基底膜上，所以患者体内大量自身免疫抗体的产生与疾病的发生发展有着密切关系。近来的研究[2]认为，这些自身抗体的产生可能与SLE患者淋巴细胞凋亡紊乱有关，细胞凋亡过程中所释放的核小体在抗核抗体的产生中具有重要意义。抗核小体抗体是机体对核小体抗原刺激所发生免疫应答的结果[3]。有人发现88%SLE患者血清中有抗核小体抗体，抗体效价与疾病活动性有关。抗核小体抗体与抗DNA抗体亦存在交叉反应，然而去除核小体物质后抗DNA抗体活性消失，表明抗DNA抗体仅是抗核小体抗体谱中的一个亚型[4]。因此，当SLE患者吞噬细胞功能降低，吞噬细胞不能迅速吞噬这些凋亡小体时，凋亡小体膜破裂，核小体释放入血，刺激机体产生诸如抗DNA抗体，抗组蛋白抗体等众多的自身抗体，这些抗体引起SLE的发生，加重疾病的发展。
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Fas蛋白属于TNF受体和NGF受体家族，成熟的T和B淋巴细胞中均表达Fas蛋白，Fas与FasL结合可诱导细胞凋亡[5]。Mystea等发现在SLE患者外周血T和B淋巴细胞的表达较正常对照高两倍，SLE患者淋巴细胞在体外的凋亡速度增加。另外，有人[6]证明凋亡细胞数量与疾病活动有关。sFas是Fas基因的变异产物，Cheng等[7]从SLE患者PBMC得到的Fas cDNA进行分析时发现，其核苷酸序列第700～762缺失，导致整个跨膜区的丢失，由此产生sFas分子。sFas与FasL结合，干扰了Fas介导的凋亡过程，使得体内自身反应性细胞与激活的淋巴细胞增多而参与SLE病理过程。关于SLE患者血清中的sFas来源，动物实验证实Fas mRNA表达在小鼠大多数组织中，因而各组织表达的Fas达到一定的变异范围都可能成为sFas潜在来源。如来自SLE患者周围血T细胞过度表达Fas mRNA，它们是增加sFas水平的最可能来源之一[6]。sFas的另一来源可能是自身免疫损害组织中的主质及间质细胞。sFas与SLE关系研究较少，有人在活化的T细胞体外培养液中，发现有活性的sFasL。我们对LN患者sFas检测，发现各组LN患者组血清sFas均明显增高，与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。活动期LN患者血清sFas水平较静止期也明显增高(P<0.01)。sFasL在LN患者组和活动期患者组中也明显增高(P<0.05)，但不如sFas增高明显。其中活动期LN患者与缓解期相比，无明显差别(P>0.05)。说明sFas与FasL参与了LN发病过程，同时sFas和sFasL也可以作为LN活动度及评价治疗效果的重要指标。
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IL-18作为一种新发现的细胞因子，可选择性地激活FasL介导的Th1细胞的细胞毒效应，体外培养的Th0，Th1，Th2细胞加入抗原提呈细胞，用FasL特异的引物进行PCR扩增，检测FasL表达的情况，结果只有Th0和Th1细胞表达FasL mRNA[9]。用IL-12和IL-18可增强Th1细胞的表达[10]。由于IL-18可能增强Fas介导的细胞效应，与T，B细胞的凋亡发生具有密切关系。在检测中我们发现LN组和活动期LN患者血清中IL-18水平显著性高于静止期LN患者和正常对照组(P<0.05)，而静止期LN患者与正常对照组无差别(P>0.05)。表明IL-18与LN活动度具有明显关系。在LN患者组和活动性LN患者血清中IL-18水平与sFas水平有显著的正相关性，表明在LN患者组和活动性LN患者血清中IL-18对sFas增高有直接影响。它们均与LN的发病具有一定相关性，IL-18在LN中的作用机制仍有待进一步研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Tan EM,Cohen AS,Fries JF,et al. The 1982 revised criteria for the classofication of systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum,1982,25(11):1271～1277.
2，Tax WJ,Kramers C,van Bruggen MC,et al. Apoptosis,nucleosomes,and nephritis in systemic lupus erythematosus. Kidney Int,1995,48(3):666～673.
3，Burlingame RW,Rubin RL. Drug-induced anti-histone autoantibodies display two patterns of reactivity with substructures of chromatin. J Clin Invest，1991,88(2):680～690.
, http://www.100md.com
4，Karmers C,Hylkema MN,van Bruggen MC,et al. Anti-nucleosome antibodies complexed to nucleosomal antigens show anti-DNA reactivity and bind to rat glomerular basement membrane in vitro. J Clin Invest,1994,94(2):568～577.
5，Emlen W,Niebur J,Kadera R. Accelerated in vitro apoptosis of lymphocytes from patients with systemic lupus erythematosus. J Immunol,1994,152(7):3685～3692.
6，Mysler E,Bini P,Drappa J,et al. The apoptosis-1/Fas protein in human systemic lupus erythematosus. J Clin Invest,1994,93(3):1029～1034.
, http://www.100md.com
7，Cheng J,Zhou T,Liu C,et al. Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form the Fas meolecule. Science,1994,263(5154):1759～1762.
8，Amasaki Y,Kobayashi S,Takeda T,et al. Up-regulated expression of Fas antigen(CD95) by peripheral naive and memory T cell subsets in patients with systemic lupus erythematosus(SLE):a possible mechanism for lymphopenia. Clin Exp Immunol,1995,99(2):245～250.
9，Dao T,Ohashi K,Kayano T,et al. Interferon-gamma-inducing factor,a novel cytokine, enhances Fas ligand-mediated cytotoxicity of murine T helper 1 cells. Cell Immunol,1996,173(2):230～236.
10，Ohtsuki T,Micallef MJ,Kohno K,et al. Interleukin 18 enhance Fas ligand expression and induces apoptosis in Fas-expressing human myelomoncytic KG-1 cells. Anticancer Res,1997,17(5A):3253～3258.
(修回日期：2000-01-17), 百拇医药
单位：518020 广东省深圳市人民医院中心实验室
关键词：狼疮肾炎；白细胞介素18；可溶性Fas；配体
实用医学杂志000606 摘 要 目的：探讨狼疮性肾炎(LN)患者血清中IL-18和sFas/sFasL变化及相关性。方法：利用夹心-ELISA方法检测35例LN患者和18例正常健康人群血清中IL-18，sFas和sFasL水平。结果：IL-18水平比较，LN组和活动期LN组显著高于静止期LN组及正常对照组(P<0.01)，而静止期LN患者与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。sFas水平，各LN患者组均明显高于正常对照组(P<0.01)。其中LN组血清sFas较非LN组显著增高(P<0.01)。sFasL水平在LN患者组和活动期LN患者与正常对照组差异有显著性(P<0.05)。而其它各组间差异无显著意义(P>0.05)。在LN患者组和活动期LN患者血清中IL-18水平与sFas蛋白呈正相关(P<0.01)。结论：IL-18和sFas/sFasL在狼疮性肾炎患者血清中升高，IL-18和sFas水平具有一定相关性，提示可能参与LN发病。
, 百拇医药
系统性红斑狼疮(SLE)是一侵犯多系统的自身免疫性疾病，常伴有肾脏损害(称狼疮性肾炎，LN)。其特征为体内大量自身抗体的产生。LN的发病与多基因、多因素引起机体免疫调节功能紊乱有关，其病因尚不清楚。最近越来越多的研究证明细胞凋亡紊乱在LN发病和病变进展中起着重要作用。Fas/ApoI为一种调节细胞凋亡I型跨膜糖蛋白受体，Fas配体(FasL)为表达在活性T细胞上的Ⅱ型膜蛋白，Fas通过与FasL结合，可以介导细胞凋亡。而IL-18可直接增强FasL表达，导致Fas表达的细胞凋亡。为了探索IL-18与sFas/sFasL在LN中的变化、相互关系及临床意义，我们对LN患者血清中IL-18和sFas/sFasL水平进行了检测。
1 对象与方法
1.1 检测对象 35例患者均符合美国风湿病学会(ARA)修订的SLE诊断标准[1]，均有持续性蛋白尿>0.5 g/24 h，镜下血尿、管型尿或(和)肾功能衰退。其中男2例，女33例，平均年龄24.7岁；病程0.6～20年，平均4.8年。23例为活动期，12例为缓解期，判定标准均按临床表现和实验室检查结果。所有患者近4周内未用过糖皮质激素类、免疫制剂类和血管扩张剂类药物，无感染表现。对照组18例，为健康献血员，其中男2例，女16例，平均年龄22.6岁。
, 百拇医药
1.2 方法 35例患者均在治疗前清晨采血，分离血清贮存-30℃待测。IL-18检测试剂盒购自法国Diaclone公司，sFas和sFasL检测试剂盒购自美国Gemayme公司，操作按说明书进行，酶标仪(帝肯公司RAINBOW型，瑞士)450 nm处测吸光度值。按各自标准绘制标准曲线，计算IL-18，sFas和sFasL浓度值。
1.3 统计学处理 方差分析观察总变异，在总体均数有差异时，再作两两组间均数q检验。IL-18与sFas/sFasL相关性采用直线相关分析，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 LN患者血清IL-18，sFas和sFasL水平测定结果 见表1。
表1 LN患者血清IL-18，sFas和sFasL水平(
±s) 组别, http://www.100md.com
例数
IL-18(pg/ml)
sFas(ng/ml)
sFasL(ng/ml)
LN组
35
454.02±216.25▲
13.95±6.78▲▲
0.068±0.037▲
LN活动期
23
, 百拇医药
569.87±232.62▲△
18.52±5.44▲▲*
0.064±0.033▲
LN静止期
12
244.83±121.00
8.48±3.63▲▲
0.062±0.037
正常对照组
18
174.38±88.51
, 百拇医药
2.92±1.18
0.048±0.010
注：与正常对照组比较 ▲▲ P<0.01，▲ P<0.05；与静止期比较 * P<0.01，△ P<0.05
2.2 LN患者血清中IL-18水平与sFas及sFasL相关性 对LN患者组、活动期和静止期IL-18与sFas/sFasL水平采用直线相关分析，发现LN患者组IL-18水平与sFas水平增高呈正相关(r＝0.4765，P<0.01)；活动期患者组IL-18水平与sFas水平增高呈正相关(r＝0.4365，P<0.01)；而其它组无相关性(P>0.05)。
3 讨论
对LN免疫病理观察显示，主要是由于免疫复合物沉积于肾小球系膜区或基底膜上，所以患者体内大量自身免疫抗体的产生与疾病的发生发展有着密切关系。近来的研究[2]认为，这些自身抗体的产生可能与SLE患者淋巴细胞凋亡紊乱有关，细胞凋亡过程中所释放的核小体在抗核抗体的产生中具有重要意义。抗核小体抗体是机体对核小体抗原刺激所发生免疫应答的结果[3]。有人发现88%SLE患者血清中有抗核小体抗体，抗体效价与疾病活动性有关。抗核小体抗体与抗DNA抗体亦存在交叉反应，然而去除核小体物质后抗DNA抗体活性消失，表明抗DNA抗体仅是抗核小体抗体谱中的一个亚型[4]。因此，当SLE患者吞噬细胞功能降低，吞噬细胞不能迅速吞噬这些凋亡小体时，凋亡小体膜破裂，核小体释放入血，刺激机体产生诸如抗DNA抗体，抗组蛋白抗体等众多的自身抗体，这些抗体引起SLE的发生，加重疾病的发展。
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Fas蛋白属于TNF受体和NGF受体家族，成熟的T和B淋巴细胞中均表达Fas蛋白，Fas与FasL结合可诱导细胞凋亡[5]。Mystea等发现在SLE患者外周血T和B淋巴细胞的表达较正常对照高两倍，SLE患者淋巴细胞在体外的凋亡速度增加。另外，有人[6]证明凋亡细胞数量与疾病活动有关。sFas是Fas基因的变异产物，Cheng等[7]从SLE患者PBMC得到的Fas cDNA进行分析时发现，其核苷酸序列第700～762缺失，导致整个跨膜区的丢失，由此产生sFas分子。sFas与FasL结合，干扰了Fas介导的凋亡过程，使得体内自身反应性细胞与激活的淋巴细胞增多而参与SLE病理过程。关于SLE患者血清中的sFas来源，动物实验证实Fas mRNA表达在小鼠大多数组织中，因而各组织表达的Fas达到一定的变异范围都可能成为sFas潜在来源。如来自SLE患者周围血T细胞过度表达Fas mRNA，它们是增加sFas水平的最可能来源之一[6]。sFas的另一来源可能是自身免疫损害组织中的主质及间质细胞。sFas与SLE关系研究较少，有人在活化的T细胞体外培养液中，发现有活性的sFasL。我们对LN患者sFas检测，发现各组LN患者组血清sFas均明显增高，与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。活动期LN患者血清sFas水平较静止期也明显增高(P<0.01)。sFasL在LN患者组和活动期患者组中也明显增高(P<0.05)，但不如sFas增高明显。其中活动期LN患者与缓解期相比，无明显差别(P>0.05)。说明sFas与FasL参与了LN发病过程，同时sFas和sFasL也可以作为LN活动度及评价治疗效果的重要指标。
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IL-18作为一种新发现的细胞因子，可选择性地激活FasL介导的Th1细胞的细胞毒效应，体外培养的Th0，Th1，Th2细胞加入抗原提呈细胞，用FasL特异的引物进行PCR扩增，检测FasL表达的情况，结果只有Th0和Th1细胞表达FasL mRNA[9]。用IL-12和IL-18可增强Th1细胞的表达[10]。由于IL-18可能增强Fas介导的细胞效应，与T，B细胞的凋亡发生具有密切关系。在检测中我们发现LN组和活动期LN患者血清中IL-18水平显著性高于静止期LN患者和正常对照组(P<0.05)，而静止期LN患者与正常对照组无差别(P>0.05)。表明IL-18与LN活动度具有明显关系。在LN患者组和活动性LN患者血清中IL-18水平与sFas水平有显著的正相关性，表明在LN患者组和活动性LN患者血清中IL-18对sFas增高有直接影响。它们均与LN的发病具有一定相关性，IL-18在LN中的作用机制仍有待进一步研究。
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参考文献
1，Tan EM,Cohen AS,Fries JF,et al. The 1982 revised criteria for the classofication of systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum,1982,25(11):1271～1277.
2，Tax WJ,Kramers C,van Bruggen MC,et al. Apoptosis,nucleosomes,and nephritis in systemic lupus erythematosus. Kidney Int,1995,48(3):666～673.
3，Burlingame RW,Rubin RL. Drug-induced anti-histone autoantibodies display two patterns of reactivity with substructures of chromatin. J Clin Invest，1991,88(2):680～690.
, http://www.100md.com
4，Karmers C,Hylkema MN,van Bruggen MC,et al. Anti-nucleosome antibodies complexed to nucleosomal antigens show anti-DNA reactivity and bind to rat glomerular basement membrane in vitro. J Clin Invest,1994,94(2):568～577.
5，Emlen W,Niebur J,Kadera R. Accelerated in vitro apoptosis of lymphocytes from patients with systemic lupus erythematosus. J Immunol,1994,152(7):3685～3692.
6，Mysler E,Bini P,Drappa J,et al. The apoptosis-1/Fas protein in human systemic lupus erythematosus. J Clin Invest,1994,93(3):1029～1034.
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7，Cheng J,Zhou T,Liu C,et al. Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form the Fas meolecule. Science,1994,263(5154):1759～1762.
8，Amasaki Y,Kobayashi S,Takeda T,et al. Up-regulated expression of Fas antigen(CD95) by peripheral naive and memory T cell subsets in patients with systemic lupus erythematosus(SLE):a possible mechanism for lymphopenia. Clin Exp Immunol,1995,99(2):245～250.
9，Dao T,Ohashi K,Kayano T,et al. Interferon-gamma-inducing factor,a novel cytokine, enhances Fas ligand-mediated cytotoxicity of murine T helper 1 cells. Cell Immunol,1996,173(2):230～236.
10，Ohtsuki T,Micallef MJ,Kohno K,et al. Interleukin 18 enhance Fas ligand expression and induces apoptosis in Fas-expressing human myelomoncytic KG-1 cells. Anticancer Res,1997,17(5A):3253～3258.
(修回日期：2000-01-17), 百拇医药