尤文肉瘤细胞凋亡及p16、p15的表达研究
作者：张震宇 杨群 王立峰 张信英▲
单位：哈尔滨医科大学附属第一医院骨科，150001
关键词：
中国急救医学000628 我们通过对尤文肉瘤凋亡指数及相关调控基因p16、p15蛋白的检测，了解其在尤文肉瘤中的表达水平，并初步探讨其临床及生物学意义。
1 材料与方法
1.1 临床资料 1990年3月～1997年8月，经临床、X线、病理确认为尤文肉瘤的患者12例，男9例，女3例，年龄23～46岁。
1.2 方法 标本均采用手术后切除的石蜡包埋组织，4 μm连续切片，分别用于HE染色、免疫组化染色。细胞凋亡试剂盒、小鼠抗p15、p16蛋白抗体、SABC试剂盒均购自武汉博士德公司。细胞凋亡的检测：应用原位DNA断裂位点的3′-基末端标记法，严格按照细胞凋亡检测步骤操作。p15、p16的检测：SABC法免疫组化染色技术，严格按照SABC法步骤操作。染色阳性信号为棕黄色，无阳性染色者为阴性，阳性细胞<30%为+，阳性细胞>30%者为++。
, 百拇医药
2 结果
凋亡细胞染色呈棕黄色，定位于细胞核膜，部分呈均匀的染色。p53阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞核中。p16、p15阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞核和细胞浆。
12例尤文肉瘤组织中，细胞凋亡呈阳性反应8例，阳性率66.7%。p15呈阳性反应9例，阳性率75%。p16呈阳性反应10例，阳性率83.3%。
3 讨论
细胞凋亡是恶性肿瘤普遍的自发现象。一般认为凋亡发生率高，则肿瘤生长慢，预后较好。Gest-blom研究了神经母细胞瘤中细胞凋亡的发生情况，同样发现凋亡细胞多者预后较好。但Liponen等应用形态学标准，检测膀胱癌、乳腺癌中的细胞凋亡指数，发现凋亡指数高者预后差，但凋亡指数和增殖指标呈正相关[1]。我们认为，这种结论的差异可能与肿瘤细胞所处的状态和运用的技术有关。
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p16、p15基因作为抑癌基因，它们在多种肿瘤中发生突变和缺失。本研究采用免疫组织化学方法检测，结果发现12例尤文肉瘤标本中p16蛋白的缺失率为16.7%，p15蛋白的缺失率为25%。而Madlandsmo等检测了21例骨肉瘤标本，结果发现只有1例发生纯合性缺失，p16基因缺失率不到5%。p16基因与p16蛋白的缺失率有较大差异，我们认为，这可能是从基因到蛋白，中间还需转录、翻译等复杂过程；当DNA转录至RNA时，基因片段可能发生突变，再从RNA翻译至蛋白质时，也有可能出现变异之故。
显然缺失p16、p15基因均可促使细胞无限制地进入G1/S期并加快细胞分裂，最终导致细胞永生化而形成肿瘤细胞。
据文献探讨p15、p16基因产物可起到比p53基因更为有效的一种控制癌细胞分裂的“闸”的作用，因而在癌细胞中出现p15、p16基因的丢失，必然导致细胞分裂速率增加及促进癌细胞的转移。Taga等人采用免疫组化法，检测115例NSCLC标本中p16基因产物表达的阴性率明显与预后相关(P<0.043)。其中早、中期的患者之间差异最为明显(P<0.039)[2]。由此可见，通过检测组织标本中p16、p15，基因的缺失在一定程度上可反映患者的病程，并有可能为今后直接应用于临床，作为一种预测患者预后的肿瘤标志。
, 百拇医药
[基金来源] 哈尔滨医科大学附属第一医院青年基金资助课题
[参考文献]
[1]吴灵，邵志敏，江明，等.运用原位DNA末端标记法研究细胞凋亡对乳腺癌预后的影响.中华肿瘤杂志，1997，19(2)：100-102.
[2]Taga S,Osaki T,Ohgami A,et al.Prognostic value of the immunohistochemical detection of p16INK4 expression in nonsmall cell lung carcinoma.Cancer,1997,80(3):389.
[收稿：1999-01-11，修回：1999-10-17], 百拇医药
单位：哈尔滨医科大学附属第一医院骨科，150001
关键词：
中国急救医学000628 我们通过对尤文肉瘤凋亡指数及相关调控基因p16、p15蛋白的检测，了解其在尤文肉瘤中的表达水平，并初步探讨其临床及生物学意义。
1 材料与方法
1.1 临床资料 1990年3月～1997年8月，经临床、X线、病理确认为尤文肉瘤的患者12例，男9例，女3例，年龄23～46岁。
1.2 方法 标本均采用手术后切除的石蜡包埋组织，4 μm连续切片，分别用于HE染色、免疫组化染色。细胞凋亡试剂盒、小鼠抗p15、p16蛋白抗体、SABC试剂盒均购自武汉博士德公司。细胞凋亡的检测：应用原位DNA断裂位点的3′-基末端标记法，严格按照细胞凋亡检测步骤操作。p15、p16的检测：SABC法免疫组化染色技术，严格按照SABC法步骤操作。染色阳性信号为棕黄色，无阳性染色者为阴性，阳性细胞<30%为+，阳性细胞>30%者为++。
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2 结果
凋亡细胞染色呈棕黄色，定位于细胞核膜，部分呈均匀的染色。p53阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞核中。p16、p15阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞核和细胞浆。
12例尤文肉瘤组织中，细胞凋亡呈阳性反应8例，阳性率66.7%。p15呈阳性反应9例，阳性率75%。p16呈阳性反应10例，阳性率83.3%。
3 讨论
细胞凋亡是恶性肿瘤普遍的自发现象。一般认为凋亡发生率高，则肿瘤生长慢，预后较好。Gest-blom研究了神经母细胞瘤中细胞凋亡的发生情况，同样发现凋亡细胞多者预后较好。但Liponen等应用形态学标准，检测膀胱癌、乳腺癌中的细胞凋亡指数，发现凋亡指数高者预后差，但凋亡指数和增殖指标呈正相关[1]。我们认为，这种结论的差异可能与肿瘤细胞所处的状态和运用的技术有关。
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p16、p15基因作为抑癌基因，它们在多种肿瘤中发生突变和缺失。本研究采用免疫组织化学方法检测，结果发现12例尤文肉瘤标本中p16蛋白的缺失率为16.7%，p15蛋白的缺失率为25%。而Madlandsmo等检测了21例骨肉瘤标本，结果发现只有1例发生纯合性缺失，p16基因缺失率不到5%。p16基因与p16蛋白的缺失率有较大差异，我们认为，这可能是从基因到蛋白，中间还需转录、翻译等复杂过程；当DNA转录至RNA时，基因片段可能发生突变，再从RNA翻译至蛋白质时，也有可能出现变异之故。
显然缺失p16、p15基因均可促使细胞无限制地进入G1/S期并加快细胞分裂，最终导致细胞永生化而形成肿瘤细胞。
据文献探讨p15、p16基因产物可起到比p53基因更为有效的一种控制癌细胞分裂的“闸”的作用，因而在癌细胞中出现p15、p16基因的丢失，必然导致细胞分裂速率增加及促进癌细胞的转移。Taga等人采用免疫组化法，检测115例NSCLC标本中p16基因产物表达的阴性率明显与预后相关(P<0.043)。其中早、中期的患者之间差异最为明显(P<0.039)[2]。由此可见，通过检测组织标本中p16、p15，基因的缺失在一定程度上可反映患者的病程，并有可能为今后直接应用于临床，作为一种预测患者预后的肿瘤标志。
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[基金来源] 哈尔滨医科大学附属第一医院青年基金资助课题
[参考文献]
[1]吴灵，邵志敏，江明，等.运用原位DNA末端标记法研究细胞凋亡对乳腺癌预后的影响.中华肿瘤杂志，1997，19(2)：100-102.
[2]Taga S,Osaki T,Ohgami A,et al.Prognostic value of the immunohistochemical detection of p16INK4 expression in nonsmall cell lung carcinoma.Cancer,1997,80(3):389.
[收稿：1999-01-11，修回：1999-10-17], 百拇医药