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编号:10205862
腹腔液胰淀粉酶水平对急性实验性猴坏死性胰腺炎的病情及预后的判定
http://www.100md.com 中国医科学院学报 2000年第22卷第1期
     杨志英 唐伟松 赵平 杨植 翁杏仕

    摘 要:目的 研究急性坏死性胰腺炎腹腔液胰淀粉酶在预测胰腺炎胰腺病变及预后中的意义。方法 经猴十二指肠乳头行胰管内插管逆行注射胆汁和胰蛋白酶混合液,制成猴急性坏死性胰腺炎 模型。 结果 猴胰腺炎胰腺病变程度与胰管内注射胆汁和胰蛋白酶混合液的速度、注液量及早期腹腔液胰 淀粉 酶水平呈正相关,随注液速度增快(3~13 ml/min),注液量增大(0.1~1.0 ml/kg),腹腔液 胰淀粉酶水平增高,胰腺病变程度加重。同时发现猴胰腺炎腹腔液胰淀粉酶(0.5 h)水平 与生 存时间呈负相关,相关系数r=-0.88,相关方程为t=-9.06 InX+129.85,P<0.0 1。结论 急性坏死性胰腺炎早期腹腔液胰淀粉酶水平可以预示胰腺炎病变严重程度及预后。

    关键词:急性坏死性胰腺炎 腹腔液 胰淀粉酶
, 百拇医药
    急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)是一种危重的、死亡率较高的胰腺疾病,故早期了解胰腺 炎胰腺病变程度及预后,对其治疗具有重要的意义。目前临床上常用的评估AHNP的方法为Ra nson评分法[1]、APACHEⅡ评分法[2]等,这些方法均较为复杂,在应用上受到一定的限制,因此需要一种预测胰腺炎早期病变程度及预后的简便快捷的方法和指标。

    材料和方法

    实验材料

    实验动物:雄性猕猴10只,年龄6~10岁,平均体重(6.2±1.5)kg,中国医学科学院实验 动物饲养场。

    胆汁-胰蛋白酶混合液:1∶250实验用胰蛋白酶(trypsin,Sigma公司)用生理盐水配成5%的 溶液,与细针胆囊底穿刺抽取的自体胆汁1∶1混合制成。
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    注射器泵:美国HARVERD apparatus22型注射器泵。

    套管针:Braun公司22号外套管针。

    模型制备 氯胺酮肌肉注射分离麻醉,1%普鲁卡因持续静脉滴注维持。下肢 股静脉插管联通 静脉输液,上腹正中切口进腹,经胆囊底穿刺抽取自体胆汁,与5%的胰蛋白酶以1∶1比例混 合制成混合液。于十二指肠降部打开侧腹膜,游离胰头及十二指肠,纵行切开十二指肠降部 上中1/3,寻及胰管开口,经胰管开口逆行插管。按不同的给药剂量及给药速度(表1)注射胆 汁-胰蛋白酶混合液制备胰腺炎模型,注射完毕后静置2 min拔出套管,缝合肠壁。观察30 min后取胰周腹腔渗出液,关腹。不给任何治疗,仅按5 ml.kg-1.h-1持续 滴注5%的GNS液。

    观察指标 急性坏死性胰腺炎猴的生存时间;胰腺炎模型制成后0.5、2、10 、24、48 h 或死亡时腹腔液胰淀粉酶(peritoneal fluid P-amylase,PF amylase)的变化;胰腺炎模型 制成前0.5 h,制成后2、10、24、48 h或死亡时血清胰淀粉酶的变化;猴死亡后胰腺 病理检查。
, 百拇医药
    标本采集及测定

    血标本:分别在动物模型制成前0.5 h,模型制成后2、10、24、48 h及死亡时取股 静脉血2 ml,分离血清,-70℃冰箱保存待测。

    腹腔液:分别在动物模型制成后0.5、2、10、24、48 h或死亡时取腹腔液1~2 ml离心(3 000 r/min)去沉淀,-70℃冰箱保存待测。

    病理标本:于动物死亡后即刻解剖,取胰腺组织,福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色 ,光镜检查。

    胰淀粉酶测定:应用Beckman公司的胰淀粉酶酶反应法测定试纸在Mannheim Boehringe公司 的Refltron自动生化分析仪上测定。

    结果

    术中所见胰腺肉眼改变 经胰管开口逆行插管,注射自体胆汁及胰蛋白酶混合液后即刻胰腺肿胀,全胰变棕黑色,并产生胰周血性渗液,为明确的急性出血坏死性胰腺炎。
, 百拇医药
    胆汁-胰蛋白酶混合液的不同注射速度及剂量对腹腔液胰淀粉酶值、动物生存时间及胰腺病理改变的影响 结果见表1。

    表 1 胰管内注射混合液的不同速度及不同剂量对腹腔液胰淀粉酶值、动物生存时间及胰腺病理改 变的影响

    Table 1 The effect of different rates and volumes of injection mixture into pancreatic d uct on peritoneal fluid pancreatic amylase,survival time,and histopatho logical change of acute pancreatitis of monkey

    No

    Injection mixture into pancreatic duct
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    PF amylase*

    (×104 U/L)

    Survival time (h)

    Histopathology

    Rate (ml/min)

    Volume (ml/kg)

    1

    13

    1.0

    154

    2
, 百拇医药
    Whole pancreatic necrosis

    2

    13

    0.2

    35.5

    15.5

    Partial pancreatic necrosis

    3

    6

    0.2

    7.5

    35
, 百拇医药
    Focal pancreatic necrosis

    4

    6

    0.2

    2.5

    24.5

    Focal pancreatic necrosis

    5

    6

    0.2

    9.1

    23

, 百拇医药     Focal pancreatic necrosis

    6

    6

    0.2

    7.9

    29

    Focal pancreatic necrosis

    7

    6

    0.2

    5.1

    33

    Focal pancreatic necrosis
, http://www.100md.com
    8

    6

    0.2

    5.4

    28

    Focal pancreatic necrosis

    9

    3

    0.2

    1.2

    56

    Interstitial edema and hemorrhage
, http://www.100md.com
    10

    3

    0.1

    0.9

    >120

    Interstitial edema

    * The level of peritoneal fluid pancreatic amylase (PF amylase) at 0.5 hour after injection mixture into pancreatic duct

    腹腔液胰淀粉酶与生存时间的相关分析 1~9号猴在胰管内注射混合液后0.5 h时腹腔液胰淀粉酶水平与生存时间的相关系数 r=-0.88, 相关方程为t=-9.06 InX+129.85,P<0.01。
, 百拇医药
    血清胰淀粉酶变化 1~10号猴血清胰淀粉酶水平在胰腺炎模型制成后2 h时为2736.6±553.9 U/L,与胰腺 炎严重程度及胰腺坏死程度不一致。

    腹腔液胰淀粉酶变化 见表2。

    表 2 急性坏死性胰腺炎腹腔液胰淀粉酶的变化

    Table 2 The changes of peritoneal fluid P-amylase of acute necrotic pancreatitis of mo nkey (×104 U/L)

    No

    Injection mixture into pancreatic duct

    After 0.5 h
, 百拇医药
    After 2 h

    After 10 h

    After 24 h

    After 48 h

    1

    154.0

    169.0*

    2

    35.5

    29.0

    5.2

    3.8*
, 百拇医药
    3

    7.5

    13.2

    6.8

    4.2

    2.3*

    4

    2.5

    5.1

    1.4

    3.8

    1.9*

    5
, 百拇医药
    9.1

    16.4

    6.7

    4.0*

    6

    7.9

    15.8

    7.0

    1.3

    0.9*

    7

    5.1

    10.8
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    4.6

    2.4

    0.8*

    8

    5.4

    12.7

    6.4

    3.4

    1.8*

    9

    1.2

    0.9

    0.3
, http://www.100md.com
    N

    N

    10

    0.9

    0.1

    N

    N

    N

    * The level of peritoneal fluid P-amylase at death;N:no peritoneal fluid 讨论

    急性胰腺炎严重程度的早期评估在急性胰腺炎患者治疗中具有重要的,甚至是决定性的意义 。目前临床上常用的指标主要有Ranson评分法、急性生理学和长期健康评价Ⅱ(APACHEⅡ)、早期增强CT(CECT)[3]及腹腔灌洗[4]等。Ranson及APACHEⅡ评分法较为客观,可比性较好,但需要检测的项目多且复杂,需在入院后24~48 h才能完成,使临床应用,尤其在基层医院应用较困难。CECT是目前诊断胰腺坏死的金标准,对诊断胰腺坏死、胰周及腹腔积液、胰腺及胰周感染都具有重要意义,但CECT也存在假阳性(在胰腺纤维化或钙化时)及假阴性(在急性坏死性胰腺炎早期或微小坏死病变),且需要专门的仪器。腹腔灌洗客观性及可比性较差,不宜被患者接受,且有一定的并发症,在应用上亦受到一定的限制。近年来有研究者注意到急性坏死性胰腺炎腹水中trypsinogen activation peptides(TAP)的浓度与胰腺坏死一致,能够预测胰腺炎的病情及预后[5,6]
, 百拇医药
    本研究通过经十二指肠胰管开口逆行注入胆汁-胰蛋白酶混合液的方法制成急性坏死性 胰腺炎猴模型。从结果可以看出用此方法制成的胰腺炎模型,胰腺病变程度与胰管内注射混 合液的速度和剂量有关:在注射速度相同的条件下,给予不同的注液剂量,剂量越大,病变越严重;在注射混合液剂量相同的条件下胰管注射速度越快,其胰腺病变越严重。同时发 现胰腺炎早期腹腔液胰淀粉酶水平与胰腺病变的严重程度平行,1号猴注射混合液后0.5 h 腹腔液胰淀粉酶浓度达154×104 U/L,胰腺完全变黑破坏,胰腺小叶基本坏死消失,病变 极为严重,仅存活2 h;2号猴注射混合液后0.5 h腹腔胰液淀粉酶浓度达35.5×104 U /L,其胰腺病变亦较重,坏死成大片状,胰管破坏,出血明显,存活15.5 h;3~8号猴 较前两例胰腺病变明显减轻,只有灶性胰腺坏死,小叶结构破坏;而9和10号猴,胰腺病变 轻,基本上相当于水肿型胰腺炎的表现。早期腹腔液胰淀粉酶水平与生存时间亦相关,如1 ~9 号猴在急性坏死性胰腺炎早期(注射混合液后0.5 h)腹腔液胰淀粉酶均>1×104 U/L, 与 生存时间呈负相关,相关系数r=-0.88,相关方程为t=-9.06 InX+129.85 ,P<0.01。提示胰腺炎早期腹腔液胰淀粉酶水平可以反映胰腺病变程度、预示疾病的预后,本实验结果与Pickford等[4]用腹腔液的颜色和量来预测胰腺炎严重程度是 一致的,本实验发现在模型制成后0.5 h时腹腔液胰淀粉酶水平与腹腔液的颜色是平行的,颜色越深,淀粉酶水平越高,胰腺病变越严重,腹腔渗液越多。腹腔液胰淀粉酶定量测定作为一种定量指标,可能较用腹腔液的颜色及量来判定胰腺炎严重程度更为准确,可比性强,且实施简易方便,无明显副作用,对临床早期快速确定胰腺炎病情及预后具有重要意义。
, 百拇医药
    由于此结果是在未给予任何治疗的情况下获得的,故在临床上是否有此相关关系尚有待于进 一步的实验及临床观察研究。在本实验中,也发现血清胰淀粉酶与胰腺病变程度不一致,这与临床观察结果相同,仅具有胰腺炎诊断价值,对判定胰腺病变程度及预后无明显意义。

    另外在大动物急性坏死性胰腺炎模型制作过程中,应用腹腔液胰淀粉酶作为筛选模型的指标,可使模型的胰腺病变程度及病情严重程度相似,模型重复性更加稳定,使以此模型为基础的实验更有意义。

    作者简介:翁杏仕 Department of General Surgery,Affiliated Hospital,Chende Medical

    College;

    杨植 Department of General Surgery,the Sixth People's Hospital of
, 百拇医药
    Beijing;

    杨志英 C orresponding author Tel:01065296025,Fax:010-65124875,E-mail:yangzy@csc.pumch.ac.cn

    作者单位:杨志英(中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院基本外科,北京 100730)

    唐伟松(中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院基本外科,北京 100730)

    赵平(中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院基本外科,北京 100730)

    杨植(中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院基本外科,北京 100730)

    翁杏仕(中国医学科学院 中国协和医科大学 协和医院基本外科,北京 100730)
, 百拇医药
    参考文献:

    [1] Ranson JHC,Rifkind KM,Roses DF,et al.Prognostic sig ns and the role of operative management in acute pancreatitis.Surg Gynecol Obstet,1974 ,139:69-81

    [2] Larvin M,McMahon MJ.APACHE-Ⅱ score for assessment and monitorin g of acute pancreatitis.Lancet,1989,2:201-205

    [3] Maier W.Grading of acute pancreatitis by computed tomography morp holo gy,in diagnostic procedures in pancreatic disease.Malfertheiner P,Ditschuneit H, eds.Beilin,Heidelberg;Spring-Verlag,1986.44-48
, 百拇医药
    [4] Pickford R,Blackett RL,McMahon MJ.Early assessment of severity of acute pancreatitis using peritoneal lavage.Br Med J,1977,2:1377-1379

    [5] Heath DI,Wilson C,Gudgeon AM,et al.Trypsinogen activation pep tide s (TAP) concentrations in the peritoneal fluid of patients with acute pancreatit is and their relation to the presence of histologically confirmed pancreatic nec rosis.Gut,1994,35:1311-1315

    [6] Schmidt J,Ryschich E,Sinn-HP,et al.Trypsinogen activation pe ptid es (TAP) in peritoneal fluid as predictors of late histopathological injury in n ecrotizing pancreatitis of the rat.Dig Dis Sci,1999,44(4):823-829, 百拇医药