胆囊癌组织CD15和c-erbB-2表达及相关性研究
谷化平 周翠玲 尚培中
摘 要 目的：研究CD15抗原和c-erbB-2癌基因蛋白产物在胆囊癌组织中的表达与组织类型、病理分级和转移的关系，并探讨CD15与癌基因蛋白表达的相关性。方法：应用微波-SP免疫组化法，检测45例胆囊腺癌、17例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中CD15和c-erbB-2的表达水平。结果：在胆囊癌中CD15和c-erbB--2阳性表达率分别为71.1%和48.9%。其表达阳性率在胆率癌中均明显高于胆囊腺瘤(P<0.05)，并与胆囊癌的类型、病理分级和转移密切相关(P<0.05)。CD15表达与c-erbB-2表达呈明显相关联。结论：CD15和c-erbB-2是胆囊癌高度恶性和预后不良重要生物学指标。胆囊癌CD15表达与c-erbB-2蛋白表达具有相互协同作用可能。
关键词：胆囊肿瘤 CD15抗原 c-erbB-2 免疫组织化学
恶性肿瘤的发生发展是一种复杂的多阶段过程，与多个基因和多种分子水平变化密切相关。我们应用免疫组化法对45例胆囊癌组织进行CD15和c-erbB-2检测，研究其表达与肿瘤转移的关系，并探讨CD15与c-erbB-2表达的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 研究材料 45例胆囊癌(高分化26例、低分化19例)、17例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎为我院1992～1998年间手术切除标本。标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片厚4～5μm，经HE染色证实为腺癌。参照Bloom和Riehand平分法对45例胆囊癌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
1.2 方法 鼠抗CD15单克隆抗体、兔抗c--erbB-2多克隆抗体和SP试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。免疫组织化学染色采用微波-SP法。即切片常规脱蜡水化后，放入枸橼酸缓冲液(10mmol/L,pH6.0)内，用YWY781A型医用微波仪170W辐射外理5分钟，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，所不同者为三步抗原孵育和正常羊血清封闭均用微波仪130W各辐射处理5分钟、保温2分钟。实验用已知CD15阳性大肠癌、c-erbB-2阳性乳腺癌组织作为阳性对照，用PBS取代一抗作阴性对照。DAB显色。
, 百拇医药
1.3 结果判断 CD15在腺腔缘、细胞膜和(或)细胞浆内有棕色染色者为阳性，c-erbB-2有棕色染色者为阳性。凡无着色者为阴性。
1.4 统计学处理应用 X2检验和相关分析。
2 结果
2.1 CD15和c-erbB-2表达 CD15阳性物质在胆囊癌组织主要分布于细胞膜和细胞浆，在胆囊腺瘤和慢性炎组织主要分布于腺空缘；c-erbB-2阳性物质主要分布于胆囊癌细胞膜和胆囊腺瘤细胞浆；慢性胆囊炎组织未见着色；CD15和c-erbB-2在胆囊良恶性病变组织的表达结果见表1。
表1 CD15和C-erbB-2在胆囊良恶性病变组织中的表达
组织类型
n
, http://www.100md.com
CD15
c-erbB-2
阳性数(%)
阳性数(%)
胆囊癌
45
32(71.1)*
22(48.9)*
胆囊腺瘤
17
6(35.3)
2(11.8)
, http://www.100md.com
慢性胆囊炎
10
2(20.0)
0
与胆囊腺瘤比较：*P<0.05
2.2 CD15和C-erbB-2表达与胆囊癌组织学特征的关系(表2)
表2 CD15和C-erbB-2表达与胆囊癌组织学特征的关系
组织学特征
n
CD15
c-erbB-2
, 百拇医药
阳性数(%)
P值
阳性数(%)
P值
病理类型
高分化腺癌
26
15(57.7)
9(34.6)
低分化腺癌
19
17(89.5)
<0.05
, http://www.100md.com
13(68.4)
<0.05
组织学分级
Ⅰ
21
12(57.1)
7(33.3)
Ⅱ
14
10(71.4)
<0.05
7(50.0)
<0.05
, http://www.100md.com
Ⅲ
10
10
10(100.0)
8(80.0)
转移
无
21
11(52.4)
8(38.1)
有
24
21(87.5)
, http://www.100md.com
<0.01
20(83.3)
<0.05
2.3 CD15表达与C-erbB-2表达的关系 在胆囊癌CD15阳性表达的32例中，c-erbB-2阳性者为20例(62.5%)，CD15阴性的13例中，c-erbB-2阳性表达者为2例(15.4%)，CD15阳性者c-erbB-2阳性表达率明显高于CD15阴性者(X2＝8.21，P<0.01)，CD15表达与c-erbB-2表达呈明显相关联(P<0.005)。3 讨论
业已证实，肿瘤细胞表面糖抗原在肿瘤侵袭和转移中起着重要作用，其中包括选择素所识别并能结合的配基。CD15抗原(又叫粒细胞相关抗原、或LewisX)是一种糖蛋白，属细胞粘附分子(CAMs)成员，由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺组成的碳水化合物质抗原，是选择素所识别的比较确定的一个配基[1～3]。研究表明，CD15表达与许多肿瘤的侵袭、转移和预后密切相关，被视为一些肿瘤预后不良的标志物[2～5]。有关CD15在胆囊癌的研究国内文献未见报道。本组胆囊癌中CD15表达阳性率为71.1%，显著高于胆囊良病变(P<0.05)，表明CD15表达与胆囊癌的发生有关。本研究发现：CD15表达阳性率在低分化腺癌明显高于高分化腺癌(P<0.05)，在组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级之间差异有显著意义(P<0.05)，在有转移的肿瘤组中明显高于无转移的肿瘤(P<0.01)。提示CD15表达对反映胆囊癌的恶性程度和转移是一种良好标志物。
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c-erbB-2癌基因定位于人体染色体17P21带上，编码具有酪氨酸蛋白激酶活性的细胞膜糖蛋白，参与细胞生长，繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长作用，c-erbB-2结构改变如扩增导致过度表达，增强有丝分裂，在癌瘤启动阶段后期，这种机制使某些不正常的细胞获得不受机体控制而独立生长能力[6]。通常分析肿瘤细胞中DNA、mRNA或其产物的不同水平上质和量的变化与肿瘤侵袭转移表型之间的相关性、或通过基因转染使转染肿瘤细胞获得转移能力的实验证明该基因与肿瘤转移相关。本组胆囊癌中c-erbB-2阳性表达率为49.8%，显著高于胆囊腺瘤(P<0.05)。C-erbB-2表达与胆囊癌组织学类型、分级和转移相关(P<0.05)。提示c-erbB-2对判断肿瘤恶性程度、预测转移是一种良好标志物。
越来越多的研究证实，恶性肿瘤的发生发展是一个涉及到多基因、多分子水平变化的多阶段过程。在其过程中不同功能的基因对细胞所产生的影响协同地增加了细胞的癌变[7]，其中CAMs在此过程中起着关键性作用。它们不仅与细胞程序性死亡乃至肿瘤发生、浸润及转移等密切相关，而且也参与细胞间的信息传递，或成为细胞内的第二信使，并行使辅助分子功能，可将细胞外信息传至细胞质及细胞核，调控基因表达[8]。本研究发现，在胆囊癌中CD15表达与c-erbB-2表达呈明显相关联。这提示，在胆囊癌发生发展、侵袭转移过程中，CD15异常表达与其他基因表达具有相互诱导、调控和协同作用的可能，其机理有待深入研究。
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作者简介：谷化平(1949-)，男，安徽濉溪县人，副主任医师。
作者单位：谷化平(中国人民解放军第251医院 病理科)
尚培中(中国人民解放军第251医院 病理科)
周翠玲(张家口医学院一附院外二科 张家口 075000)
参考文献
[1]陈金联，周同.选择素与肿瘤转移研究进展[J].生命科学，1996，8(1)：31-33.
[2]Brooks SA,Leathem AJC.Expression of the CD15 antigen(Lewis X)in breast cancer[J].Histochem J,1995,27(9):689-693.
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[3]Torii A,Nakayama A,Harada A,et al.Expression of the CD1 5 antigen in hepatocellular carcinoma[J].Cancer,1993,71(21):3864-3867.
[4]谷化平，尚培中，胡海霞等.CD15和nM23/NDPK在肾癌中的表达及其临床意义[J].中华泌尿外科杂志，1999，20(5)：310.
[5]Konety BR,Bullou B,Jaffe R,et al.Expression of SSEA-1(Lew is X)on transitional cell carcinoma of the bladder[J].Urol Int,1997,58(2):69-74.
[6]许良中.实用肿瘤病理方法学[M].上海：上海医科大学出版社，1997.437-438.
[7]李呜，于茂生，靳凤烁等.联合应用C-Haras,C-myc反义寡聚脱氧核苷酸对膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用[J].中华外科杂志，1996，34(1)：7-9.
[8]周同，宋长玲.细胞粘附分子研究的某些进展[J].生命科学，1994，6(3)：27-31., http://www.100md.com
摘 要 目的：研究CD15抗原和c-erbB-2癌基因蛋白产物在胆囊癌组织中的表达与组织类型、病理分级和转移的关系，并探讨CD15与癌基因蛋白表达的相关性。方法：应用微波-SP免疫组化法，检测45例胆囊腺癌、17例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中CD15和c-erbB-2的表达水平。结果：在胆囊癌中CD15和c-erbB--2阳性表达率分别为71.1%和48.9%。其表达阳性率在胆率癌中均明显高于胆囊腺瘤(P<0.05)，并与胆囊癌的类型、病理分级和转移密切相关(P<0.05)。CD15表达与c-erbB-2表达呈明显相关联。结论：CD15和c-erbB-2是胆囊癌高度恶性和预后不良重要生物学指标。胆囊癌CD15表达与c-erbB-2蛋白表达具有相互协同作用可能。
关键词：胆囊肿瘤 CD15抗原 c-erbB-2 免疫组织化学
恶性肿瘤的发生发展是一种复杂的多阶段过程，与多个基因和多种分子水平变化密切相关。我们应用免疫组化法对45例胆囊癌组织进行CD15和c-erbB-2检测，研究其表达与肿瘤转移的关系，并探讨CD15与c-erbB-2表达的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 研究材料 45例胆囊癌(高分化26例、低分化19例)、17例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎为我院1992～1998年间手术切除标本。标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片厚4～5μm，经HE染色证实为腺癌。参照Bloom和Riehand平分法对45例胆囊癌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
1.2 方法 鼠抗CD15单克隆抗体、兔抗c--erbB-2多克隆抗体和SP试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。免疫组织化学染色采用微波-SP法。即切片常规脱蜡水化后，放入枸橼酸缓冲液(10mmol/L,pH6.0)内，用YWY781A型医用微波仪170W辐射外理5分钟，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，所不同者为三步抗原孵育和正常羊血清封闭均用微波仪130W各辐射处理5分钟、保温2分钟。实验用已知CD15阳性大肠癌、c-erbB-2阳性乳腺癌组织作为阳性对照，用PBS取代一抗作阴性对照。DAB显色。
, 百拇医药
1.3 结果判断 CD15在腺腔缘、细胞膜和(或)细胞浆内有棕色染色者为阳性，c-erbB-2有棕色染色者为阳性。凡无着色者为阴性。
1.4 统计学处理应用 X2检验和相关分析。
2 结果
2.1 CD15和c-erbB-2表达 CD15阳性物质在胆囊癌组织主要分布于细胞膜和细胞浆，在胆囊腺瘤和慢性炎组织主要分布于腺空缘；c-erbB-2阳性物质主要分布于胆囊癌细胞膜和胆囊腺瘤细胞浆；慢性胆囊炎组织未见着色；CD15和c-erbB-2在胆囊良恶性病变组织的表达结果见表1。
表1 CD15和C-erbB-2在胆囊良恶性病变组织中的表达
组织类型
n
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CD15
c-erbB-2
阳性数(%)
阳性数(%)
胆囊癌
45
32(71.1)*
22(48.9)*
胆囊腺瘤
17
6(35.3)
2(11.8)
, http://www.100md.com
慢性胆囊炎
10
2(20.0)
0
与胆囊腺瘤比较：*P<0.05
2.2 CD15和C-erbB-2表达与胆囊癌组织学特征的关系(表2)
表2 CD15和C-erbB-2表达与胆囊癌组织学特征的关系
组织学特征
n
CD15
c-erbB-2
, 百拇医药
阳性数(%)
P值
阳性数(%)
P值
病理类型
高分化腺癌
26
15(57.7)
9(34.6)
低分化腺癌
19
17(89.5)
<0.05
, http://www.100md.com
13(68.4)
<0.05
组织学分级
Ⅰ
21
12(57.1)
7(33.3)
Ⅱ
14
10(71.4)
<0.05
7(50.0)
<0.05
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Ⅲ
10
10
10(100.0)
8(80.0)
转移
无
21
11(52.4)
8(38.1)
有
24
21(87.5)
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<0.01
20(83.3)
<0.05
2.3 CD15表达与C-erbB-2表达的关系 在胆囊癌CD15阳性表达的32例中，c-erbB-2阳性者为20例(62.5%)，CD15阴性的13例中，c-erbB-2阳性表达者为2例(15.4%)，CD15阳性者c-erbB-2阳性表达率明显高于CD15阴性者(X2＝8.21，P<0.01)，CD15表达与c-erbB-2表达呈明显相关联(P<0.005)。3 讨论
业已证实，肿瘤细胞表面糖抗原在肿瘤侵袭和转移中起着重要作用，其中包括选择素所识别并能结合的配基。CD15抗原(又叫粒细胞相关抗原、或LewisX)是一种糖蛋白，属细胞粘附分子(CAMs)成员，由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺组成的碳水化合物质抗原，是选择素所识别的比较确定的一个配基[1～3]。研究表明，CD15表达与许多肿瘤的侵袭、转移和预后密切相关，被视为一些肿瘤预后不良的标志物[2～5]。有关CD15在胆囊癌的研究国内文献未见报道。本组胆囊癌中CD15表达阳性率为71.1%，显著高于胆囊良病变(P<0.05)，表明CD15表达与胆囊癌的发生有关。本研究发现：CD15表达阳性率在低分化腺癌明显高于高分化腺癌(P<0.05)，在组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级之间差异有显著意义(P<0.05)，在有转移的肿瘤组中明显高于无转移的肿瘤(P<0.01)。提示CD15表达对反映胆囊癌的恶性程度和转移是一种良好标志物。
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c-erbB-2癌基因定位于人体染色体17P21带上，编码具有酪氨酸蛋白激酶活性的细胞膜糖蛋白，参与细胞生长，繁殖、分裂的调控及控制肿瘤的生长作用，c-erbB-2结构改变如扩增导致过度表达，增强有丝分裂，在癌瘤启动阶段后期，这种机制使某些不正常的细胞获得不受机体控制而独立生长能力[6]。通常分析肿瘤细胞中DNA、mRNA或其产物的不同水平上质和量的变化与肿瘤侵袭转移表型之间的相关性、或通过基因转染使转染肿瘤细胞获得转移能力的实验证明该基因与肿瘤转移相关。本组胆囊癌中c-erbB-2阳性表达率为49.8%，显著高于胆囊腺瘤(P<0.05)。C-erbB-2表达与胆囊癌组织学类型、分级和转移相关(P<0.05)。提示c-erbB-2对判断肿瘤恶性程度、预测转移是一种良好标志物。
越来越多的研究证实，恶性肿瘤的发生发展是一个涉及到多基因、多分子水平变化的多阶段过程。在其过程中不同功能的基因对细胞所产生的影响协同地增加了细胞的癌变[7]，其中CAMs在此过程中起着关键性作用。它们不仅与细胞程序性死亡乃至肿瘤发生、浸润及转移等密切相关，而且也参与细胞间的信息传递，或成为细胞内的第二信使，并行使辅助分子功能，可将细胞外信息传至细胞质及细胞核，调控基因表达[8]。本研究发现，在胆囊癌中CD15表达与c-erbB-2表达呈明显相关联。这提示，在胆囊癌发生发展、侵袭转移过程中，CD15异常表达与其他基因表达具有相互诱导、调控和协同作用的可能，其机理有待深入研究。
, http://www.100md.com
作者简介：谷化平(1949-)，男，安徽濉溪县人，副主任医师。
作者单位：谷化平(中国人民解放军第251医院 病理科)
尚培中(中国人民解放军第251医院 病理科)
周翠玲(张家口医学院一附院外二科 张家口 075000)
参考文献
[1]陈金联，周同.选择素与肿瘤转移研究进展[J].生命科学，1996，8(1)：31-33.
[2]Brooks SA,Leathem AJC.Expression of the CD15 antigen(Lewis X)in breast cancer[J].Histochem J,1995,27(9):689-693.
, http://www.100md.com
[3]Torii A,Nakayama A,Harada A,et al.Expression of the CD1 5 antigen in hepatocellular carcinoma[J].Cancer,1993,71(21):3864-3867.
[4]谷化平，尚培中，胡海霞等.CD15和nM23/NDPK在肾癌中的表达及其临床意义[J].中华泌尿外科杂志，1999，20(5)：310.
[5]Konety BR,Bullou B,Jaffe R,et al.Expression of SSEA-1(Lew is X)on transitional cell carcinoma of the bladder[J].Urol Int,1997,58(2):69-74.
[6]许良中.实用肿瘤病理方法学[M].上海：上海医科大学出版社，1997.437-438.
[7]李呜，于茂生，靳凤烁等.联合应用C-Haras,C-myc反义寡聚脱氧核苷酸对膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用[J].中华外科杂志，1996，34(1)：7-9.
[8]周同，宋长玲.细胞粘附分子研究的某些进展[J].生命科学，1994，6(3)：27-31., http://www.100md.com