胃癌及癌前病变中表皮生长因子受体和P21ras蛋白表达的研究
作者：兰春慧 张小雨 吴小翎
单位：兰春慧(第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科重庆 400042)；张小雨 吴小翎(重庆医科大学第二临床学院消化内科)
关键词：表皮生长因子受体；P21ras蛋白；胃肿瘤；癌前病变；免疫组化
中国现代医学杂志000709 探讨表皮生长因子受体(EGFR)和ras原癌基因产物—P21蛋白的表达与胃 癌生物学行为的关系及其在胃癌发生发展中的作用。方法：采用免疫组化S-P法。结果：P21 ras蛋白在慢性浅表性胃炎、异型增生、胃癌中阳性率分别为10%(2/10)，20%(4/20) ，52.5%(21/40)，差异有显著性(P<0.05)。EGFR在正常胃粘膜中均为阴性，EGFR在轻 、中、重度异型增生的阳性率分别为33.3%(3/9)，66.7%(4/6)，60%(3/5)。EGFR在早期和进 展 期胃癌中的阳性率分别为20%(2/10)和60%(18/30)，进展期胃癌EGFR的阳性率显著高于早期 胃癌(P<0.05)。结论：P21ras蛋白、EGFR参与了胃癌的发生、发展，两者阳性 的肿瘤可能具有更强的浸润与转移能力。
, 百拇医药
分类号 R735.2
EXPRESSION OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR AND P21ras RECEPTOR
IN GASTRIC CARCINOMAAND PRECANCEROUS LESIONS
Lan Chunhui, Zhang Xiaoyu, Wu Xiaoling
(Department of Gastroenterology, the Daping Hospital of
the Third Military Medical University, Chongqing 400042)
[Abstract] objective: To study the expression and significa nce of EGFR and P21ra s in the process of gastric carcinogensis. Methods: S-P immunoh istochemical met hod was used to examine the expression of EGFR and P21ras in 80 cases (20 chroni c superficial gastritis, 20 dysplasia, 40 gastric carcinomas). Results: The posi tive rates of P21ras in chronic superficial gastritis, dysplasia, gastric carcin oma were 10% (2/10), 20% (4/20), 52.5% (21/40) respectively (p<0.05). Normal gas tric mucosa was negative for EGFR. Increased expression of EGFR was found in sli ght, moderate and severe dysplasia EGFR expression was 33.3% (3/9), 66.7% (4/6) and 60% (3/5). Statistically, the positive rates of EGFR in advanced gastric car cinomas were significantly higher than those in early gastric carcinomas (8% vs 22.2%, P<0.05. 83.3% vs 44.4%, P<0.05). Conclusions: P21ras and EGFR might play important roles in the process of carcinogenesis of gastric mucosa and be used a s useful markers for the assessment of biological behavior of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words: Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR; the Product o f Ras-on cogene; P21ras; Pracancerous Leisions; Stomach Neoplasms; Immunohistochemistry
研究表明癌基因和生长因子受体系统之间存在本质的联系，它们可能 通过共同的信号传导通路刺激细胞不断增殖、分化，甚至癌变。本研究采用免疫组化S-P法 检测胃癌及癌前病变中ras原癌基因产物—P21蛋白及表皮生长因子受体(EGFR)的表达，探讨 它们在胃癌发生各阶段中的作用、相互关系及临床意义。
1 材料和方法
1.1 材料
收集重庆医科大学第二临床学院、第三军医大学大坪医院及西南医院1991～1996年手术切除 或内镜活检胃组织标本80例。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色，连续4μ m 切片，根据全国胃癌协作组制定的规范进行病理学分类。其中慢性浅表性胃炎20例，胃粘膜 轻度异型增生9例，中度异型增生6例，重度异型增生5例，早期胃癌10例，进展期胃癌30例 。
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1.2 方法
采用S-P法作P21ras蛋白及EGFR两种免疫组织化学检测。P21ras蛋白抗体、EGF R抗体和S-P免疫组化试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，即用型、操作按说明书进行。 用已知的阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
P21ras蛋白抗体及EGFR的阳性染色位于胞浆及胞膜，呈棕黄色颗粒状。由同一名医师 在400倍视野下任意选择5个视野，每个视野记数200个细胞，阳性细胞≥25%为阳性病例。
统计处理采用χ2检验。
2 结果
2.1 EGFR、P21ras蛋白在胃各级病变中的表达
, 百拇医药
表1 EGFR、P21ras蛋白在胃各级病变中的表达 例(% ) 组织
例数
EGFR1)阳性
P212)阳性
慢性浅表性胃炎(A)
20
0(0.0)
2(10.0)
异型增生(B)
20
10(50.0)
, 百拇医药
4(20.0)
a轻度
9
3(33.3)
1(11.1)
b中度
6
4(66.7)
1(16.6)
c重度
5
3(60.0)
2(40.0)
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胃癌(C)
40
20(50.0)
21(52.5)
d早期
10
2(20.0)
4(40.0)
e进展期
30
18(60.0)
17(56.7)
f有淋巴结转移
, 百拇医药
24
16(66.7)
15(62.5)
g无淋巴结转移
16
4(25.0)
6(37.5)
注：1)A∶B∶C P<0.05 a∶b,b∶c,c∶a P>0.05 d∶e P<0.05 f∶g P<0.05
2)A∶B∶C P<0.05 a∶b,b∶c,c∶a P>0.05 d∶e ，f∶g P<0.05
2.2 胃癌中EGFR与P21ras蛋白的相关性
, 百拇医药
1 重庆医科大学第二临床学院消化内科
表2 胃癌中EGFR与P21ras蛋白的相关性
EGFR
P21蛋白
合计
+
-
+
16
4
20
-
, http://www.100md.com 5
15
20
注：P<0.05 3 讨论
Ras原癌基因家族包括同源的Ha-ras、Ki-ras和N-ras，均编码分子量约为21KD结构相近的P21ras蛋白。P21ras蛋白位于细胞膜内侧，可结合GTP或GDP，前者是其活性形 式，能传递生长因子受体的刺激信号，促进细胞的增殖和分化。
目前研究多认为P21ras蛋白在正常胃粘膜和良性病中均有表达，但在癌中表达增强 [1]。本研究证实这一结果：慢性浅表性胃炎和异型增生中P21ras蛋白的阳性 率分别为10%和20%，重度异型增生和胃癌中P21ras蛋白表达明显增强，分别为40%和 52.5%。P21ras蛋白在胃各级病变中包括正常胃粘膜均有表达，反映了细胞在 不同时期 的增殖能力。P21ras蛋白随着异型增生和胃癌浸润程度的加重有表达阳性率增高的趋 势 ，可推测P21ras蛋白的表达在胃癌是一个早期事件，随访、监测P21ras蛋白阳 性表达的高危人群，结合其他指标可能有助于胃癌的早期诊断。
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本组资料还显示，P21ras蛋白不仅与胃癌浸润程度而且与胃癌的转移有关。P21r as蛋白在有淋巴结转移的胃癌中阳性率为62.5%，显著高于无淋巴结转移者(37.5%)。Deng [2]在基因水平上也证实了ras基因的突变与远处转移和生存率有相关性，表明P21 ras蛋白与胃癌恶性程度有关，可用于临床判断患者的预后。
EGFR是一分子量约为170KD的跨膜糖蛋白，分为胞外区、跨膜区、胞内区三部分，胞内区具 有酪氨酸激酶(tyrosine protein kinase TPK)活性，当EGFR通过多种方式激活自身的酪氨 酸激酶，使许多底物蛋白磷酸化，提供持续分裂信号到细胞内，引起细胞增殖、分化[ 3]。
目前发现许多肿瘤有EGFR的过度表达，我们的研究表明：慢性浅表性胃炎中EGFR无1例表达 ，在癌前病变中EGFR有较高的阳性率，随着异型增生程度的加重，阳性率呈上升趋势，胃粘 膜发生癌变后，阳性率有所下降，至进展期EGFR的阳性率又增高。癌前病变EGFR增高可能是 此阶段细胞增生-修复过程活跃，使其生理性分泌增加；也有学者认为某些异型增生的细胞 可能已出现基因变异，遗传学的改变使这些细胞具备了与肿瘤细胞类似的自泌功能，即自身 分泌EGFR。一旦粘膜发生癌变，EGFR的阳性率有所下降，其原因尚未阐明，可能与肿瘤的发 生、发展具有渐进性有关。随着肿瘤的不断生长，自身也能大量分泌EGFR，故进展期胃癌E GFR水平明显增高。EGFR在胃各级病变中的动态变化，提示它参与了胃癌的发生、发展。
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本组资料表明，有淋巴结或其他脏器转移的胃癌中EGFR阳性率显著高于无转移者，提示EGFR 的表达与肿瘤转移有关，对预后的判断有一定意义。
本研究同时检测了P21ras蛋白与EGFR的表达，发现两者在胃癌中表达基本一致，间接 证明了癌基因和生长因子受体之间存在联系，即EGFR激活后通过ras传导通路把信号传递给R AF-1(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)，再激活MAP[4](促分裂原活化蛋白激酶)，最后作 用于核内蛋白转录因子，在基因水平上调控细胞生长、增殖，使细胞恶变形成肿瘤。
本研究结果提示P21ras蛋白与EGFR参与了胃癌的发生、发展，检测P21ras蛋白 有助于早期诊断胃癌，联合检测P21ras蛋白与EGFR可判断预后。
参 考 文 献
, 百拇医药
1，Carneiro F,David I,Sunkel C,et al.Immunohistochemical analysis of ras oncogene P21 product in human gastric carcinoma and their adjacent mucosa.Pathol Res Pract,1992;188:263～272
2，Deng G,Liu X,Wang F,et al.Correlarion of mutation of on-cogene C-Ha-ra s at codon 12 with matastasis and survival of gastric cancer patients.Oncogene R es,1991;6:23～27
3，Boonstra J,Rijken P,Humbel B,et al.The epidermal growth factor.Cell Bi ology International,1995;19(5):413～430
4，Stoscheck CM,King LE Jr,et al.Role of epidermal growth factor in carci nogenesis.Cancer Res,1986;46:1030～1037, 百拇医药
单位：兰春慧(第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科重庆 400042)；张小雨 吴小翎(重庆医科大学第二临床学院消化内科)
关键词：表皮生长因子受体；P21ras蛋白；胃肿瘤；癌前病变；免疫组化
中国现代医学杂志000709 探讨表皮生长因子受体(EGFR)和ras原癌基因产物—P21蛋白的表达与胃 癌生物学行为的关系及其在胃癌发生发展中的作用。方法：采用免疫组化S-P法。结果：P21 ras蛋白在慢性浅表性胃炎、异型增生、胃癌中阳性率分别为10%(2/10)，20%(4/20) ，52.5%(21/40)，差异有显著性(P<0.05)。EGFR在正常胃粘膜中均为阴性，EGFR在轻 、中、重度异型增生的阳性率分别为33.3%(3/9)，66.7%(4/6)，60%(3/5)。EGFR在早期和进 展 期胃癌中的阳性率分别为20%(2/10)和60%(18/30)，进展期胃癌EGFR的阳性率显著高于早期 胃癌(P<0.05)。结论：P21ras蛋白、EGFR参与了胃癌的发生、发展，两者阳性 的肿瘤可能具有更强的浸润与转移能力。
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分类号 R735.2
EXPRESSION OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR AND P21ras RECEPTOR
IN GASTRIC CARCINOMAAND PRECANCEROUS LESIONS
Lan Chunhui, Zhang Xiaoyu, Wu Xiaoling
(Department of Gastroenterology, the Daping Hospital of
the Third Military Medical University, Chongqing 400042)
[Abstract] objective: To study the expression and significa nce of EGFR and P21ra s in the process of gastric carcinogensis. Methods: S-P immunoh istochemical met hod was used to examine the expression of EGFR and P21ras in 80 cases (20 chroni c superficial gastritis, 20 dysplasia, 40 gastric carcinomas). Results: The posi tive rates of P21ras in chronic superficial gastritis, dysplasia, gastric carcin oma were 10% (2/10), 20% (4/20), 52.5% (21/40) respectively (p<0.05). Normal gas tric mucosa was negative for EGFR. Increased expression of EGFR was found in sli ght, moderate and severe dysplasia EGFR expression was 33.3% (3/9), 66.7% (4/6) and 60% (3/5). Statistically, the positive rates of EGFR in advanced gastric car cinomas were significantly higher than those in early gastric carcinomas (8% vs 22.2%, P<0.05. 83.3% vs 44.4%, P<0.05). Conclusions: P21ras and EGFR might play important roles in the process of carcinogenesis of gastric mucosa and be used a s useful markers for the assessment of biological behavior of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words: Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR; the Product o f Ras-on cogene; P21ras; Pracancerous Leisions; Stomach Neoplasms; Immunohistochemistry
研究表明癌基因和生长因子受体系统之间存在本质的联系，它们可能 通过共同的信号传导通路刺激细胞不断增殖、分化，甚至癌变。本研究采用免疫组化S-P法 检测胃癌及癌前病变中ras原癌基因产物—P21蛋白及表皮生长因子受体(EGFR)的表达，探讨 它们在胃癌发生各阶段中的作用、相互关系及临床意义。
1 材料和方法
1.1 材料
收集重庆医科大学第二临床学院、第三军医大学大坪医院及西南医院1991～1996年手术切除 或内镜活检胃组织标本80例。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色，连续4μ m 切片，根据全国胃癌协作组制定的规范进行病理学分类。其中慢性浅表性胃炎20例，胃粘膜 轻度异型增生9例，中度异型增生6例，重度异型增生5例，早期胃癌10例，进展期胃癌30例 。
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1.2 方法
采用S-P法作P21ras蛋白及EGFR两种免疫组织化学检测。P21ras蛋白抗体、EGF R抗体和S-P免疫组化试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，即用型、操作按说明书进行。 用已知的阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
P21ras蛋白抗体及EGFR的阳性染色位于胞浆及胞膜，呈棕黄色颗粒状。由同一名医师 在400倍视野下任意选择5个视野，每个视野记数200个细胞，阳性细胞≥25%为阳性病例。
统计处理采用χ2检验。
2 结果
2.1 EGFR、P21ras蛋白在胃各级病变中的表达
, 百拇医药
表1 EGFR、P21ras蛋白在胃各级病变中的表达 例(% ) 组织
例数
EGFR1)阳性
P212)阳性
慢性浅表性胃炎(A)
20
0(0.0)
2(10.0)
异型增生(B)
20
10(50.0)
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4(20.0)
a轻度
9
3(33.3)
1(11.1)
b中度
6
4(66.7)
1(16.6)
c重度
5
3(60.0)
2(40.0)
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胃癌(C)
40
20(50.0)
21(52.5)
d早期
10
2(20.0)
4(40.0)
e进展期
30
18(60.0)
17(56.7)
f有淋巴结转移
, 百拇医药
24
16(66.7)
15(62.5)
g无淋巴结转移
16
4(25.0)
6(37.5)
注：1)A∶B∶C P<0.05 a∶b,b∶c,c∶a P>0.05 d∶e P<0.05 f∶g P<0.05
2)A∶B∶C P<0.05 a∶b,b∶c,c∶a P>0.05 d∶e ，f∶g P<0.05
2.2 胃癌中EGFR与P21ras蛋白的相关性
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1 重庆医科大学第二临床学院消化内科
表2 胃癌中EGFR与P21ras蛋白的相关性
EGFR
P21蛋白
合计
+
-
+
16
4
20
-
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15
20
注：P<0.05 3 讨论
Ras原癌基因家族包括同源的Ha-ras、Ki-ras和N-ras，均编码分子量约为21KD结构相近的P21ras蛋白。P21ras蛋白位于细胞膜内侧，可结合GTP或GDP，前者是其活性形 式，能传递生长因子受体的刺激信号，促进细胞的增殖和分化。
目前研究多认为P21ras蛋白在正常胃粘膜和良性病中均有表达，但在癌中表达增强 [1]。本研究证实这一结果：慢性浅表性胃炎和异型增生中P21ras蛋白的阳性 率分别为10%和20%，重度异型增生和胃癌中P21ras蛋白表达明显增强，分别为40%和 52.5%。P21ras蛋白在胃各级病变中包括正常胃粘膜均有表达，反映了细胞在 不同时期 的增殖能力。P21ras蛋白随着异型增生和胃癌浸润程度的加重有表达阳性率增高的趋 势 ，可推测P21ras蛋白的表达在胃癌是一个早期事件，随访、监测P21ras蛋白阳 性表达的高危人群，结合其他指标可能有助于胃癌的早期诊断。
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本组资料还显示，P21ras蛋白不仅与胃癌浸润程度而且与胃癌的转移有关。P21r as蛋白在有淋巴结转移的胃癌中阳性率为62.5%，显著高于无淋巴结转移者(37.5%)。Deng [2]在基因水平上也证实了ras基因的突变与远处转移和生存率有相关性，表明P21 ras蛋白与胃癌恶性程度有关，可用于临床判断患者的预后。
EGFR是一分子量约为170KD的跨膜糖蛋白，分为胞外区、跨膜区、胞内区三部分，胞内区具 有酪氨酸激酶(tyrosine protein kinase TPK)活性，当EGFR通过多种方式激活自身的酪氨 酸激酶，使许多底物蛋白磷酸化，提供持续分裂信号到细胞内，引起细胞增殖、分化[ 3]。
目前发现许多肿瘤有EGFR的过度表达，我们的研究表明：慢性浅表性胃炎中EGFR无1例表达 ，在癌前病变中EGFR有较高的阳性率，随着异型增生程度的加重，阳性率呈上升趋势，胃粘 膜发生癌变后，阳性率有所下降，至进展期EGFR的阳性率又增高。癌前病变EGFR增高可能是 此阶段细胞增生-修复过程活跃，使其生理性分泌增加；也有学者认为某些异型增生的细胞 可能已出现基因变异，遗传学的改变使这些细胞具备了与肿瘤细胞类似的自泌功能，即自身 分泌EGFR。一旦粘膜发生癌变，EGFR的阳性率有所下降，其原因尚未阐明，可能与肿瘤的发 生、发展具有渐进性有关。随着肿瘤的不断生长，自身也能大量分泌EGFR，故进展期胃癌E GFR水平明显增高。EGFR在胃各级病变中的动态变化，提示它参与了胃癌的发生、发展。
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本组资料表明，有淋巴结或其他脏器转移的胃癌中EGFR阳性率显著高于无转移者，提示EGFR 的表达与肿瘤转移有关，对预后的判断有一定意义。
本研究同时检测了P21ras蛋白与EGFR的表达，发现两者在胃癌中表达基本一致，间接 证明了癌基因和生长因子受体之间存在联系，即EGFR激活后通过ras传导通路把信号传递给R AF-1(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)，再激活MAP[4](促分裂原活化蛋白激酶)，最后作 用于核内蛋白转录因子，在基因水平上调控细胞生长、增殖，使细胞恶变形成肿瘤。
本研究结果提示P21ras蛋白与EGFR参与了胃癌的发生、发展，检测P21ras蛋白 有助于早期诊断胃癌，联合检测P21ras蛋白与EGFR可判断预后。
参 考 文 献
, 百拇医药
1，Carneiro F,David I,Sunkel C,et al.Immunohistochemical analysis of ras oncogene P21 product in human gastric carcinoma and their adjacent mucosa.Pathol Res Pract,1992;188:263～272
2，Deng G,Liu X,Wang F,et al.Correlarion of mutation of on-cogene C-Ha-ra s at codon 12 with matastasis and survival of gastric cancer patients.Oncogene R es,1991;6:23～27
3，Boonstra J,Rijken P,Humbel B,et al.The epidermal growth factor.Cell Bi ology International,1995;19(5):413～430
4，Stoscheck CM,King LE Jr,et al.Role of epidermal growth factor in carci nogenesis.Cancer Res,1986;46:1030～1037, 百拇医药