结核分枝杆菌三种检测方法的比较
作者：刘丽华 高作平 李雪梅
单位：030600 山西，晋中地区第一人民医院
关键词：
中华医学杂志000707 为比较荧光聚合酶链反应(PCR)、改良罗氏培养和金胺荧光染色三种方法对结核分枝杆菌检测的优缺点，我们应用三种方法对确诊为肺结核病患者的痰标本进行了检测比较。
一、对象与方法
1.对象：本院住院和门诊确诊的肺结核患者的痰标本104例，其中留取痰标本95份，体液标本9份(脑脊液2份、胸水4份、尿液3份)。非结核正常对照组痰标本15份。
2.试剂：(1)荧光PCR试剂：由中山医科大学达安基因诊断中心提供；(2)改良罗氏培养基：按常规方法制作；(3)金胺荧光染色：按常规方法制作。
3.方法：(1)荧光PCR反应：DNA提取和扩增及结果判断按说明书进行；(2)改良罗氏培养：按标准化规程进行；(3)金胺荧光染色：按常规操作。油镜下见3个以上菌体为阳性，观察300个视野未检出为阴性。
二、结果
痰液组：PCR法、培养法、金胺荧光染色法检出阳性数分别为96/75(78.1%)、96/35(36.5%)、96/25(26.0%)；体液组分别为9/4、9/2、9/2；对照组分别为0。比较检测结果，荧光PCR法阳性率为75.2%，较改良罗氏培养法高40%，较金胺荧光染色法高49.5%；15份对照标本用三种方法同时检测结果均为阴性。
三、讨论
在我国，菌阴结核(涂片、培养均阴性)约占70%，因此，提高结核菌检测的阳性率，是结核病早期诊断和早期治疗的前提。在治疗病人中，出现涂阳培阴现象，多数由于化疗使结核菌活力降低或成为死菌，而使培养出现假阴性，但荧光PCR检测为阳性，表明其检测不受治疗影响。比较三种检测方法，涂片法简单省时，但敏感性与特异性均不理想；改良罗氏培养法是传统方法，阳性率较涂片法高，但费时，不利于早期诊断。相比之下，荧光PCR检测具有敏感、特异和快速等特点，且由于完全闭管检测，极大地降低了传统PCR的扩增产物的污染，是很有实用价值的检测方法，其缺陷是不能检测药敏试验，对实验的操作有一定的要求。本结果表明，用荧光PCR检测结核菌其敏感性和特异性均优于改良罗氏培养法和金胺荧光染色法，是较理想的结核检测方法，适用于结核病的早期、快速诊断。
收稿日期：1999-05-06, 百拇医药
单位：030600 山西，晋中地区第一人民医院
关键词：
中华医学杂志000707 为比较荧光聚合酶链反应(PCR)、改良罗氏培养和金胺荧光染色三种方法对结核分枝杆菌检测的优缺点，我们应用三种方法对确诊为肺结核病患者的痰标本进行了检测比较。
一、对象与方法
1.对象：本院住院和门诊确诊的肺结核患者的痰标本104例，其中留取痰标本95份，体液标本9份(脑脊液2份、胸水4份、尿液3份)。非结核正常对照组痰标本15份。
2.试剂：(1)荧光PCR试剂：由中山医科大学达安基因诊断中心提供；(2)改良罗氏培养基：按常规方法制作；(3)金胺荧光染色：按常规方法制作。
3.方法：(1)荧光PCR反应：DNA提取和扩增及结果判断按说明书进行；(2)改良罗氏培养：按标准化规程进行；(3)金胺荧光染色：按常规操作。油镜下见3个以上菌体为阳性，观察300个视野未检出为阴性。
二、结果
痰液组：PCR法、培养法、金胺荧光染色法检出阳性数分别为96/75(78.1%)、96/35(36.5%)、96/25(26.0%)；体液组分别为9/4、9/2、9/2；对照组分别为0。比较检测结果，荧光PCR法阳性率为75.2%，较改良罗氏培养法高40%，较金胺荧光染色法高49.5%；15份对照标本用三种方法同时检测结果均为阴性。
三、讨论
在我国，菌阴结核(涂片、培养均阴性)约占70%，因此，提高结核菌检测的阳性率，是结核病早期诊断和早期治疗的前提。在治疗病人中，出现涂阳培阴现象，多数由于化疗使结核菌活力降低或成为死菌，而使培养出现假阴性，但荧光PCR检测为阳性，表明其检测不受治疗影响。比较三种检测方法，涂片法简单省时，但敏感性与特异性均不理想；改良罗氏培养法是传统方法，阳性率较涂片法高，但费时，不利于早期诊断。相比之下，荧光PCR检测具有敏感、特异和快速等特点，且由于完全闭管检测，极大地降低了传统PCR的扩增产物的污染，是很有实用价值的检测方法，其缺陷是不能检测药敏试验，对实验的操作有一定的要求。本结果表明，用荧光PCR检测结核菌其敏感性和特异性均优于改良罗氏培养法和金胺荧光染色法，是较理想的结核检测方法，适用于结核病的早期、快速诊断。
收稿日期：1999-05-06, 百拇医药