神经肽Y对实验性高胆固醇兔离体心脏冠状动脉血流的影响
作者：王景全 白小涓 于雅媛 Julien IE Hoffman
单位：王景全(沈阳 110001 中国医科大学附属一院循环内科)；白小涓(沈阳 110001 中国医科大学附属一院循环内科)；于雅媛(沈阳 110001 中国医科大学附属一院循环内科)；Julien IE Hoffman(Cardiovascular Research Institute University of California San Francisco, 94143, USA)
关键词：
中华医学杂志000724 有研究证明，高胆固醇能增加去甲肾上腺素对血管的敏感性[1]。作为与去甲肾上腺素共同存在于血管周围末梢神经的血管活性物质，在交感神经兴奋时与去甲肾上腺素一同释放的神经肽Y(neropeptideY, NPY)[2]是否也在高胆固醇状态下增加对血管的敏感性目前尚少见报道。为此，我们观察了NPY对高胆固醇状态下血管反应的变化。
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一、材料与方法
1.动物饲养：16只新西兰雄性兔，体重2.60～3.12 kg(2.65±0.32 kg)，随机分为2组，每组8只。一组给予正常饮食(100 g饲料丸含胆固醇0.04 g)，另一组给予0.5%高胆固醇饮食(饲料丸99.5 g加胆固醇0.5 g)。饲养4周。
2.离体灌注心脏模型的制备：每只兔经耳静脉给予苯巴比妥麻醉开胸后，在主动脉弓处切断主动脉，切断肺动脉主干和上下腔静脉及肺静脉后，把游离的心脏通过主动脉根部连接到Langendroff灌注系统中。灌注压保持在120 cm H2O，用改良的Kreb-Henseleit缓冲液(pH 7.40、NaCl 118 mmol/L、KCl 4.7 mmol/L、NaHCO3 25 mmol/L、MgCl2 1.2 mmol/L、CaCl2 2.5 mmol/L、KHPO4 1.2 mmol/L、Glouse 1.1 mmol/L，新鲜小牛白蛋白15 g/L，洗涤小牛血红细胞(压积30%)灌注。灌注液在95%O2及5%CO2混合气体下进行，温度在37℃。通过左心房，把气囊导管尖端放入左心室内，该导管通过压力转换器与多导生理记录仪相连(MT8P，Astro, Med, Inc.)测定左心室压，左心室舒张末压保持8 cm H2O水柱，心脏起搏220次/min。冠脉血流(单位ml/min)用电磁血流仪测定。NPY(Sigma公司)200 ng、500 ng、1 000 ng(分别溶入0.1 ml生理盐水中)快速注入冠状动脉内，测定冠脉血流的变化。(重复用药要求冠脉血流恢复在基线水平)。
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3.血浆胆固醇浓度的测定：血清总胆固醇由酶法测定(应用DART胆固醇试剂，Sigma公司)，用DACOS XL分析仪测得。
4.病理学检查：实验后取冠状动脉常规石蜡切片进行HE染色并进行冰冻切片的苏丹染色观察动脉内壁有无粥样硬化。
5.统计学处理：应用t检验进行统计学处理。
二、结果
1.两组胆固醇水平：新西兰兔经4周喂养后，高胆固醇饮食组与正常饮食组血胆固醇分别为25.5 mmol/L±2.8 mmol/L和0.8 mmol/L±0.3 mmol/L(P<0.01)。(两组兔喂养前血胆固醇分别为0.8 mmol/L±0.3 mmol/L和0.8 mmol/L±0.3 mmol/L)。2组兔主动脉病理检查均未发现动脉粥样硬化的改变。
2.NPY对冠状动脉血流的影响：NPY注入两组兔冠状动脉内，见兔冠状动脉血流均立即减少，但高胆固醇冠状动脉血流减少的程度与正常组比较差异有非常显著意义(表1)。在NPY应用过程中，未见左心室压有改变。
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表1 不同剂量神经肽Y对两组兔冠状动脉
血流的变化(
±s,%) 组别
动物数
冠状动脉血流
200 ng
500 ng
1 000 ng
正常组
8
10±6
16± 8
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32±18
高胆固醇组
8
50±20
56±24
62±28
P值
<0.05
<0.05
<0.05
注：200、500、1 000 ng为NPY剂量
三、讨论
, http://www.100md.com NPY具有强烈的血管收缩作用，特别是小动脉反应更为强烈。应用肾上腺素能受体阻断剂后，NPY的血管收缩作用依然存在，证明血管平滑肌上存在单独NPY受体[3]。Martin等[4]证实血栓素A2也部分介导NPY血管收缩作用。Tanaka等[5]应用ATP敏感钾通道阻滞剂后，NPY对血管的收缩性增强；而应用ATP敏感钾通道激活剂后，NPY对血管的收缩性减少。提示ATP敏感钾通道参与NPY的血管收缩。
有许多实验证明，在高胆固醇血症条件下血管内皮细胞功能受到损害。使舒张功能减退；收缩功能增强[6-8]。由于去甲肾上腺素和NPY的密切关系，人们很容易联想到NPY在高胆固醇血症条件下是否产生对血管反应的影响。本实验结果表明，NPY对高胆固醇血症组冠状动脉血流减少的程度与正常组比较有显著的差异，提示高胆固醇血症能增加血管NPY对血管反应的敏感性。最近，Tsunoda等[9]应用一氧化氮阻滞剂L-NAME前后并未见NPY对狗的冠状动脉收缩出现明显的改变，提示NPY的血管活性作用与一氧化氮无关。但在高胆固醇血症条件下，是否与一氧化氮活性减低有关还需要进一步探讨。
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参考文献
1，Rosendorff C, Hoffman J, Verrier ED, et al. Cholesterol potentiates the coronary artery responds to norepinephrine in anesthetized and concious dogs. Circ Res, 1981,48：320-329.
2，Clarke J, Benjamin N, Larkin S, et al. Interaction of neropeptide Y and the sympathetic nervous system in vascular control in man. Circulation, 1991,83：774-777.
3，付小锁，张景艳.神经肽Y及其作用，生理科学进展，1993，24：152-155.
, 百拇医药
4，Martin SE, Kuvin JT, Offenbacher S, et al. Neropeptide Y and coronary vasconstriction: role of thromboxane A2. Am J Physiol, 1992,263(4 pt 2)：H1045-1053.
5，Tanaka E, Mori H, Chujo M, et al. Coronary vasoconstrictive effects of neropeptide Y and their modulation by the ATP-sensitive potassium channel in anesthetized dogs. J Am Coll Cardiol, 1997,29：1380-1389.
6，Mathew V, Cannan CR, Miller VM, et al. Enchanced endothelin-mediated coronary vasoconstriction and attenuated basal nitric oxide activity in experimental hypercholesterolemia. Circulation. 1997,96：1930-1936.
, 百拇医药
7，Shiode N, Nakayama K, Morishima N, et al. Nitric oxide production by coronary conductance and resistance vessels in hypercholesterolemia patients. Am Heart J, 1996,131：1051-1057.
8，Matthys KE, Van Hove CE, Kockx MM, et al. Exposure to oxidized low-density lipoprotein in vivo enchances intimal thickening and selectively impaires endothelium-dependent dilation in rabbit. Cadiovasc Res, 1998,37：239-246.
9，Tsunoda R, Okumura K, Ishizaka H, et al. Influence of inhibition of endothelium-derved nitric oxide formation to effects of vasoconstrictor agents neropeptide Y, clonidine, and ergonovine on coronary vascular resistance. J Cardiovasc Pharmacol, 1994,24：87-94.
收稿日期：1999-12-17, 百拇医药
单位：王景全(沈阳 110001 中国医科大学附属一院循环内科)；白小涓(沈阳 110001 中国医科大学附属一院循环内科)；于雅媛(沈阳 110001 中国医科大学附属一院循环内科)；Julien IE Hoffman(Cardiovascular Research Institute University of California San Francisco, 94143, USA)
关键词：
中华医学杂志000724 有研究证明，高胆固醇能增加去甲肾上腺素对血管的敏感性[1]。作为与去甲肾上腺素共同存在于血管周围末梢神经的血管活性物质，在交感神经兴奋时与去甲肾上腺素一同释放的神经肽Y(neropeptideY, NPY)[2]是否也在高胆固醇状态下增加对血管的敏感性目前尚少见报道。为此，我们观察了NPY对高胆固醇状态下血管反应的变化。
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一、材料与方法
1.动物饲养：16只新西兰雄性兔，体重2.60～3.12 kg(2.65±0.32 kg)，随机分为2组，每组8只。一组给予正常饮食(100 g饲料丸含胆固醇0.04 g)，另一组给予0.5%高胆固醇饮食(饲料丸99.5 g加胆固醇0.5 g)。饲养4周。
2.离体灌注心脏模型的制备：每只兔经耳静脉给予苯巴比妥麻醉开胸后，在主动脉弓处切断主动脉，切断肺动脉主干和上下腔静脉及肺静脉后，把游离的心脏通过主动脉根部连接到Langendroff灌注系统中。灌注压保持在120 cm H2O，用改良的Kreb-Henseleit缓冲液(pH 7.40、NaCl 118 mmol/L、KCl 4.7 mmol/L、NaHCO3 25 mmol/L、MgCl2 1.2 mmol/L、CaCl2 2.5 mmol/L、KHPO4 1.2 mmol/L、Glouse 1.1 mmol/L，新鲜小牛白蛋白15 g/L，洗涤小牛血红细胞(压积30%)灌注。灌注液在95%O2及5%CO2混合气体下进行，温度在37℃。通过左心房，把气囊导管尖端放入左心室内，该导管通过压力转换器与多导生理记录仪相连(MT8P，Astro, Med, Inc.)测定左心室压，左心室舒张末压保持8 cm H2O水柱，心脏起搏220次/min。冠脉血流(单位ml/min)用电磁血流仪测定。NPY(Sigma公司)200 ng、500 ng、1 000 ng(分别溶入0.1 ml生理盐水中)快速注入冠状动脉内，测定冠脉血流的变化。(重复用药要求冠脉血流恢复在基线水平)。
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3.血浆胆固醇浓度的测定：血清总胆固醇由酶法测定(应用DART胆固醇试剂，Sigma公司)，用DACOS XL分析仪测得。
4.病理学检查：实验后取冠状动脉常规石蜡切片进行HE染色并进行冰冻切片的苏丹染色观察动脉内壁有无粥样硬化。
5.统计学处理：应用t检验进行统计学处理。
二、结果
1.两组胆固醇水平：新西兰兔经4周喂养后，高胆固醇饮食组与正常饮食组血胆固醇分别为25.5 mmol/L±2.8 mmol/L和0.8 mmol/L±0.3 mmol/L(P<0.01)。(两组兔喂养前血胆固醇分别为0.8 mmol/L±0.3 mmol/L和0.8 mmol/L±0.3 mmol/L)。2组兔主动脉病理检查均未发现动脉粥样硬化的改变。
2.NPY对冠状动脉血流的影响：NPY注入两组兔冠状动脉内，见兔冠状动脉血流均立即减少，但高胆固醇冠状动脉血流减少的程度与正常组比较差异有非常显著意义(表1)。在NPY应用过程中，未见左心室压有改变。
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表1 不同剂量神经肽Y对两组兔冠状动脉
血流的变化(
±s,%) 组别动物数
冠状动脉血流
200 ng
500 ng
1 000 ng
正常组
8
10±6
16± 8
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32±18
高胆固醇组
8
50±20
56±24
62±28
P值
<0.05
<0.05
<0.05
注：200、500、1 000 ng为NPY剂量
三、讨论
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有许多实验证明，在高胆固醇血症条件下血管内皮细胞功能受到损害。使舒张功能减退；收缩功能增强[6-8]。由于去甲肾上腺素和NPY的密切关系，人们很容易联想到NPY在高胆固醇血症条件下是否产生对血管反应的影响。本实验结果表明，NPY对高胆固醇血症组冠状动脉血流减少的程度与正常组比较有显著的差异，提示高胆固醇血症能增加血管NPY对血管反应的敏感性。最近，Tsunoda等[9]应用一氧化氮阻滞剂L-NAME前后并未见NPY对狗的冠状动脉收缩出现明显的改变，提示NPY的血管活性作用与一氧化氮无关。但在高胆固醇血症条件下，是否与一氧化氮活性减低有关还需要进一步探讨。
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参考文献
1，Rosendorff C, Hoffman J, Verrier ED, et al. Cholesterol potentiates the coronary artery responds to norepinephrine in anesthetized and concious dogs. Circ Res, 1981,48：320-329.
2，Clarke J, Benjamin N, Larkin S, et al. Interaction of neropeptide Y and the sympathetic nervous system in vascular control in man. Circulation, 1991,83：774-777.
3，付小锁，张景艳.神经肽Y及其作用，生理科学进展，1993，24：152-155.
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4，Martin SE, Kuvin JT, Offenbacher S, et al. Neropeptide Y and coronary vasconstriction: role of thromboxane A2. Am J Physiol, 1992,263(4 pt 2)：H1045-1053.
5，Tanaka E, Mori H, Chujo M, et al. Coronary vasoconstrictive effects of neropeptide Y and their modulation by the ATP-sensitive potassium channel in anesthetized dogs. J Am Coll Cardiol, 1997,29：1380-1389.
6，Mathew V, Cannan CR, Miller VM, et al. Enchanced endothelin-mediated coronary vasoconstriction and attenuated basal nitric oxide activity in experimental hypercholesterolemia. Circulation. 1997,96：1930-1936.
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7，Shiode N, Nakayama K, Morishima N, et al. Nitric oxide production by coronary conductance and resistance vessels in hypercholesterolemia patients. Am Heart J, 1996,131：1051-1057.
8，Matthys KE, Van Hove CE, Kockx MM, et al. Exposure to oxidized low-density lipoprotein in vivo enchances intimal thickening and selectively impaires endothelium-dependent dilation in rabbit. Cadiovasc Res, 1998,37：239-246.
9，Tsunoda R, Okumura K, Ishizaka H, et al. Influence of inhibition of endothelium-derved nitric oxide formation to effects of vasoconstrictor agents neropeptide Y, clonidine, and ergonovine on coronary vascular resistance. J Cardiovasc Pharmacol, 1994,24：87-94.
收稿日期：1999-12-17, 百拇医药