HPLC法则定小儿宣肺止嗽颗粒剂中大黄素的含量
作者：于和 李立程 肖文惠 史欣 唐世煜
单位：于和(天津市儿童医院药剂科 300074)；李立程(天津市南开医院药剂科)；肖文惠 史欣 唐世煜(天津市力生制药厂)
关键词：
中草药000723 小儿宣肺止嗽颗粒是由前胡、薄荷、鱼腥草和大黄等11味中药组成的复方制剂，具有宣肺清热、化痰止咳的功效，在临床上用于治疗小儿肺热咳嗽，上呼吸道感染及支气管所致的咳嗽不爽、痰黄粘稠、面赤唇红和大便干燥等症。我们建立了HPLC法测定其中有效成分大黄素的含量，结果准确，可靠，操作简便，可用于该产品的质量控制。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 美国Waters 515型泵，7725Ⅰ型手动进样器，486型紫外检测器，PC800数据处理软件；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：9608)，试剂为分析纯，水为重蒸馏水。
, 百拇医药
小儿宣肺止嗽颗粒，由天津市力生制药厂生产，批号：9608001，9608002，9608003。
2 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：甲醇-0.1%高氯酸(80∶20)，流速：1.2 mL/min，检测波长254 nm，柱温：室温。
3 溶液配制
3.1 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品约 5 mg，置 50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取 3 mL置10 mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2 供试品溶液的制备：取小儿宣肺止嗽颗粒约 5 g，精密称定，加水 20 mL，盐酸 1 mL，置水浴中，加热1 h，放冷，加氯仿 80 mL回流 3 h，用脱脂棉滤过，滤液置分液漏斗中，分取氯仿层，再用氯仿 20 mL洗涤容器和残渣，合并洗液与滤液，用水洗3次，每次 20 mL，弃去水洗液，取氯仿溶液置蒸发皿中，用少量氯仿洗涤容器，并入蒸发皿中，蒸干，残渣物用适量甲醇溶解并移入 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
, 百拇医药
测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每 1 g 含大黄素应不低于 0.052 mg。
4 实验方法与结果
4.1 线性关系的测定及标准曲线的绘制：精密量取大黄素对照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0 mL 分别置于 25 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各取20 μL 进样，测试，以对照品的峰高为纵坐标，对照品溶液的浓度(mg/mL) 为横坐标，绘制标准曲线。得回方程为：Y=6.4+4.6×104X，r=0.999 9，在浓度0.004～0.036 mg/ mL 范围内线性关系良好。
4.2 回收率试验：试验采用加样回收法：精密称取已知大黄素含量的供试品约 5 g，精密加入大黄素对照品适量，照供试品溶液的制备方法制备样品溶液，精密吸取 20 μL 进样，测试，测得大黄素的平均回收率为101.18%；RSD=3.38%(n=5)。
, 百拇医药
4.3 空白试验与供试品含量测定：取不含大黄素的空白样品适量，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下操作，精密吸取 20 μL 进样测试，结果表明：空白样品在大黄素出峰处无干扰峰，且流动相、溶剂(甲醇)对大黄素峰无干扰。
取3个批号(9608001、9608002、9608003)的小儿宣肺止嗽颗粒约 5 g，精密称定，照“供试品溶液制备”项下操作，分别精密吸取 20 μL ，测定，结果见表1。
4.4 精密度与稳定性试验：照含量测定方法，对同一供试品溶液进行多次测定(n=6)，考察其精密度RSD=0.011%；对同一供试品每小时测定一次，在 8 h内含量测定结果稳定。
表1 供试品测定结果(n=3) 供试品批号
峰面积
含量(mg/mL)
, 百拇医药
9608001
514 757
0.069 6
9608002
523 958
0.070 6
9608003
510 822
0.067 4
4.5 重复性试验：对同一批样品进行(n=6)含量测定，结果：x=0.061 4(mg/mL)；RSD=4.16%。
5 讨论
5.1 在本文的供试品溶液的制备方法和色谱条件下，小儿宣肺止嗽颗粒中的大黄素峰分离完好，辅料对主峰测定不干扰。方法灵敏度高，结果准确，可作为小儿宣肺止嗽颗粒的质量控制分析方法。
参考文献
1，洪筱坤，王智华。中成药，1996，(18)4：38
2，罗 文，江 萍。药物分析杂志，1989，(9)5：259
(1999-11-25收稿), http://www.100md.com
单位：于和(天津市儿童医院药剂科 300074)；李立程(天津市南开医院药剂科)；肖文惠 史欣 唐世煜(天津市力生制药厂)
关键词：
中草药000723 小儿宣肺止嗽颗粒是由前胡、薄荷、鱼腥草和大黄等11味中药组成的复方制剂，具有宣肺清热、化痰止咳的功效，在临床上用于治疗小儿肺热咳嗽，上呼吸道感染及支气管所致的咳嗽不爽、痰黄粘稠、面赤唇红和大便干燥等症。我们建立了HPLC法测定其中有效成分大黄素的含量，结果准确，可靠，操作简便，可用于该产品的质量控制。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 美国Waters 515型泵，7725Ⅰ型手动进样器，486型紫外检测器，PC800数据处理软件；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：9608)，试剂为分析纯，水为重蒸馏水。
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小儿宣肺止嗽颗粒，由天津市力生制药厂生产，批号：9608001，9608002，9608003。
2 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：甲醇-0.1%高氯酸(80∶20)，流速：1.2 mL/min，检测波长254 nm，柱温：室温。
3 溶液配制
3.1 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品约 5 mg，置 50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取 3 mL置10 mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2 供试品溶液的制备：取小儿宣肺止嗽颗粒约 5 g，精密称定，加水 20 mL，盐酸 1 mL，置水浴中，加热1 h，放冷，加氯仿 80 mL回流 3 h，用脱脂棉滤过，滤液置分液漏斗中，分取氯仿层，再用氯仿 20 mL洗涤容器和残渣，合并洗液与滤液，用水洗3次，每次 20 mL，弃去水洗液，取氯仿溶液置蒸发皿中，用少量氯仿洗涤容器，并入蒸发皿中，蒸干，残渣物用适量甲醇溶解并移入 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
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测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每 1 g 含大黄素应不低于 0.052 mg。
4 实验方法与结果
4.1 线性关系的测定及标准曲线的绘制：精密量取大黄素对照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0 mL 分别置于 25 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各取20 μL 进样，测试，以对照品的峰高为纵坐标，对照品溶液的浓度(mg/mL) 为横坐标，绘制标准曲线。得回方程为：Y=6.4+4.6×104X，r=0.999 9，在浓度0.004～0.036 mg/ mL 范围内线性关系良好。
4.2 回收率试验：试验采用加样回收法：精密称取已知大黄素含量的供试品约 5 g，精密加入大黄素对照品适量，照供试品溶液的制备方法制备样品溶液，精密吸取 20 μL 进样，测试，测得大黄素的平均回收率为101.18%；RSD=3.38%(n=5)。
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4.3 空白试验与供试品含量测定：取不含大黄素的空白样品适量，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下操作，精密吸取 20 μL 进样测试，结果表明：空白样品在大黄素出峰处无干扰峰，且流动相、溶剂(甲醇)对大黄素峰无干扰。
取3个批号(9608001、9608002、9608003)的小儿宣肺止嗽颗粒约 5 g，精密称定，照“供试品溶液制备”项下操作，分别精密吸取 20 μL ，测定，结果见表1。
4.4 精密度与稳定性试验：照含量测定方法，对同一供试品溶液进行多次测定(n=6)，考察其精密度RSD=0.011%；对同一供试品每小时测定一次，在 8 h内含量测定结果稳定。
表1 供试品测定结果(n=3) 供试品批号
峰面积
含量(mg/mL)
, 百拇医药
9608001
514 757
0.069 6
9608002
523 958
0.070 6
9608003
510 822
0.067 4
4.5 重复性试验：对同一批样品进行(n=6)含量测定，结果：x=0.061 4(mg/mL)；RSD=4.16%。
5 讨论
5.1 在本文的供试品溶液的制备方法和色谱条件下，小儿宣肺止嗽颗粒中的大黄素峰分离完好，辅料对主峰测定不干扰。方法灵敏度高，结果准确，可作为小儿宣肺止嗽颗粒的质量控制分析方法。
参考文献
1，洪筱坤，王智华。中成药，1996，(18)4：38
2，罗 文，江 萍。药物分析杂志，1989，(9)5：259
(1999-11-25收稿), http://www.100md.com