纤维素酶在补骨脂提取工艺中的应用
作者：安宏 徐颖 于喜水
单位：黑龙江医药工业研究所 哈尔滨 150040
关键词：
中草药000720 为考察纤维素酶破坏植物细胞壁后，对中药材香豆精成分的提取效果，我们选择补骨脂进行加酶组和未加酶组提取对比实验，采用薄层扫描法，以其有效成分补骨脂素作为考察指标。实验结果表明：加酶组比未加酶组提高补骨脂素收率23%(n=5)。
1 仪器与药品
岛津CS-930型薄扫描仪；硅胶GF254(青岛海洋化工厂)，乙醇、苯、乙酸乙酯均分析纯；补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所)；补骨脂药材为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，黑龙江省药材公司提供；纤维酶粗品(活力约2 000 U/g)，海林万力达集团公司提供。
2 实验方法结果
2.1 补骨脂药材提取的未加酶工艺(王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：316)：取补骨脂适量，加10 倍量50%乙醇，浸泡30 d。
2.2 补骨脂药材的酶提取工艺：本工艺是在未加酶工艺前，加了一步对药材的酶解处理。即每克药材以20 U的量加入纤维素酶，加入硫酸溶液调pH4.5，充分搅拌，置43 ℃恒温水浴放置3 h，放冷至室温后，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至中性，加乙醇适量，使浸泡液的醇浓度为50%，体积是药材的10倍量，浸泡30 d。
2.3 含量测定(同2.1文献，72页)。
2.3.1 供试品溶液的制备：将上述两种工艺的制备液分别滤过，洗涤药渣，滤液和洗液合并，回收乙醇，残渣用无水乙醇溶解，滤过，移置25 mL量瓶中，加无水乙醇到刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3.2 对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品用无水乙醇制成1 mL含0.533 3 mg的溶液。
2.3.3 薄层层析及扫描条件：精密吸取供试品溶液及对照品溶液各2 μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，用苯-乙酸乙酯(9∶1)展开后，于入254 nm紫外灯下观察定位，进行扫描，波长λs=240 nm，λR=400 nm，反射法线性扫描，(狭缝1 mm×6 mm，CH=1，Sx=3)则得供试品斑点与对照品斑点面积积分值，计算，即得。
2.4 收率与结果：见表1、2。
表1 加酶组与未加酶组补骨脂素收率(%) 加酶组
未加酶组
0.165 2
0.134 3
0.184 1
0.145 3
0.196 6
0.159 1
0.178 2
0.140 1
0.182 9
0.155 8
表2 两种不同工艺提取结果比较
加酶法
未加酶法
t值
P值
1
S1
S2
提取率
0.181 4
0.011
0.146 9
0.010
5.134 1
<0.001
t0.001(8)=5.041
结果表明：加酶组比未加酶组提高补骨脂素收率23%，两组间差异显著(P<0.001)。 (2000-01-07收稿), 百拇医药
单位：黑龙江医药工业研究所 哈尔滨 150040
关键词：
中草药000720 为考察纤维素酶破坏植物细胞壁后，对中药材香豆精成分的提取效果，我们选择补骨脂进行加酶组和未加酶组提取对比实验，采用薄层扫描法，以其有效成分补骨脂素作为考察指标。实验结果表明：加酶组比未加酶组提高补骨脂素收率23%(n=5)。
1 仪器与药品
岛津CS-930型薄扫描仪；硅胶GF254(青岛海洋化工厂)，乙醇、苯、乙酸乙酯均分析纯；补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所)；补骨脂药材为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，黑龙江省药材公司提供；纤维酶粗品(活力约2 000 U/g)，海林万力达集团公司提供。
2 实验方法结果
2.1 补骨脂药材提取的未加酶工艺(王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：316)：取补骨脂适量，加10 倍量50%乙醇，浸泡30 d。
2.2 补骨脂药材的酶提取工艺：本工艺是在未加酶工艺前，加了一步对药材的酶解处理。即每克药材以20 U的量加入纤维素酶，加入硫酸溶液调pH4.5，充分搅拌，置43 ℃恒温水浴放置3 h，放冷至室温后，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至中性，加乙醇适量，使浸泡液的醇浓度为50%，体积是药材的10倍量，浸泡30 d。
2.3 含量测定(同2.1文献，72页)。
2.3.1 供试品溶液的制备：将上述两种工艺的制备液分别滤过，洗涤药渣，滤液和洗液合并，回收乙醇，残渣用无水乙醇溶解，滤过，移置25 mL量瓶中，加无水乙醇到刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3.2 对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品用无水乙醇制成1 mL含0.533 3 mg的溶液。
2.3.3 薄层层析及扫描条件：精密吸取供试品溶液及对照品溶液各2 μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，用苯-乙酸乙酯(9∶1)展开后，于入254 nm紫外灯下观察定位，进行扫描，波长λs=240 nm，λR=400 nm，反射法线性扫描，(狭缝1 mm×6 mm，CH=1，Sx=3)则得供试品斑点与对照品斑点面积积分值，计算，即得。
2.4 收率与结果：见表1、2。
表1 加酶组与未加酶组补骨脂素收率(%) 加酶组
未加酶组
0.165 2
0.134 3
0.184 1
0.145 3
0.196 6
0.159 1
0.178 2
0.140 1
0.182 9
0.155 8
表2 两种不同工艺提取结果比较
加酶法
未加酶法
t值
P值
1S1
S2
提取率
0.181 4
0.011
0.146 9
0.010
5.134 1
<0.001
t0.001(8)=5.041
结果表明：加酶组比未加酶组提高补骨脂素收率23%，两组间差异显著(P<0.001)。 (2000-01-07收稿), 百拇医药