薄层扫描法测定远志中远志皂苷元的含量
作者：刘友平 万德光 黄荣 杨军宣
单位：成都中医药大学药学院 610075
关键词：远志；远志皂苷元；薄层扫描法
中草药000717摘 要 为研究远志中远志皂苷元的含量测定法，采用薄层扫描法进行测定。结果：远志皂苷元在1～5 μg之间线性关系良好，相关系数r=0.998 4，回收率为100.93 %，测定的RSD=3.14 %(n=5)。本法简便、准确、灵敏，重现性好，可用于远志及制剂的质量控制。
远志具有安神益智，祛痰，消肿之功，为一常用中药。关于远志质量标准《中华人民共和国药典》1995年版一部规定其来源为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志P. sibirica L.的干燥根，对药材性状、横切面显微组织结构作了描述，检查项进行了粉末热水浸提液泡沫试验，规定了总灰分限量〔1〕。显然，以此作为标准难以客观评价远志的内在质量，缺乏含量测定标准。本课题组对远志的质量标准进行了较为全面的研究。据文献报道，远志皂苷为镇静、祛痰的有效部位〔2〕，我们进行的药效学研究结果与此一致，故我们对远志皂苷进行了提取，从中分离鉴定了远志皂苷元，分离及鉴定结果另文报道。本文报道以远志皂苷元为对照品，采用薄层扫描法对远志进行含量测定研究结果。
, 百拇医药
1 仪器与材料
1.1 仪器：CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)；PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量点样毛细管(美国Drummond);BP211D电子分析天平(德国Sartorius)。
1.2 材料：远志由作者采集或购自不同产地，均经本校药用植物教研室万德光教授鉴定，见表1；远志皂苷元对照品，由作者自远志P. tenuifolia Willd.中分离，经光谱鉴定；薄层层析硅胶G60型(青岛海洋化工集团公司)；所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品的纯度检查：按质量标准用对照品研究的技术要求〔3〕，对远志皂苷元的纯度进行了检查，方法为取每1 mL含1 mg的对照品100 μL，点于硅胶G薄层板上，按2.4项下方法展开、显色，结果，除远志皂苷元斑点外，无其它斑点检出，该对照品符合含量测定要求。
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2.2 对照品溶液的制备：精密称取远志皂苷元对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 样品溶液的制备：取远志药材粗粉2.5 g，精密称定，置索氏提取器中，以乙醚提取2 h，取出滤纸筒，挥尽乙醚，再置索氏提取器中，甲醇40 mL冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4 h，将提取液浓缩至干，残渣加10%盐酸50 mL，置沸水浴中回流水解2 h，放冷，滤过，沉淀以蒸馏水洗至中性，将沉淀以甲醇溶解并转移至50 mL容量瓶中，漏斗及烧瓶以少量甲醇洗涤数次并入容量瓶，用甲醇定容至刻度备用。
2.4 薄层色谱条件：薄层板的制备：取硅胶G，加3倍量0.5 % CMC-Na水溶液，搅拌均匀后涂布于20 cm×20 cm的玻璃板上，厚度为0.5 mm，室温晾干，于105 ℃烘箱中活化1 h，置干燥器中保存备用。展开剂：氯仿-丙酮-正己烷-乙酸(9∶3∶0.3∶0.5)。展开方式：上行展开，展距10 cm。显色剂：8 %香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇液(7→10)按1∶10的比例配制而成。喷湿润，100 ℃～105 ℃烘至斑点显色清晰，远志皂苷元呈紫萝兰色，Rf值约为0.55。
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2.5 薄层扫描条件：采用反射法双波长锯齿扫描法，光束狭缝1.2 mm×1.2 mm，线性参数SX=3，灵敏度中等，最小峰宽0，最小峰面积为500，测定波长λS=570 nm，参比波长λR=700 nm。
2.6 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件展开显色，薄层扫描条件测定各斑点峰面积积分值。以对照品量(μg)为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，求得远志皂苷元的回归方程Y=20 687.062X-9 913.162，r=0.998 4。远志皂苷元在1.0～5.0 μg范围内，点样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，因标准曲线为一不通过原点的直线，故用外标两点法计算所测样品含量。
2.7 稳定性试验：精密吸取对照品溶液2.0，4.0 μL，供试品溶液2.0，4.0 μL，交叉点于同一硅胶G板上，按前述条件展开，显色，0，30，60 min扫描测定，计算样品中远志皂苷元含量为0.7719%，RSD=1.82%(n=3)。样品显色后1 h内测定，含量稳定。
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2.8 精密度试验：仪器的精密度试验：对薄层板上同一斑点连续测定5次，其峰面积积分值的平均值为39 155.64，RSD为1.75%。
同板精密度试验：精密吸取同一样品供试液4.0 μL，点于同一硅胶G薄层板上，共点5个点，展开，显色，扫描测定，其峰面积积分值的平均值为108 902.62，RSD为0.62%
异板精密度试验：精密吸取同一样品供试液2.0，4.0 μL，对照品溶液2.0，4.0 μL交叉点于硅胶G薄层板上，共点5张薄层板，展开，显色，扫描测定，计算样品中远志皂苷元含量，结果平均含量1.102 2%，RSD=4.65%(n=5)。
2.9 加样回收率试验：取已知含量的远志药材(含量为0.84%) 0.5 g，精密称定，精密加入远志皂苷对照品溶液6.0 mL(浓度为0.08 mg/mL)，按2.3项下方法制备样品溶液，酸水解后沉淀定容于10 mL容量瓶中，供测定，结果平均回收率为100.93%，RSD=3.14%(n=5)。
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2.10 样品的含量测定：精密吸取各样品溶液2.0，4.0 μL，对照品溶液2.0，4.0 μL，交叉点于同一硅胶G板上，展开，显色，扫描测定，计算各样品中远志皂苷元的含量，含量均以干燥品计，共测定了10个不同产地样品中远志皂苷元的含量，结果见表1。
表1 样品含量测定结果 样号
产地
品 种
含量(n=3)
(%)
RSD(%)
1
陕西合阳
P. tenuifolia Willd.
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0.72
2.07
2
陕西咸阳
P. tenuifolia Willd.
0.98
2.64
3
陕西蒲城
P. tenuifolia Willd.
0.94
3.15
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4
甘肃东乡
P. tenuifolia Willd.
0.57
2.97
5
甘肃民和
P. tenuifolia Willd.
0.67
3.45
6
山西忻州
, http://www.100md.com P. tenuifolia Willd.
0.84
3.89
7
山东
P. tenuifolia Willd.
0.59
4.03
8
河北安国
P. tenuifolia Willd.
0.65
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3.27
9
四川茂县
P. sibirica L.
0.62
3.15
10
甘肃临夏
P. sibirica L.
0.52
2.94
3 讨论
3.1 以远志皂苷元为对照品，采用薄层扫描法测定了10个不同产地药材样品中远志皂苷元的含量，方法准确，简便，灵敏，重现性好，可作为远志及其制剂的质量控制标准。
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3.2 样品溶液制备时，生药必须先以乙醚脱脂除去杂质，才能符合测定要求，否则由于脂溶性杂质干扰，影响测定结果。对生药的提取方法亦进行了考察，结果表明采用索氏连续提取较热回流和超声提取法完全，故对样品采用索氏提取。
3.3 所用显色剂为香草醛硫酸乙醇试液，对远志皂苷元显色专一性强，但该试液不稳定，应临用新配，避光低温保存，曾试用10%硫酸乙醇溶液作显色剂，但斑点显色后极不稳定且有背景干扰，故未采用。
国家“九.五”攻关课题第95-903-02-04
刘友平 女，博士，副研究员，硕士生导师。现在太极集团博士后工作站从事博士后研究工 作。主要研究方向：中药质量标准化及中药新药研究。先后承担国家自然科学基金项目、“九.五”攻关项目、国家新药基金项目、国家中医药管理局青年基金项目及省级科研项目 24项。获四川省科技进步三等奖2项，发表科研论文20余篇，参与编写著作2部。
参考文献
1，中华人民共和国药典.1995年版一部.广州：广东科技出版社，化学工业出版社，1995：132
2，徐国钧.常用中药材品种整理和质量研究.南方协作组.第一册.福州：福建科学技术出版社，1994：344
3，中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学 药理学 毒理学).39
(1999-02-10 收稿), http://www.100md.com
单位：成都中医药大学药学院 610075
关键词：远志；远志皂苷元；薄层扫描法
中草药000717摘 要 为研究远志中远志皂苷元的含量测定法，采用薄层扫描法进行测定。结果：远志皂苷元在1～5 μg之间线性关系良好，相关系数r=0.998 4，回收率为100.93 %，测定的RSD=3.14 %(n=5)。本法简便、准确、灵敏，重现性好，可用于远志及制剂的质量控制。
远志具有安神益智，祛痰，消肿之功，为一常用中药。关于远志质量标准《中华人民共和国药典》1995年版一部规定其来源为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志P. sibirica L.的干燥根，对药材性状、横切面显微组织结构作了描述，检查项进行了粉末热水浸提液泡沫试验，规定了总灰分限量〔1〕。显然，以此作为标准难以客观评价远志的内在质量，缺乏含量测定标准。本课题组对远志的质量标准进行了较为全面的研究。据文献报道，远志皂苷为镇静、祛痰的有效部位〔2〕，我们进行的药效学研究结果与此一致，故我们对远志皂苷进行了提取，从中分离鉴定了远志皂苷元，分离及鉴定结果另文报道。本文报道以远志皂苷元为对照品，采用薄层扫描法对远志进行含量测定研究结果。
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1 仪器与材料
1.1 仪器：CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)；PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量点样毛细管(美国Drummond);BP211D电子分析天平(德国Sartorius)。
1.2 材料：远志由作者采集或购自不同产地，均经本校药用植物教研室万德光教授鉴定，见表1；远志皂苷元对照品，由作者自远志P. tenuifolia Willd.中分离，经光谱鉴定；薄层层析硅胶G60型(青岛海洋化工集团公司)；所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品的纯度检查：按质量标准用对照品研究的技术要求〔3〕，对远志皂苷元的纯度进行了检查，方法为取每1 mL含1 mg的对照品100 μL，点于硅胶G薄层板上，按2.4项下方法展开、显色，结果，除远志皂苷元斑点外，无其它斑点检出，该对照品符合含量测定要求。
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2.2 对照品溶液的制备：精密称取远志皂苷元对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 样品溶液的制备：取远志药材粗粉2.5 g，精密称定，置索氏提取器中，以乙醚提取2 h，取出滤纸筒，挥尽乙醚，再置索氏提取器中，甲醇40 mL冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4 h，将提取液浓缩至干，残渣加10%盐酸50 mL，置沸水浴中回流水解2 h，放冷，滤过，沉淀以蒸馏水洗至中性，将沉淀以甲醇溶解并转移至50 mL容量瓶中，漏斗及烧瓶以少量甲醇洗涤数次并入容量瓶，用甲醇定容至刻度备用。
2.4 薄层色谱条件：薄层板的制备：取硅胶G，加3倍量0.5 % CMC-Na水溶液，搅拌均匀后涂布于20 cm×20 cm的玻璃板上，厚度为0.5 mm，室温晾干，于105 ℃烘箱中活化1 h，置干燥器中保存备用。展开剂：氯仿-丙酮-正己烷-乙酸(9∶3∶0.3∶0.5)。展开方式：上行展开，展距10 cm。显色剂：8 %香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇液(7→10)按1∶10的比例配制而成。喷湿润，100 ℃～105 ℃烘至斑点显色清晰，远志皂苷元呈紫萝兰色，Rf值约为0.55。
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2.5 薄层扫描条件：采用反射法双波长锯齿扫描法，光束狭缝1.2 mm×1.2 mm，线性参数SX=3，灵敏度中等，最小峰宽0，最小峰面积为500，测定波长λS=570 nm，参比波长λR=700 nm。
2.6 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件展开显色，薄层扫描条件测定各斑点峰面积积分值。以对照品量(μg)为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，求得远志皂苷元的回归方程Y=20 687.062X-9 913.162，r=0.998 4。远志皂苷元在1.0～5.0 μg范围内，点样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，因标准曲线为一不通过原点的直线，故用外标两点法计算所测样品含量。
2.7 稳定性试验：精密吸取对照品溶液2.0，4.0 μL，供试品溶液2.0，4.0 μL，交叉点于同一硅胶G板上，按前述条件展开，显色，0，30，60 min扫描测定，计算样品中远志皂苷元含量为0.7719%，RSD=1.82%(n=3)。样品显色后1 h内测定，含量稳定。
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2.8 精密度试验：仪器的精密度试验：对薄层板上同一斑点连续测定5次，其峰面积积分值的平均值为39 155.64，RSD为1.75%。
同板精密度试验：精密吸取同一样品供试液4.0 μL，点于同一硅胶G薄层板上，共点5个点，展开，显色，扫描测定，其峰面积积分值的平均值为108 902.62，RSD为0.62%
异板精密度试验：精密吸取同一样品供试液2.0，4.0 μL，对照品溶液2.0，4.0 μL交叉点于硅胶G薄层板上，共点5张薄层板，展开，显色，扫描测定，计算样品中远志皂苷元含量，结果平均含量1.102 2%，RSD=4.65%(n=5)。
2.9 加样回收率试验：取已知含量的远志药材(含量为0.84%) 0.5 g，精密称定，精密加入远志皂苷对照品溶液6.0 mL(浓度为0.08 mg/mL)，按2.3项下方法制备样品溶液，酸水解后沉淀定容于10 mL容量瓶中，供测定，结果平均回收率为100.93%，RSD=3.14%(n=5)。
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2.10 样品的含量测定：精密吸取各样品溶液2.0，4.0 μL，对照品溶液2.0，4.0 μL，交叉点于同一硅胶G板上，展开，显色，扫描测定，计算各样品中远志皂苷元的含量，含量均以干燥品计，共测定了10个不同产地样品中远志皂苷元的含量，结果见表1。
表1 样品含量测定结果 样号
产地
品 种
含量(n=3)
(%)
RSD(%)
1
陕西合阳
P. tenuifolia Willd.
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0.72
2.07
2
陕西咸阳
P. tenuifolia Willd.
0.98
2.64
3
陕西蒲城
P. tenuifolia Willd.
0.94
3.15
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4
甘肃东乡
P. tenuifolia Willd.
0.57
2.97
5
甘肃民和
P. tenuifolia Willd.
0.67
3.45
6
山西忻州
, http://www.100md.com P. tenuifolia Willd.
0.84
3.89
7
山东
P. tenuifolia Willd.
0.59
4.03
8
河北安国
P. tenuifolia Willd.
0.65
, http://www.100md.com
3.27
9
四川茂县
P. sibirica L.
0.62
3.15
10
甘肃临夏
P. sibirica L.
0.52
2.94
3 讨论
3.1 以远志皂苷元为对照品，采用薄层扫描法测定了10个不同产地药材样品中远志皂苷元的含量，方法准确，简便，灵敏，重现性好，可作为远志及其制剂的质量控制标准。
, 百拇医药
3.2 样品溶液制备时，生药必须先以乙醚脱脂除去杂质，才能符合测定要求，否则由于脂溶性杂质干扰，影响测定结果。对生药的提取方法亦进行了考察，结果表明采用索氏连续提取较热回流和超声提取法完全，故对样品采用索氏提取。
3.3 所用显色剂为香草醛硫酸乙醇试液，对远志皂苷元显色专一性强，但该试液不稳定，应临用新配，避光低温保存，曾试用10%硫酸乙醇溶液作显色剂，但斑点显色后极不稳定且有背景干扰，故未采用。
国家“九.五”攻关课题第95-903-02-04
刘友平 女，博士，副研究员，硕士生导师。现在太极集团博士后工作站从事博士后研究工 作。主要研究方向：中药质量标准化及中药新药研究。先后承担国家自然科学基金项目、“九.五”攻关项目、国家新药基金项目、国家中医药管理局青年基金项目及省级科研项目 24项。获四川省科技进步三等奖2项，发表科研论文20余篇，参与编写著作2部。
参考文献
1，中华人民共和国药典.1995年版一部.广州：广东科技出版社，化学工业出版社，1995：132
2，徐国钧.常用中药材品种整理和质量研究.南方协作组.第一册.福州：福建科学技术出版社，1994：344
3，中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学 药理学 毒理学).39
(1999-02-10 收稿), http://www.100md.com