纳洛酮对小白鼠缺氧时呼吸抑制反转和低氧存活时间影响及临床价值的探讨
作者：张佩斌 陈荣华
单位：(210011 南京医科大学第二附属医院 江苏省儿童保健研究中心)
关键词：呼吸抑制；β-内啡肽；纳洛酮；低氧存活时间
江苏医药000812 【摘要】 目的 采用小白鼠缺氧模型对β-内啡肽(β-EP)在小白鼠缺氧中的作用、注射纳洛酮(NLX)对缺氧小白鼠呼吸抑制的反转及对低氧存活时间(HST)的影响进行研究，以探讨新生儿窒息时临床使用NLX的指针及时机。方法 小白鼠分成5组，第1、2组进行耗氧试验，第3～5组进行HST试验。结果 小白鼠经缺氧处理后耗氧时间比常氧状态下的耗氧时间延长，β-EP含量也明显升高，而注射NLX后，缺氧处理后出现的耗氧时间延长消失；经缺氧处理后注射NLX小鼠的HST比注射生理盐水小鼠的HST明显缩短。结论 NLX能阻断缺氧后释放的β-EP，使呼吸抑制反转，但使小鼠的HST缩短，说明新生儿窒息时应纠正β-EP释放所引起的呼吸抑制、低体温等不良影响，但使用NLX时需清除呼吸道保证给氧，否则，对新生儿有不利影响。
, 百拇医药
Discussion on the effect of NLX in the reverse of respiratory depression and in the shortening of HST of mice in the hypoxic conditioning and the clinical value of NLX
ZHANG Peibin，CHEN Ronghua.
(The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，and Children Health Care Research Center in Jiangsu Province，Nanjing 210011)
【Abstract】 Objective In order to determine the scale and time of naloxone (NLX) treatment in neonatal asphyxia，the study was carried out using mice hypoxic models，about the effects of β-endorphin (β-EP)，the reverse of respiratory depression and the change of hypoxic survival time (HST) in mice injected with NLX in the hypoxic condition.Methods The mice were divided into 5 groups.The first two groups received oxygen exhausting test，while the other three groups tested hypoxic survival time.Results Oxygen exhausting time of mice was significantly longer and the levels of β-EP were significantly higher under hypoxic condition than under sham condition，but the prolonged oxygen exhausting time of mice under the hypoxic condition disappeared after injection of NLX；there was a significant decrease in HST in the NLX-treated mice compared to those in the saline-treated mice.Conclusion NLX can block the effect of β-EP released，reverse the respiratory depression，and shorten the HST under hypoxic condition.The results suggested that the respiratory depression and lower body temperature caused by β-EP release should be corrected in neonatal asphyxia.NLX can be used in neonatal asphyxia on condition that the respiratory trace has been cleaned.Otherwise，it might be adverse to the newborn.
, 百拇医药
【Key words】Respiratory depression β-endorphin Naloxone Hypoxic survival time
新生儿窒息时的呼吸抑制或无呼吸与血液中内啡肽、主要是β-内啡肽(β-EP)参与了胎儿低氧时的通气抑制有密切关系，而阿片受体拮抗剂纳洛酮(NLX)能使低氧时通气抑制反转，因此，美国儿科学会推荐新生儿窒息时使用NLX，但有报道NLX对挽救窒息新生儿无明显效果。为了探讨β-EP在新生儿窒息中的作用及NLX治疗新生儿窒息的指征，我们对此进行了实验研究。
材料与方法
一、材料：日龄20～25天的小白鼠42只，体重25.2±3.7克，随机分成5组，第1组11只，第2组10只，第3～5组7只。第1、2组为耗氧试验组，第3～5组为低氧存活试验组。
二、方法：第1、2组小鼠先要测定常氧状态下的耗氧时间，方法为：将小鼠放在测定耗氧量装置瓶中，加塞加水封口后测定水柱上升到达标记时的准确时间。再测定缺氧状态下的耗氧时间，方法是：将小白鼠进行缺氧处理后测定的耗氧时间。缺氧处理的方法是：将小鼠放入150 ml广口瓶中，加塞加水封口后观察小鼠出现呼吸抑制(呼吸变深、变慢)约10分钟后恢复常氧。经缺氧处理后，第1组小鼠经尾静脉注射生理盐水(NS)，第2组小鼠经尾静脉注射25% NLX，剂量均为0.1 ml/10 g，5分钟后再测定耗氧时间即为缺氧状态下的耗氧时间。
, 百拇医药
第3～5组小鼠测定低氧存活时间，方法是：将小鼠放入150 ml广口瓶中，加塞加水封口后测定小鼠呼吸停止死亡的时间。该试验前，第3组小鼠注射NS，第4组小鼠经缺氧处理后注射NS，第5组小鼠经缺氧处理后注射25%NLX，剂量同上。
对第1组小鼠于测定常氧状态下的耗氧时间前和缺氧状态下的耗氧时间后用毛细吸管采取小鼠眼后静脉丛血0.5 ml，放入加有1%肝素抗凝和抑肽酶(500 U/ml)的塑料指形管中，均匀，低温离心取血浆于-20℃保存待测。测定采用第二军医大学神经生物教研室提供的β-EP放免药盒，用顺序饱和加样法经SN682型放射免疫γ-计数器绘制标准曲线测定样本β-EP含量。
三、统计学处理：采用配对资料t检验和方差分析方法。
结 果
一、第1组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间及β-EP含量(见表1)：
, 百拇医药
表1 第1组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间及β-EP含量
例数
常氧状态
缺氧状态
t值
P值
耗氧时间(分)
11
5.04±0.71
5.78±0.85
2.24
<0.05
, 百拇医药
β-EP(pg/ml)
11
28.99±7.62
69.91±13.20
5.8
<0.001
表1示，小鼠经缺氧处理后耗氧时间明显长于常氧状态时的耗氧时间，β-EP含量也明显升高。说明缺氧后引起β-EP释放，呼吸抑制，耗氧减少。
二、第2组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间(见表2)：表2 第2组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间
例数
耗氧时间(分)
, 百拇医药
t值
P值
常氧状态
10
4.85±0.53
0.33
>0.05
缺氧状态
10
4.86±0.45
表2示，小鼠经缺氧处理、注射NLX后，耗氧时间与常氧状态时的耗氧时间无明显差异。说明缺氧后释放的β-EP被NLX阻断，呼吸抑制被反转，因此，耗氧时间不减少。
, 百拇医药
三、第3～5组小鼠低氧存活时间(见表3)：表3 第3～5组小鼠的低氧存活时间(HST) 组别
例数
HST(分)
F值
P值
第3组
7
21.57±4.12
7.85
<0.01
第4组
7
, 百拇医药
20.50±4.04
第5组
7
14.30±2.08*
*第5组小鼠的HST与第3、4组小鼠的HST有显著差异
表3示，小鼠经缺氧处理、注射NS后的HST与常氧状态注射NS的小鼠HST无显著差异，而经缺氧处理、注射NLX后的HST比其它两组的HST明显缩短。
讨 论
新生儿窒息是新生儿主要死亡原因之一，因产前胎儿宫内缺氧和产时不利因素使胎儿缺氧，造成胎儿出生后呼吸抑制或无呼吸等新生儿窒息症状。有人发现内源性阿片肽、主要是β-EP参与了胎儿低氧时的通气抑制，其可能作用机制是缺氧直接作用于延髓的吸气神经元或间接作用于脑桥等神经中枢，引起β-EP释放。阿片受体拮抗剂NLX可抑制β-EP对呼吸的抑制[1]。从表1和表2的结果表明小鼠经缺氧处理后释放β-EP，使血浆的β-EP含量较缺氧处理前明显升高，使小鼠的耗氧时间明显延长，而经缺氧处理、注射NLX后的小鼠耗氧时间与缺氧处理前的耗氧时间无显著差异，说明缺氧后释放的β-EP被NLX阻断，β-EP引起的呼吸抑制被NLX反转。Laungani等[2]研究表明，1分钟Apgar评分与脑脊液中的β-EP含量呈高度负相关，也说明β-EP与新生儿窒息的密切关系。因此，β-EP受体拮抗剂NLX用于治疗新生儿窒息得到美国儿科学会的推荐。
, http://www.100md.com
然而，有文献报道，NLX对治疗新生儿窒息、特别是重度窒息的新生儿无明显效果[3]。临床上使用NLX治疗也发现呼吸抑制反转后有“反跳”现象，原因不明。从我们的研究结果看出：缺氧后释放的β-EP对呼吸抑制被NLX阻断，呼吸建立，但HST反而缩短，原因是小鼠仍处在低氧的环境中。有报道认为体温明显影响氧气吸入的多少，对大多数安静的动物，体温每改变1℃，氧气吸入变化11%，低体温对缺氧动物是有利的，是动物对缺氧状况的正常适应性反应[4]。临床上发现窒息新生儿、尤其是重度窒息的新生儿常有低体温，甚至体温不升。因此，Wood等[4]推测低氧刺激中枢释放大量β-EP扩张外周血管及抑制活动导致低体温。表3的结果提示缺氧处理后HST比常氧状态下的HST有缩短趋势，虽无显著差异也说明β-EP的释放是一种正常的保护性反应，但它引起的呼吸抑制及低体温等不良反应导致小鼠的HST没有象所推测的那样延长，这与Mayfield等[5]报道的结果不完全一致。本文结果提示新生儿窒息时应纠正β-EP释放所引起的呼吸抑制及低体温等不良影响，但使用NLX时需清除呼吸道保证给氧，对呼吸道不通畅、尤其是胎粪阻塞呼吸道的重度窒息不宜使用，否则会引起相反作用。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Chernick V，Craig RJ.Naloxone reverses neonatal depression caused by fatal asphyxia.Science，1982，216：1252-1253.
2，Laungani SG，Delivona B，Gintzler A，et al.Apgar scores and cerebrospinal fluid beta-endorphinlike immunocractivity during the first day of life.Am J Dis Child，1985，139：403-404.
3，Chernick V，Manfreda J，Dc＇Booy V，et al.Clinical trial of naloxone in birth asphyxia.J Pediatr，1988，113：519-525.
4，Wood SC.Interactions between hypoxia and hypothermia.Annu Rev Physiol，1991，53：71-85.
5，Mayfield KP，D′ Alecy LG.Role of endogenous opioid peptides in the acute adaptation to hypoxia.Brain Res，1992，582：226-231.
收稿：1999-06-23 修回：2000-01-20, 百拇医药
单位：(210011 南京医科大学第二附属医院 江苏省儿童保健研究中心)
关键词：呼吸抑制；β-内啡肽；纳洛酮；低氧存活时间
江苏医药000812 【摘要】 目的 采用小白鼠缺氧模型对β-内啡肽(β-EP)在小白鼠缺氧中的作用、注射纳洛酮(NLX)对缺氧小白鼠呼吸抑制的反转及对低氧存活时间(HST)的影响进行研究，以探讨新生儿窒息时临床使用NLX的指针及时机。方法 小白鼠分成5组，第1、2组进行耗氧试验，第3～5组进行HST试验。结果 小白鼠经缺氧处理后耗氧时间比常氧状态下的耗氧时间延长，β-EP含量也明显升高，而注射NLX后，缺氧处理后出现的耗氧时间延长消失；经缺氧处理后注射NLX小鼠的HST比注射生理盐水小鼠的HST明显缩短。结论 NLX能阻断缺氧后释放的β-EP，使呼吸抑制反转，但使小鼠的HST缩短，说明新生儿窒息时应纠正β-EP释放所引起的呼吸抑制、低体温等不良影响，但使用NLX时需清除呼吸道保证给氧，否则，对新生儿有不利影响。
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Discussion on the effect of NLX in the reverse of respiratory depression and in the shortening of HST of mice in the hypoxic conditioning and the clinical value of NLX
ZHANG Peibin，CHEN Ronghua.
(The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，and Children Health Care Research Center in Jiangsu Province，Nanjing 210011)
【Abstract】 Objective In order to determine the scale and time of naloxone (NLX) treatment in neonatal asphyxia，the study was carried out using mice hypoxic models，about the effects of β-endorphin (β-EP)，the reverse of respiratory depression and the change of hypoxic survival time (HST) in mice injected with NLX in the hypoxic condition.Methods The mice were divided into 5 groups.The first two groups received oxygen exhausting test，while the other three groups tested hypoxic survival time.Results Oxygen exhausting time of mice was significantly longer and the levels of β-EP were significantly higher under hypoxic condition than under sham condition，but the prolonged oxygen exhausting time of mice under the hypoxic condition disappeared after injection of NLX；there was a significant decrease in HST in the NLX-treated mice compared to those in the saline-treated mice.Conclusion NLX can block the effect of β-EP released，reverse the respiratory depression，and shorten the HST under hypoxic condition.The results suggested that the respiratory depression and lower body temperature caused by β-EP release should be corrected in neonatal asphyxia.NLX can be used in neonatal asphyxia on condition that the respiratory trace has been cleaned.Otherwise，it might be adverse to the newborn.
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【Key words】Respiratory depression β-endorphin Naloxone Hypoxic survival time
新生儿窒息时的呼吸抑制或无呼吸与血液中内啡肽、主要是β-内啡肽(β-EP)参与了胎儿低氧时的通气抑制有密切关系，而阿片受体拮抗剂纳洛酮(NLX)能使低氧时通气抑制反转，因此，美国儿科学会推荐新生儿窒息时使用NLX，但有报道NLX对挽救窒息新生儿无明显效果。为了探讨β-EP在新生儿窒息中的作用及NLX治疗新生儿窒息的指征，我们对此进行了实验研究。
材料与方法
一、材料：日龄20～25天的小白鼠42只，体重25.2±3.7克，随机分成5组，第1组11只，第2组10只，第3～5组7只。第1、2组为耗氧试验组，第3～5组为低氧存活试验组。
二、方法：第1、2组小鼠先要测定常氧状态下的耗氧时间，方法为：将小鼠放在测定耗氧量装置瓶中，加塞加水封口后测定水柱上升到达标记时的准确时间。再测定缺氧状态下的耗氧时间，方法是：将小白鼠进行缺氧处理后测定的耗氧时间。缺氧处理的方法是：将小鼠放入150 ml广口瓶中，加塞加水封口后观察小鼠出现呼吸抑制(呼吸变深、变慢)约10分钟后恢复常氧。经缺氧处理后，第1组小鼠经尾静脉注射生理盐水(NS)，第2组小鼠经尾静脉注射25% NLX，剂量均为0.1 ml/10 g，5分钟后再测定耗氧时间即为缺氧状态下的耗氧时间。
, 百拇医药
第3～5组小鼠测定低氧存活时间，方法是：将小鼠放入150 ml广口瓶中，加塞加水封口后测定小鼠呼吸停止死亡的时间。该试验前，第3组小鼠注射NS，第4组小鼠经缺氧处理后注射NS，第5组小鼠经缺氧处理后注射25%NLX，剂量同上。
对第1组小鼠于测定常氧状态下的耗氧时间前和缺氧状态下的耗氧时间后用毛细吸管采取小鼠眼后静脉丛血0.5 ml，放入加有1%肝素抗凝和抑肽酶(500 U/ml)的塑料指形管中，均匀，低温离心取血浆于-20℃保存待测。测定采用第二军医大学神经生物教研室提供的β-EP放免药盒，用顺序饱和加样法经SN682型放射免疫γ-计数器绘制标准曲线测定样本β-EP含量。
三、统计学处理：采用配对资料t检验和方差分析方法。
结 果
一、第1组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间及β-EP含量(见表1)：
, 百拇医药
表1 第1组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间及β-EP含量
例数
常氧状态
缺氧状态
t值
P值
耗氧时间(分)
11
5.04±0.71
5.78±0.85
2.24
<0.05
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β-EP(pg/ml)
11
28.99±7.62
69.91±13.20
5.8
<0.001
表1示，小鼠经缺氧处理后耗氧时间明显长于常氧状态时的耗氧时间，β-EP含量也明显升高。说明缺氧后引起β-EP释放，呼吸抑制，耗氧减少。
二、第2组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间(见表2)：表2 第2组小鼠常氧和缺氧状态下的耗氧时间
例数
耗氧时间(分)
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t值
P值
常氧状态
10
4.85±0.53
0.33
>0.05
缺氧状态
10
4.86±0.45
表2示，小鼠经缺氧处理、注射NLX后，耗氧时间与常氧状态时的耗氧时间无明显差异。说明缺氧后释放的β-EP被NLX阻断，呼吸抑制被反转，因此，耗氧时间不减少。
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三、第3～5组小鼠低氧存活时间(见表3)：表3 第3～5组小鼠的低氧存活时间(HST) 组别
例数
HST(分)
F值
P值
第3组
7
21.57±4.12
7.85
<0.01
第4组
7
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20.50±4.04
第5组
7
14.30±2.08*
*第5组小鼠的HST与第3、4组小鼠的HST有显著差异
表3示，小鼠经缺氧处理、注射NS后的HST与常氧状态注射NS的小鼠HST无显著差异，而经缺氧处理、注射NLX后的HST比其它两组的HST明显缩短。
讨 论
新生儿窒息是新生儿主要死亡原因之一，因产前胎儿宫内缺氧和产时不利因素使胎儿缺氧，造成胎儿出生后呼吸抑制或无呼吸等新生儿窒息症状。有人发现内源性阿片肽、主要是β-EP参与了胎儿低氧时的通气抑制，其可能作用机制是缺氧直接作用于延髓的吸气神经元或间接作用于脑桥等神经中枢，引起β-EP释放。阿片受体拮抗剂NLX可抑制β-EP对呼吸的抑制[1]。从表1和表2的结果表明小鼠经缺氧处理后释放β-EP，使血浆的β-EP含量较缺氧处理前明显升高，使小鼠的耗氧时间明显延长，而经缺氧处理、注射NLX后的小鼠耗氧时间与缺氧处理前的耗氧时间无显著差异，说明缺氧后释放的β-EP被NLX阻断，β-EP引起的呼吸抑制被NLX反转。Laungani等[2]研究表明，1分钟Apgar评分与脑脊液中的β-EP含量呈高度负相关，也说明β-EP与新生儿窒息的密切关系。因此，β-EP受体拮抗剂NLX用于治疗新生儿窒息得到美国儿科学会的推荐。
, http://www.100md.com
然而，有文献报道，NLX对治疗新生儿窒息、特别是重度窒息的新生儿无明显效果[3]。临床上使用NLX治疗也发现呼吸抑制反转后有“反跳”现象，原因不明。从我们的研究结果看出：缺氧后释放的β-EP对呼吸抑制被NLX阻断，呼吸建立，但HST反而缩短，原因是小鼠仍处在低氧的环境中。有报道认为体温明显影响氧气吸入的多少，对大多数安静的动物，体温每改变1℃，氧气吸入变化11%，低体温对缺氧动物是有利的，是动物对缺氧状况的正常适应性反应[4]。临床上发现窒息新生儿、尤其是重度窒息的新生儿常有低体温，甚至体温不升。因此，Wood等[4]推测低氧刺激中枢释放大量β-EP扩张外周血管及抑制活动导致低体温。表3的结果提示缺氧处理后HST比常氧状态下的HST有缩短趋势，虽无显著差异也说明β-EP的释放是一种正常的保护性反应，但它引起的呼吸抑制及低体温等不良反应导致小鼠的HST没有象所推测的那样延长，这与Mayfield等[5]报道的结果不完全一致。本文结果提示新生儿窒息时应纠正β-EP释放所引起的呼吸抑制及低体温等不良影响，但使用NLX时需清除呼吸道保证给氧，对呼吸道不通畅、尤其是胎粪阻塞呼吸道的重度窒息不宜使用，否则会引起相反作用。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Chernick V，Craig RJ.Naloxone reverses neonatal depression caused by fatal asphyxia.Science，1982，216：1252-1253.
2，Laungani SG，Delivona B，Gintzler A，et al.Apgar scores and cerebrospinal fluid beta-endorphinlike immunocractivity during the first day of life.Am J Dis Child，1985，139：403-404.
3，Chernick V，Manfreda J，Dc＇Booy V，et al.Clinical trial of naloxone in birth asphyxia.J Pediatr，1988，113：519-525.
4，Wood SC.Interactions between hypoxia and hypothermia.Annu Rev Physiol，1991，53：71-85.
5，Mayfield KP，D′ Alecy LG.Role of endogenous opioid peptides in the acute adaptation to hypoxia.Brain Res，1992，582：226-231.
收稿：1999-06-23 修回：2000-01-20, 百拇医药