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编号:10213199
日本血吸虫不同发育阶段抗原检测IgG及IgG4的疗效考核价值
http://www.100md.com 《中国现代医学杂志》 2000年第8期
     作者:舒新华 易新元 曾宪芳 张顺科 张忠杰

    单位:湖南医科大学寄生虫学教研室 长沙 410078

    关键词:日本血吸虫;日本血吸虫病;阶段性抗原;抗原-抗体检测;系统疗效考核

    中国现代医学杂志000803 目的:建立具有疗效考核价值的抗原-抗体检测系统。方法:用日本血吸虫不同发育阶段抗原(AWA、AMA、AESA、SEA、SIEA)检测治疗前及治疗后不同时间慢性血吸虫病人血清中特异性IgG及IgG4并测定肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应性。结果:不同发育阶段抗原-IgG检测系统间对慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清测试的阳性率无显著性差异(P>0.05),慢性血吸虫病人治疗后12个月IgG的阴转率以SIEA最高(90.0%),其次为AMA(77.5%),最低为AESA(20.0%);检测慢性血吸虫病人治疗前的特异性IgG4的阳性率AWA最高(85.0%),其次为AMA(80.0%),最低的为SIEA(37.5%),治疗后12个月的IgG4阴转率SIEA最高(97.5%),其次为AMA(95.0%)和AWA(85.0%),最低的为SEA(62.5%)。结论:AMA-IgG、SIEA-IgG、AWA-IgG4和AMA-IgG4检测系统具有较好的疗效考核价值,且以SIEA-IgG和AMA-IgG4两个检测系统最好。
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    分类号 R532.21

    SCHISTOSOMIASIS JAPONICA: EVALUATION OF

    THERAPEUTIC EFFICACY BY DETECTION OF SPECIFIC IgG4

    WITH ANTIGENS OF ADULT AND EGG STAGES

    Shu Xinhua Yi Xinyuan Zeng Xianfang Zhang Shunke Li Zhongjie

    (Department of Parasitology, Hunan Medical University, Changsha 410078)

    [Abstract] Objective: To establish antigen-antibody detection systems which can be used to diagnose schistosomiasis japonica and evaluate the therapeutic efficacy of the disease. Methods: Antigens derived from adult and egg stages including soluble adult worm antigen (AWA), adult worm membrane antigen (AMA), adult worm excretory and secretory antigen (AESA), soluble egg antigen (SEA) and soluble immature egg antigen (SIEA) were used to measure the specific IgG and IgG4 in sera of patients with schistosomiasis japonica before treatment and at 6 months and 12 months after treatment by ELISA. These antigens were also used to detect cross reactive antibody in sera of patients with other parasitic diseases and healthy individuals by ELISA. Results: There was no statistical difference in sensitivity and specificity among these antigens used to detect specific IgG in sera with chronic schistosomiasis japonica and cross reactive IgG in sera of patients with other parasitic diseases and of healthy individuals. The highest negative reversion rate of specific IgG in sera of patients at 12 months after treatment was 90.0% with SIEA, the second was 77.5% with AMA, the lowest was 20.0% with AESA. The highest sensitivity in detecting specific IgG4 in sera of the patients with schistosomiasis before treatment is 85.0% with AWA, the second is 80.0% with AMA, the lowest was 37.5% with SIEA while the highest negative reversion rate of specific IgG4 in sera of patients with schistosomiasis at 12 months after treatment is 97.5% with SIEA, the next were 95.0% with AMA and 85.0% with AWA, the lowest was 62.5% with SEA. Conclusions: Ama-IgG, SIEA-IgG, AWA-IgG4 and AMA-IgG4 detection systems have good property for immunodiagnosis and evaluation of therapeutic efficacy of schistosomiasis japonica.
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    Key words: Schistosome Japonicum; Schistosomiasis; Antigen-antibody Detection System; Evaluation of Therapeutic Efficacy

    本研究通过用日本血吸虫不同阶段抗原检测血吸虫病人血清中的IgG和IgG4,以期获得具有疗效考核价值的抗原-抗体检测系统。

    1 材料和方法

    1.1 抗原制备

    日本血吸虫成虫可溶性抗原(Soluble adult worm antigen,AWA)、成虫代谢分泌抗原(adult worm excretory and secretory antigen,AESA)、可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)按宋小平等[1]方法制备,成虫膜抗原(adult worm membrane antigen,AMA)按石佑恩等[2]方法制备,可溶性未成熟虫卵抗原(soluble immature egg antigen,SIEA)按汪世平等[3]方法制备。所制备的抗原按Bradford[4]方法测定蛋白浓度。
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    1.2 受检血清

    健康人血清采自非血吸虫病流行区的本校大学生,均无疫水接触史;慢性血吸虫病人血清采自血吸虫病疫区经粪检阳性的病人;血吸虫病人治疗后6个月及12个月的血清由同济医科大学寄生虫学教研室提供;肺吸虫病人血清采自肺吸虫病流行区,经皮内试验和ELISA检测阳性者;肝吸虫病人血清,采自肝吸虫病流行区粪检阳性的病人。

    1.3 酶联免疫吸附试验

    首先经棋盘滴定法确定各抗原的最佳包被浓度、血清稀释度和酶标抗人IgG和IgG4的稀释度。经确定AWA、AMA、AESA、SEA、SIEA的最佳包被浓度分别为9.98μg/ml,22.6μg/ml,16.7μg/ml,6.8μg/ml和12.2μg/ml,血清稀释度为1∶100,HRP标记的羊抗人IgG的稀释度为1∶2000,HRP标记的鼠抗人IgG4稀释度为1∶500。各抗原用0.05M碳酸盐缓冲液(pH9.6)稀释到最佳包被浓度,100μl/孔包板,4℃过夜,含3%脱脂牛奶的PBS-Tween20.37℃封闭2h,按100μl/孔加入0.1M pH7.2PBS稀释的血清,37℃ 2h,经洗涤后加入HRP标记的羊抗人IgG或鼠抗人IgG4,37℃孵育1h,用底物四甲基联苯胺(TMB)显色,用E960酶标仪测定光密度值(OD值),根据样本OD值与阴性对照OD值之比(S/N)≥2.1者判为阳性。
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    1.4 统计学处理

    AWA、AMA、AESA和SIEA用于ELISA检测的敏感性和特异性及疗效考核价值的比较均采用卡方检验。

    2 结果

    2.1 日本血吸虫不同阶段抗原检测日本血吸虫病的敏感性和特异性

    AWA、AMA、AESA、SEA和SIEA在ELISA中检测慢性血吸虫病人、肝吸虫病人和健康血清特异性抗体IgG的结果见表1。经卡方检验,不同阶段抗原对慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清测试的阳性率无显著性差异(P>0.05)。

    表1 不同阶段抗原在ELISA中的敏感性和特异性分析 例(%) 组别

    AWA
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    阳性

    AMA

    阳性

    AESA

    阳性

    SEA

    阳性

    SIEA

    阳性

    慢性血吸虫病人(n=50)

    46(92.0)

    47(94.0)

    45(90.0)
, 百拇医药
    48(96.0)

    44(88.0)

    肺吸虫病人(n=40)

    2(5.0)

    4(10.0)

    5(12.5)

    4(10.0)

    3(7.5)

    肝吸虫病人(n=40)

    2(5.0)

    1(2.5)

    3(7.5)
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    1(2.5)

    2(5.0)

    健康人(n=50)

    3(6.0)

    1(2.0)

    2(4.0)

    2(6.0)

    2(4.0)

    2.2 不同阶段抗原制剂ELISA的疗效考核价值

    用常规ELISA检测慢性日本血吸虫病人治疗前、治疗后6个月和12个月血清中抗AWA、AMA、AESA、SEA和SIEA的特异性抗体IgG和IgG4,结果见表2。表2 不同阶段抗原在ELISA中的疗效考核分析 例(%) 血清
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    AWA阳性

    AMA阳性

    AESA阳性

    SEA阳性

    SIEA阳性

    IgG

    IgG4

    IgG

    IgG4

    IgG

    IgG4

    IgG
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    IgG4

    IgG

    IgG4

    慢血病人

    (n=40)

    38(95)

    34(85)

    38(95)

    32(80)

    36(90)

    16(40)

    37(92.5)
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    30(75)

    36(90)

    15(37.5)

    治后6月

    (n=40)

    36(90)

    24(60)

    32(80)

    24(60)

    34(85)

    9(22.5)

    32(80)
, 百拇医药
    29(72.5)

    20(50)

    5(12.5)

    治后12月

    (n=40)

    19(47.5)

    6(15)

    11(27.5)

    2(5)

    32(80)

    7(17.5)

    21(52.5)
, 百拇医药
    15(37.5)

    4(10)

    1(2.5)

    用不同阶段抗原-IgG检测系统检测治疗后6个月的血吸虫病人血清的阳性检出率经卡方检验,AWA-IgG、AMA-IgG、AESA-IgG和SEA-IgG 4个检测系统之间无显著差异(P均>0.05),上述4个检测系统和SIEA-IgG检测系统之间均有非常显著的差异(均P<0.01);AWA-IgG和AMA-IgG检测系统之间无显著性差异(P>0.05),AWA-IgG和SEA-IgG检测系统之间无显著性差异(P<0.05),AMA-IgG、SMA-IgG、SEA-IgG、检测系统之间有显著性差异(P<0.05),AWA-IgG、AMA-IgG、SEA-IgG和SIEA-IgG 4个检测系统与AESA-IgG检测系统之间均有非常显著的差异(均P<0.01),AWA-IgG、AMA-IgG和SEA-IgG 3个检测与系统与SIEA-IgG检测系统之间均有非常显著差异(均P<0.01)。
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    用不同阶段抗原-IgG4检测系统检测治疗前慢性血吸虫病人血清的阳性检出率经卡方检验,AWA-IgG4、AMA-IgG4和SEA-IgG4 3个检测系统之间无显著性差异(均P>0.05);AWA-IgG4、AMA-IgG4和SEA-IgG4 3个检测系统与AESA-IgG4和SIEA-IgG42个检测系统之间均有非常显著的差异(均P<0.01);AESA-IgG4和SIEA-IgG4检测系统之间无显著性差异(P>0.05);检测治疗后6个月病人血清的阳性检出率经卡方检验,AWA-IgG4、AMA-IgG4和SEA-IgG4 3个检测系统之间无显著性差异(均P>0.05),3个检测系统与AESA-IgG4及SIEA-IgG4检测系统之间均有非常显著的差异(均P<0.01);AESA-IgG4和SIEA-IgG4检测系统之间无显著性差异(P>0.05);检测治疗后12个月病人血清的阳性检出率经卡方检验,AWA-IgG4、AMA-IgG4、AESA-IgG4和SIEA-IgG4 4个检测系统之间无显著性差异(均P>0.05),AWA-IgG4、AESA-IgG42个检测系统与SEA-IgG4测系统之间有显著的差异(均P<0.05);AMA-IgG4和SIEA-IgG42个检测系统与SEA-IgG4检测系统之间有非常显著性差异(均P<0.01)。
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    3 小结与讨论

    抗体IgG亚类与血吸虫急性感染、慢性感染[5~6]及再感染关系密切。慢性血吸虫病人的IgG含量与急性血吸虫病人相近,且都远高于正常人[5],病人体内IgG4约为正常人的20倍,且治疗后12wk抗SEA和AWA的特异性IgG4显著下降,与治疗前相比具有非常显著的差异(P<0.001)[6]。因此,检测血吸虫病人治疗前后特异性IgG亚类可用于疗效考核。

    以不同发育阶段抗原和IgG组合的检测系统诊断血吸虫病的敏感性和特异性没有显著性差异;检测治疗后6个月血吸虫病人的转阴率以SIEA-IgG检测系统最高,与其他4个检测系统相比具有非常显著的差异;检测治疗后12个月病人的转阴率以SIEA-IgG检测系统最高(90%),其次为AMA-IgG检测系统(77.5%),最低的为AESA-IgG检测系统,因此可知SIEA-IgG和AMA-IgG检测系统均可用于血吸虫病疗效考核,且以SIEA-IgG检测系统最好。以不同发育阶段抗原和IgG4组合的检测系统诊断慢性血吸虫病的敏感性以AWA-IgG4和AMA-IgG4检测系统较好,且检测治疗后12个月病人的转阴率较高,特别是AMA-IgG4检测治疗后12月病人的转阴率高达95.0%,因而这两个检测系统均可用于血吸虫病诊断的疗效考核;SEA-IgG4检测系统诊断血吸虫病的敏感性与AWA-IgG4和AMA-IgG4检测系统之间没有显著差异,但检测治疗后12个月病人的转阴率较低,而AESA-IgG4和SIEA-IgG4诊断血吸虫病的敏感性较差,故这3个检测系统均不能用于血吸虫病诊断的疗效考核。从上可知,SIEA-IgG、AMA-IgG、AMA-IgG4和AMA-IgG4四个检测系统均可用于血吸虫病诊断的疗效考核,且SIEA-IgG和AMA-IgG4两个检测系统最好。
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    本课题由国家“九五”医学科技攻关项目资助(专题号:96-04-04)

    参 考 文 献

    1,宋小平,刘 多.日本血吸虫排泄分泌抗原的生化及免疫学特性的研究.湖南医科大学学报,1991;16(2):118~122

    2,石佑恩,韩家俊,姜昌富,等.日本血吸虫表膜蛋白的研究.同济医科大学学报,1988;17(5):319~320

    3,汪世平,赵慰先,易新元,等.日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究.湖南医科大学学报,1995;20(3):193~196

    4,Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantitaion of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.Anal Biochem,72:248~254
, 百拇医药
    5,Rabello ALT,Garcia MMA,da Silva PAA,et al.Humoral immune responses in acute schistosomiasis mansoni:relation to morbidity.Clin Inf Dis,1995;21:608~615

    6,Boctor FN,Peter JB.IgG subclasses in human hronic schistosomiasis:over-production of schistosome-specific and nonspecifie IgG4.Clin Exp Immunol,1990;82:574~578

    收稿:2000-01-06, 百拇医药