灯盏花黄酮苷化学成分的研究
作者：张卫东 陈万生 王永红 杨根金 孔德云 李惠庭
单位：张卫东 陈万生 王永红 杨根金(第二军医大学药学院 上海 200433)；孔德云 李惠庭(上海医药工业研究院)
关键词：灯盏花；黄酮苷；5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷
中草药000802摘 要 从菊科植物灯盏花Erigeron brevis capus中分得4 个黄酮苷类化合物，通过理化常数、光谱数据分别鉴定为灯盏乙素(scutellarin, Ⅰ)、5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷(5，6，4′-trihydroxy flavone-7-O-β-D-galactonic acid, Ⅱ)、灯盏甲素(4′-hydroxy baicalein-7-O-β-D-pyrangluconate methyl ester, Ⅲ)和黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(baicalein-7-O-β-D-pyranglucose, Ⅳ)。其中Ⅱ为新化合物，Ⅳ为首次从本植物中分得。
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Studies on the Flavone Glycosides from the Extract of Erigeron breviscapus
Zhang Weidong
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
Chen Wansheng
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
Wang Yonghong
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
, 百拇医药
Yang Genjin
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
Kong Deyun
(Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry)
Li Huiting
(Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry)
Abstract Four flavone glycosides were isolated from the extract of Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand.-Mazz. and identified by spectral analyses as scutellarin (Ⅰ), 5, 6, 4′-trihydroxy flavone-7-O-β-D-galactopyranosiduronic acid (Ⅱ), 4′-hydroxy baicalein-7-O-β-D-glucopyranosiduronic acid methyl ester (Ⅲ), baicalein-7-O-β-D-glucopyranoside (Ⅳ). Compound Ⅱ was new and compound Ⅳ was isolated from this plant for the first time.
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Key words Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand.-Mazz. flavone glycoside 5, 6, 4′-trihydroxy flavone-7-O-β-D-galactopyranosiduronic acid
灯盏花为菊科植物短葶飞莲Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand.-Mazz.的全草。临床用于治疗脑血栓形成、脑栓塞、多发性神经炎、慢性蛛网膜炎等脑血管意外所致的瘫痪症[1，2]。以灯盏花总黄酮成分制成的片剂和注射液用于治疗脑血栓所致瘫痪，总有效率为95.8%[3]。目前在临床上使用的多为灯盏乙素的片剂和注射液，但最新研究报道咖啡酰类化合物也具有很强的活性[4]。为了进一步阐明灯盏花的的化学成分，我们对灯盏花进行了系统的化学成分研究，分离得到了4 个化合物，经光谱鉴定为：灯盏乙素(Ⅰ)、5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷(Ⅱ)、灯盏甲素(Ⅲ)、黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)，化合物Ⅱ为新化合物，化合物Ⅳ为首次从该植物中分得。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
熔点用ZMD83-1型电热熔点测定仪(未校正)；红外光谱用Hitachi 275-50型红外仪测定；质谱用Varian MAT 212型质谱仪测定；核磁共振谱用Bruker AC-300P型核磁共振仪测定，以TMS 为内标。色谱用硅胶为青岛海洋化工厂产品。
灯盏花采自云南省昆明市，由第二军医大学药学院生药教研室秦路平副教授鉴定为Erigeron breviscapus。
2 提取与分离
灯盏花全草50 kg用80%乙醇渗漉提取后，减压回收乙醇液后用水分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇部分用大孔吸附树脂层析，依次用水、20%、50%、80%EtOH洗脱得到5 个部位，20%乙醇层用硅胶柱层析，CHCl3-MeOH-H2O洗脱，再用Sephadex LH-20层析，MeOH-H2O洗脱，得化合物Ⅰ(120 mg)，Ⅱ(26 mg)。50%乙醇层用C18反相硅胶柱层析，MeOH-H2O洗脱，然后用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为CHCl3-MeOH(4∶1)，得化合物Ⅲ(15 mg)，Ⅳ(27 mg)。
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3 结构鉴定
化合物Ⅰ：黄色粉末，mp>300 ℃。FAB-MS、1H，13C NMR光谱数据与已知化合物灯盏乙素相对照[5]二者完全一致，故确定它为灯盏乙素，为灯盏花的主要活性成分。
化合物Ⅱ：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应橙红色。FAB-MS得分子量为462。苷元分子量为286，通过1H，13CNMR，DEPT得分子式为C21H18O12。1HNMR(DMSO-d6)δ：6.85(1H，s,H-3)，6.98(1H，s,H-8)，6.96(2H，d,J=7.9 Hz，H-3′，5′)，7.94(2H，d,J=7.9 Hz，H-2′，6′)，5.23(1H，d,J=8.9 Hz，糖端基氢)，3.65(1H，d,J=2.8 Hz，半乳糖醛酸4 位H)。13CNMR(DMSO-d6)δ：164.16(C-2)，102.56(C-3)，182.34(C-4)，149.04(C-5)，146.89(C-6)，161.15(C-7)，93.69(C-8)，150.97(C-9)，105.92(C-10)，121.35(C-1′)，128.42(C-2′)，115.98(C-3′)，130.49(C-4′)，115.98(C-5′)，128.42(C-6′)。糖的信号：100.12(C-1″)，71.29(C-2″)，75.21(C-3″)，75.49(C-4″)，72.81(C-5″)，169.97(C-6″)。比较1H，13CNMR，它与已知化合物灯盏乙素(化合物Ⅰ)非常相似，苷元是一样的均为黄芩素，只是在糖的数据有些区别，进一步比较发现它的13CNMR显示糖的信号为(169.9，75.5，75.2，72.8，71.3，100.1)，而灯盏乙素中糖的信号为(172.5，75.8，73.9，72.9，71.9，100.6)，推测化合物Ⅱ所含的糖应为半乳糖醛酸。通过1HNMR看出δ4.08(1H，宽峰)为葡萄糖醛酸5 位H特征信号，而在化合物Ⅱ中出现了3.65(1H，d，J=2.8 Hz)的半乳糖醛酸4 位H的特征信号。这也支持了半乳糖醛酸的结构推定。通过盐酸甲醇水解，经纸层析鉴定，与对照品半乳糖醛酸Rf值一致，由端基氢偶合常数J=8.9 Hz证明其为β-D-半乳糖醛酸，所以最终确定化合物Ⅱ为5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷，为一新化合物。
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化合物Ⅲ：黄色粉末，mp 250 ℃(分解)，盐酸-镁粉反应橙红色。从1H，13CNMR来看它与灯盏乙素比较多了一个甲氧基取代(3.76，3H，s)，与已知化合物灯盏甲素比较，二者光谱数据一致[6]，故确定化合物Ⅲ为灯盏甲素。
化合物Ⅳ：黄色粉末，mp 258 ℃～259 ℃，盐酸-镁粉反应橙红色。FAB-MS得分子量为448。1H、13CNMR，DEPT和MS推测分子式为C21H20O11。1HNMR(DMSO-d6)δ：6.52(1H，s,H-3)，6.87(1H，s,H-8)，7.03(2H，d,J=8.2 Hz，H-3′，5′)，7.88(2H，d,J=8.2 Hz，H-2′，6′)，5.23～5.48(糖上质子)，5.32(1H，d,J=7.8 Hz，H-1″)。13CNMR(DMSO-d6)δ：161.9(C-2)，103.8(C-3)，182.6(C-4)，148.9(C-5)，146.1(C-6)，164.1(C-7)，94.9(C-8)，151.5(C-9)，105.6(C-10)，122.3(C-1′)，128.3(C-2′)，115.6(C-3′)，132.9(C-4′)，115.6(C-5′)，128.3(C-6′)，101.3(C-1″)，73.1(C-2″)，76.5(C-3″)，69.9(C-4″)，77.5(C-5″)，62.3(C-6″)。从1H，13CNMR来看，它由一个葡萄糖和一个黄酮组成的苷，而黄酮分子中存在4′单取代，另外在A环上有三个羟基取代，葡萄糖与7 位成苷，与已知化合物黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷比较二者光谱数据一致[7]，故确定化合物Ⅳ为黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
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致谢：质谱由上海医药工业研究院王慧敏高级工程师测定，核磁共振谱和红外光谱分别由第二军医大学测试中心杨根金讲师和王勇同志测定。
国家自然科学基金资助项目
张卫东 男，副教授，1988年毕业于第二军医大学药学院。1998年于上海医药工业研究院获 得博士学位。1998～1999年法国图卢兹大学药学院访问学者，主要从事中药有效成分及新药 研究开发。
参考文献
1，云南省第一人民医院.中草药通讯，1973，(5)：39
2，张人伟，杨生元，杨永月，等.药学学报，1981，16(1)：68
3，王锦平，王永铭.中成药研究，1985，7(12)：25
4，中华人民共和国专利，公开号CN 11364434A
5，张人伟，张元玲，王杰生，等.中草药，1988，19(5)：7
6，张德成，金吉琴，刘星，等.中草药，1985，16(9)：24
7，龚运准.天然有机化合物的13C核磁共振化学位移.昆明：云南科技出版社，1985：182
(1999-09-28收稿), 百拇医药
单位：张卫东 陈万生 王永红 杨根金(第二军医大学药学院 上海 200433)；孔德云 李惠庭(上海医药工业研究院)
关键词：灯盏花；黄酮苷；5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷
中草药000802摘 要 从菊科植物灯盏花Erigeron brevis capus中分得4 个黄酮苷类化合物，通过理化常数、光谱数据分别鉴定为灯盏乙素(scutellarin, Ⅰ)、5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷(5，6，4′-trihydroxy flavone-7-O-β-D-galactonic acid, Ⅱ)、灯盏甲素(4′-hydroxy baicalein-7-O-β-D-pyrangluconate methyl ester, Ⅲ)和黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(baicalein-7-O-β-D-pyranglucose, Ⅳ)。其中Ⅱ为新化合物，Ⅳ为首次从本植物中分得。
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Studies on the Flavone Glycosides from the Extract of Erigeron breviscapus
Zhang Weidong
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
Chen Wansheng
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
Wang Yonghong
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
, 百拇医药
Yang Genjin
(College of Pharmacy, Second Military Medical University Shanghai 200433)
Kong Deyun
(Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry)
Li Huiting
(Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry)
Abstract Four flavone glycosides were isolated from the extract of Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand.-Mazz. and identified by spectral analyses as scutellarin (Ⅰ), 5, 6, 4′-trihydroxy flavone-7-O-β-D-galactopyranosiduronic acid (Ⅱ), 4′-hydroxy baicalein-7-O-β-D-glucopyranosiduronic acid methyl ester (Ⅲ), baicalein-7-O-β-D-glucopyranoside (Ⅳ). Compound Ⅱ was new and compound Ⅳ was isolated from this plant for the first time.
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Key words Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand.-Mazz. flavone glycoside 5, 6, 4′-trihydroxy flavone-7-O-β-D-galactopyranosiduronic acid
灯盏花为菊科植物短葶飞莲Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand.-Mazz.的全草。临床用于治疗脑血栓形成、脑栓塞、多发性神经炎、慢性蛛网膜炎等脑血管意外所致的瘫痪症[1，2]。以灯盏花总黄酮成分制成的片剂和注射液用于治疗脑血栓所致瘫痪，总有效率为95.8%[3]。目前在临床上使用的多为灯盏乙素的片剂和注射液，但最新研究报道咖啡酰类化合物也具有很强的活性[4]。为了进一步阐明灯盏花的的化学成分，我们对灯盏花进行了系统的化学成分研究，分离得到了4 个化合物，经光谱鉴定为：灯盏乙素(Ⅰ)、5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷(Ⅱ)、灯盏甲素(Ⅲ)、黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)，化合物Ⅱ为新化合物，化合物Ⅳ为首次从该植物中分得。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
熔点用ZMD83-1型电热熔点测定仪(未校正)；红外光谱用Hitachi 275-50型红外仪测定；质谱用Varian MAT 212型质谱仪测定；核磁共振谱用Bruker AC-300P型核磁共振仪测定，以TMS 为内标。色谱用硅胶为青岛海洋化工厂产品。
灯盏花采自云南省昆明市，由第二军医大学药学院生药教研室秦路平副教授鉴定为Erigeron breviscapus。
2 提取与分离
灯盏花全草50 kg用80%乙醇渗漉提取后，减压回收乙醇液后用水分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇部分用大孔吸附树脂层析，依次用水、20%、50%、80%EtOH洗脱得到5 个部位，20%乙醇层用硅胶柱层析，CHCl3-MeOH-H2O洗脱，再用Sephadex LH-20层析，MeOH-H2O洗脱，得化合物Ⅰ(120 mg)，Ⅱ(26 mg)。50%乙醇层用C18反相硅胶柱层析，MeOH-H2O洗脱，然后用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为CHCl3-MeOH(4∶1)，得化合物Ⅲ(15 mg)，Ⅳ(27 mg)。
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3 结构鉴定
化合物Ⅰ：黄色粉末，mp>300 ℃。FAB-MS、1H，13C NMR光谱数据与已知化合物灯盏乙素相对照[5]二者完全一致，故确定它为灯盏乙素，为灯盏花的主要活性成分。
化合物Ⅱ：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应橙红色。FAB-MS得分子量为462。苷元分子量为286，通过1H，13CNMR，DEPT得分子式为C21H18O12。1HNMR(DMSO-d6)δ：6.85(1H，s,H-3)，6.98(1H，s,H-8)，6.96(2H，d,J=7.9 Hz，H-3′，5′)，7.94(2H，d,J=7.9 Hz，H-2′，6′)，5.23(1H，d,J=8.9 Hz，糖端基氢)，3.65(1H，d,J=2.8 Hz，半乳糖醛酸4 位H)。13CNMR(DMSO-d6)δ：164.16(C-2)，102.56(C-3)，182.34(C-4)，149.04(C-5)，146.89(C-6)，161.15(C-7)，93.69(C-8)，150.97(C-9)，105.92(C-10)，121.35(C-1′)，128.42(C-2′)，115.98(C-3′)，130.49(C-4′)，115.98(C-5′)，128.42(C-6′)。糖的信号：100.12(C-1″)，71.29(C-2″)，75.21(C-3″)，75.49(C-4″)，72.81(C-5″)，169.97(C-6″)。比较1H，13CNMR，它与已知化合物灯盏乙素(化合物Ⅰ)非常相似，苷元是一样的均为黄芩素，只是在糖的数据有些区别，进一步比较发现它的13CNMR显示糖的信号为(169.9，75.5，75.2，72.8，71.3，100.1)，而灯盏乙素中糖的信号为(172.5，75.8，73.9，72.9，71.9，100.6)，推测化合物Ⅱ所含的糖应为半乳糖醛酸。通过1HNMR看出δ4.08(1H，宽峰)为葡萄糖醛酸5 位H特征信号，而在化合物Ⅱ中出现了3.65(1H，d，J=2.8 Hz)的半乳糖醛酸4 位H的特征信号。这也支持了半乳糖醛酸的结构推定。通过盐酸甲醇水解，经纸层析鉴定，与对照品半乳糖醛酸Rf值一致，由端基氢偶合常数J=8.9 Hz证明其为β-D-半乳糖醛酸，所以最终确定化合物Ⅱ为5，6，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷，为一新化合物。
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化合物Ⅲ：黄色粉末，mp 250 ℃(分解)，盐酸-镁粉反应橙红色。从1H，13CNMR来看它与灯盏乙素比较多了一个甲氧基取代(3.76，3H，s)，与已知化合物灯盏甲素比较，二者光谱数据一致[6]，故确定化合物Ⅲ为灯盏甲素。
化合物Ⅳ：黄色粉末，mp 258 ℃～259 ℃，盐酸-镁粉反应橙红色。FAB-MS得分子量为448。1H、13CNMR，DEPT和MS推测分子式为C21H20O11。1HNMR(DMSO-d6)δ：6.52(1H，s,H-3)，6.87(1H，s,H-8)，7.03(2H，d,J=8.2 Hz，H-3′，5′)，7.88(2H，d,J=8.2 Hz，H-2′，6′)，5.23～5.48(糖上质子)，5.32(1H，d,J=7.8 Hz，H-1″)。13CNMR(DMSO-d6)δ：161.9(C-2)，103.8(C-3)，182.6(C-4)，148.9(C-5)，146.1(C-6)，164.1(C-7)，94.9(C-8)，151.5(C-9)，105.6(C-10)，122.3(C-1′)，128.3(C-2′)，115.6(C-3′)，132.9(C-4′)，115.6(C-5′)，128.3(C-6′)，101.3(C-1″)，73.1(C-2″)，76.5(C-3″)，69.9(C-4″)，77.5(C-5″)，62.3(C-6″)。从1H，13CNMR来看，它由一个葡萄糖和一个黄酮组成的苷，而黄酮分子中存在4′单取代，另外在A环上有三个羟基取代，葡萄糖与7 位成苷，与已知化合物黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷比较二者光谱数据一致[7]，故确定化合物Ⅳ为黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
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致谢：质谱由上海医药工业研究院王慧敏高级工程师测定，核磁共振谱和红外光谱分别由第二军医大学测试中心杨根金讲师和王勇同志测定。
国家自然科学基金资助项目
张卫东 男，副教授，1988年毕业于第二军医大学药学院。1998年于上海医药工业研究院获 得博士学位。1998～1999年法国图卢兹大学药学院访问学者，主要从事中药有效成分及新药 研究开发。
参考文献
1，云南省第一人民医院.中草药通讯，1973，(5)：39
2，张人伟，杨生元，杨永月，等.药学学报，1981，16(1)：68
3，王锦平，王永铭.中成药研究，1985，7(12)：25
4，中华人民共和国专利，公开号CN 11364434A
5，张人伟，张元玲，王杰生，等.中草药，1988，19(5)：7
6，张德成，金吉琴，刘星，等.中草药，1985，16(9)：24
7，龚运准.天然有机化合物的13C核磁共振化学位移.昆明：云南科技出版社，1985：182
(1999-09-28收稿), 百拇医药