地贞颗粒质量标准的研究
作者：雷鹏 李新中
单位：湖南医科大学附属湘雅医院药剂科 长沙 410008
关键词：地贞颗粒；质量标准；五味子甲素
中国现代医学杂志000828 目的：建立地贞颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法对五味子、女贞子、墨旱莲进行定性鉴别，采用高效液相色谱法，以甲醇-水(含0.17%磷酸)=70∶30为流动相，流速1.0ml/min，检测波长254nm，测定五味子甲素的含量。结果：薄层色谱法定性具有良好的重现性；含量测定方法稳定、精确，平均回收率为95.14%。结论：制定的质量标准可以保证地贞颗粒的质量。
分类号 R286.0
地贞颗粒是由地骨皮、女贞子、五味子、墨旱莲等制成的纯中药颗粒剂，具有养阴清热、敛汗宁神等功效，主用于更年期综合征阴虚内热证。为控制该药质量，对其质量标准进行了研究。
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1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津LC-6A)；五味子甲素、齐墩果酸对照品，女贞子、五味子、墨旱莲对照药材(中国药品生物制品检定所)；薄层硅胶G、硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；其它试剂皆为分析纯。
2 实验方法
2.1 五味子的薄层鉴别
取本品细粉3g，加石油醚50ml回流40min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯3ml使溶解，作供试品溶液。取五味子对照药材细粉1g及缺五味子样品3g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。分别吸取上述四种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254板上，以环己烷-乙酸乙酯(10∶3)为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，结果见图1。
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图1
2.2 女贞子的薄层鉴别
取本品细粉3g，加石油醚50ml回流40min，滤过，滤液弃去，残渣加乙酸乙酯50ml回流提取40min，滤过，滤液上中性氧化铝柱(内径2.5cm,4g，乙酸乙酯湿法装柱)，乙酸乙酯洗脱液弃去，再加乙醇100ml洗脱，收集乙醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作供试品溶液。取女贞子对照药材细粉1g及缺女贞子样品3g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。取齐墩果酸对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。分别吸取上述四种溶液各10μl，点于同一硅胶G板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(10∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃烘烤5min，日光下检视，结果见图2。
图2
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2.3 墨旱莲的薄层鉴别
取本品细粉3g，加乙醇50ml回流40min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水50ml溶解，每次加乙酸乙酯20ml脱脂3次，水层每次加水饱和正丁醇20ml萃取5次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加中性氧化铝约1.5g，乙醇5ml拌匀，蒸干，上中性氧化铝柱(内径2.5cm，3g，乙酸乙酯装柱)，加乙酸乙酯100ml洗脱，再加乙醇80ml洗脱，收集乙醇洗脱液，水浴蒸干，加乙醇2ml溶解，作供试品溶液。另取墨旱莲对照药材细粉1g及缺墨旱莲样品3g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。分别吸取上述三种溶液各5μl，点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(9∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤5min，置紫外光灯(365nm)下检视，结果见图3。
图3
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2.4 五味子甲素的含量测定
2.4.1 色谱条件 碳十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-水(0.17%磷酸)=70∶30为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长254nm，柱温25℃。根据五味子甲素峰计算，理论塔板数不得少于1?000。
2.4.2 标准曲线的绘制 精密称取五味子甲素对照品制成每1ml含11.5μg的甲醇溶液。
精密吸取对照品溶液2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量为横座标，峰面积为纵座标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=962191.31X+1961.67，r=0.9998。
2.4.3 稳定试验 取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4h进行测定，结果稳定，RSD=1.53%。
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2.4.4 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样5次，测得RSD=1.45%。
2.4.5 重复性试验 取同一批样品6份，按样品项下处理并测定含量，得RSD=1.31%。
2.4.6 回收率试验 采用加样回收的方法，精密称取已知含量的样品6份，分别加入不同体积的五味子甲素对照品溶液，照样品项下处理并测定含量，计算回收率，结果为95.14%，RSD=1.41%。
2.4.7 样品的处理及含量测定 取样品细粉约3g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿150ml提取8h，提取液于60℃水浴蒸干，残渣用甲酸定容至100ml量瓶，为供试品溶液。精密吸取对照品、供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标一点法计算，即得。测定5批样品，五味子甲素含量分别为0.038%、0.039%、0.048%、0.042%、0.040%。
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3 讨论
五味子含多种木脂素类成分在药材供试液的高效液相色谱中，五味子甲素峰前后均有多个峰[1，2]，因此，在含量测定过程中，用不同溶媒(甲醇、氯仿、乙酸乙酯)、不同提取方法(索氏提取、回流法、超声提取)进行对比试验。结果表明：采用氯仿索氏提取8h，提取较完全，样品纯度高，可以达到基线分离，对色谱柱影响小，结果令人满意。
考察不同产地五味子药材，发现五味子甲素含量有较大差异(0.04%～0.22%)。为控制成品的质量，建议制定药材中五味子甲素的含量测定指标。
参 考 文 献
1，郑虎占，董泽宏，佘 靖.中药的现代研究与应用(1).北京：学苑出版社，1997：958
2，刘 燕，王宝琴.更年安及五味子中五味子甲素、乙素的HPLC测定.中成药，1992；14(9)：12
收稿：2000-04-20, 百拇医药
单位：湖南医科大学附属湘雅医院药剂科 长沙 410008
关键词：地贞颗粒；质量标准；五味子甲素
中国现代医学杂志000828 目的：建立地贞颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法对五味子、女贞子、墨旱莲进行定性鉴别，采用高效液相色谱法，以甲醇-水(含0.17%磷酸)=70∶30为流动相，流速1.0ml/min，检测波长254nm，测定五味子甲素的含量。结果：薄层色谱法定性具有良好的重现性；含量测定方法稳定、精确，平均回收率为95.14%。结论：制定的质量标准可以保证地贞颗粒的质量。
分类号 R286.0
地贞颗粒是由地骨皮、女贞子、五味子、墨旱莲等制成的纯中药颗粒剂，具有养阴清热、敛汗宁神等功效，主用于更年期综合征阴虚内热证。为控制该药质量，对其质量标准进行了研究。
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1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津LC-6A)；五味子甲素、齐墩果酸对照品，女贞子、五味子、墨旱莲对照药材(中国药品生物制品检定所)；薄层硅胶G、硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；其它试剂皆为分析纯。
2 实验方法
2.1 五味子的薄层鉴别
取本品细粉3g，加石油醚50ml回流40min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯3ml使溶解，作供试品溶液。取五味子对照药材细粉1g及缺五味子样品3g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。分别吸取上述四种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254板上，以环己烷-乙酸乙酯(10∶3)为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，结果见图1。
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图1
2.2 女贞子的薄层鉴别
取本品细粉3g，加石油醚50ml回流40min，滤过，滤液弃去，残渣加乙酸乙酯50ml回流提取40min，滤过，滤液上中性氧化铝柱(内径2.5cm,4g，乙酸乙酯湿法装柱)，乙酸乙酯洗脱液弃去，再加乙醇100ml洗脱，收集乙醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作供试品溶液。取女贞子对照药材细粉1g及缺女贞子样品3g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。取齐墩果酸对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。分别吸取上述四种溶液各10μl，点于同一硅胶G板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(10∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃烘烤5min，日光下检视，结果见图2。
图2
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2.3 墨旱莲的薄层鉴别
取本品细粉3g，加乙醇50ml回流40min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水50ml溶解，每次加乙酸乙酯20ml脱脂3次，水层每次加水饱和正丁醇20ml萃取5次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加中性氧化铝约1.5g，乙醇5ml拌匀，蒸干，上中性氧化铝柱(内径2.5cm，3g，乙酸乙酯装柱)，加乙酸乙酯100ml洗脱，再加乙醇80ml洗脱，收集乙醇洗脱液，水浴蒸干，加乙醇2ml溶解，作供试品溶液。另取墨旱莲对照药材细粉1g及缺墨旱莲样品3g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。分别吸取上述三种溶液各5μl，点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(9∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤5min，置紫外光灯(365nm)下检视，结果见图3。
图3
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2.4 五味子甲素的含量测定
2.4.1 色谱条件 碳十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-水(0.17%磷酸)=70∶30为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长254nm，柱温25℃。根据五味子甲素峰计算，理论塔板数不得少于1?000。
2.4.2 标准曲线的绘制 精密称取五味子甲素对照品制成每1ml含11.5μg的甲醇溶液。
精密吸取对照品溶液2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量为横座标，峰面积为纵座标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=962191.31X+1961.67，r=0.9998。
2.4.3 稳定试验 取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4h进行测定，结果稳定，RSD=1.53%。
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2.4.4 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样5次，测得RSD=1.45%。
2.4.5 重复性试验 取同一批样品6份，按样品项下处理并测定含量，得RSD=1.31%。
2.4.6 回收率试验 采用加样回收的方法，精密称取已知含量的样品6份，分别加入不同体积的五味子甲素对照品溶液，照样品项下处理并测定含量，计算回收率，结果为95.14%，RSD=1.41%。
2.4.7 样品的处理及含量测定 取样品细粉约3g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿150ml提取8h，提取液于60℃水浴蒸干，残渣用甲酸定容至100ml量瓶，为供试品溶液。精密吸取对照品、供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标一点法计算，即得。测定5批样品，五味子甲素含量分别为0.038%、0.039%、0.048%、0.042%、0.040%。
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3 讨论
五味子含多种木脂素类成分在药材供试液的高效液相色谱中，五味子甲素峰前后均有多个峰[1，2]，因此，在含量测定过程中，用不同溶媒(甲醇、氯仿、乙酸乙酯)、不同提取方法(索氏提取、回流法、超声提取)进行对比试验。结果表明：采用氯仿索氏提取8h，提取较完全，样品纯度高，可以达到基线分离，对色谱柱影响小，结果令人满意。
考察不同产地五味子药材，发现五味子甲素含量有较大差异(0.04%～0.22%)。为控制成品的质量，建议制定药材中五味子甲素的含量测定指标。
参 考 文 献
1，郑虎占，董泽宏，佘 靖.中药的现代研究与应用(1).北京：学苑出版社，1997：958
2，刘 燕，王宝琴.更年安及五味子中五味子甲素、乙素的HPLC测定.中成药，1992；14(9)：12
收稿：2000-04-20, 百拇医药