益寿调脂片对小鼠免疫功能的影响
作者：钟毅 孙立 朱秉匡 郑仕富
单位：钟毅(广东省中医院 广州 510120)；孙立 朱秉匡 郑仕富(暨南大学中西医结合气血研究室)
关键词：益寿调脂片；免疫功能；衰老模型
浙江中西医结合杂志000810 摘要 目的：观察益寿调脂片对 小鼠免疫功能的影响。方法：采用腹腔巨噬细胞功能测定法、溶血 素测定法及非特异酯酶法，观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数、 小鼠血清半数溶血值及实验致衰老小鼠T淋巴细胞百分率、胸腺和脾脏重量指数。结果：益寿调脂片可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数， 能明显增加小鼠血清溶血素含量和实验致衰老小鼠T淋巴细胞总数、免疫器官重量；与对照 组比较，P<0.05～0.001。结论：益寿调脂片能激 活小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，能提高机体体液和细胞免疫能力以及恢复免疫器官重量至 正常水平。
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有关益寿调脂片的抗高脂血症、动脉粥样硬化形成、改善 血液流变学等 作用，我们已先后作了报道[1，2]。为了探讨其对免疫功能的影响，我们作了以 下实验，现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 益寿调脂片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
1.1.1 动 物 昆明种小鼠，雌雄各半，20±2g ，暨南大学医学院实验动物所提供，合格证号：粤检证字97A011号；公鸡，市售。
1.1.2 药 物 益寿调脂片(广州中药一厂生产， 由黄芪30g，丹参12g，枸杞子15g，首乌15g，大蒜20g等中药组成)，每片含生药0.5 3g；绞股蓝总甙片为陕西安康中药厂产品，每粒20mg，批号940626。
1.1.3 试 剂 Alsever’s溶液 枸橼 酸三钠 *2H2O 8.0g，枸橼酸0.5g，无水葡萄糖18.7g，氯化钠4.2g，蒸馏 水加至1000ml，过滤分装 ，10磅高压20min，4℃冰箱保存备用；鸡红细胞悬液 于无菌操作下，自鸡翼下静脉采 血，置100ml疫苗瓶中，加入相当于鸡血体积5倍的Alsever’s溶液，混匀，4℃ 冰箱保存。临用时，用生理盐水洗涤3次，前二次离心速度为1500r/min，离心5min ，弃上清液和界面的白细胞层。最后应连续两次离心(2000r/min，5min)， 直至红细胞压积值恒定，按此值用生理盐水配成所需浓度的红细胞悬液(V/V)。
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1.1.4 分组及实验方法 参照《中药药理实验方 法学 》之影响非特异性免疫功能的实验方法[3]及暨南大学医学院免疫与微生物教研室 方法改进。
昆明种小鼠40只，按体重均衡随机分为4组，每组雌雄各半。空白对照组每鼠灌服 0.1%淀粉溶液0.5ml，低剂量组每鼠按4g/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0.5 ml，高剂量组每鼠按8g/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0.5ml(用药剂量相当于 成人剂量的5倍和10倍)，阳性对照组每鼠按0.75g/(kg*d)灌服绞股蓝总甙片混悬液 0.5ml(用药剂量相当于成人剂量的5倍)，每日1次，共7天。
末次给药2h后，无菌条件下每鼠腹腔注射5%(V/V)鸡红细胞悬液1ml。17h后，每鼠腹腔 注射1%肉汤1ml，间隔2.5h后，颈椎脱臼处死小鼠，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹腔皮 肤，吸取腹腔液1ml分滴于两张载玻片上，铺成厚薄均匀的涂片，自然干燥，而后以甲醇 固定10分钟，吹干后用4%Giemsawright染液染色15～20分钟，用自来水轻轻漂 洗，晾干，进行油镜观察。记录100个巨噬细胞中所吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的 鸡红细胞数。
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1.1.5 观察指标 吞噬百分率及吞噬指数。
1.2 益寿调脂片对小鼠溶血素生成的影响
1.2.1 动 物 小鼠同上，豚鼠、绵羊均为暨南 大学实验动物所饲养。
1.2.2 药 物 同上。
1.2.3 试 剂 都氏试剂碳酸氢钠1.0g，氰化钾 0.05g，高铁氰化钾 0.2g，加入蒸馏水至1000ml，置4℃冰箱保存；豚鼠血清：豚鼠心脏抽血，分离血清，将 血清加入压积绵羊红细胞(SRBC)中。按血清：SRBC＝5∶1(V/V)，于4℃冰箱放置30min， 以除去非特异性补体参与的溶血，2000rpm离心10min，吸取上清液，用生理盐水稀 释成1∶10血清，备用；绵羊红细胞(SRBC)悬液：从健康年轻(约半岁)绵羊颈静脉采血，加 入两倍量的Alsever’s血细胞保存液(见实验1)，置4℃保存。实验时取保存的羊血 ，用生理盐水洗涤3次，每次离心5分钟(2000rpm)，除去其中的纤维蛋白和白细胞、血小 板等，以生理盐水配成所需浓度。
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1.2.4 分组及实验方法 参照《中药药理实验方 法学》之影响体液免疫功能的实验方法[3]。
昆明种小鼠40只，分组及给药方法、剂量同上。连续7天后，每鼠腹腔注射3∶5(V/V)稀释的 SRBC悬液0.2ml进行免疫，免疫当天停药1次，第2天继续给药。免疫4天后摘除小鼠眼球 取 血约1ml，分离血清，取用生理盐水稀释好的血清样品1ml加至反应管内，再加入10%SRB C0.5ml，置冰浴中，并于试管中加入1ml以生理盐水1∶10稀释的豚鼠血清，随即移置37 ℃恒温水浴中，保温10min。孵育完毕即放入冰浴中以终止反应，以2000rpm离心10m in。取上清液1ml加3ml都氏试剂，混匀，放置10min后，在Beckman70 0型生化分析仪(波长540nm)上比色，以不加血清的空白管作对照，测录各样品的吸收度 值(OD)。
取0.25ml的SRBC用都氏试剂稀释至4ml，摇匀，放置10min，以2000rpm离心10m i n，取上清液，在Beckman700型生化分析仪(波长540nm)上进行比色，测录吸 收度值，该值即为SRBC半数溶血时的吸收度值。
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1.2.5 观察指标 样品半数溶血值(HC50 )＝(样品吸收度值/SRBC半数溶血时的吸收度值)×稀释倍数。
1.3 益寿调脂片对实验致衰老小鼠T 细胞总数及免疫器官重量的影响(动物及药物同上)。
1.3.1 试 剂 5%D-半乳糖注射液：中国医药公 司北京采购供应站结晶 粉配制，批号960201；福尔马林丙酮缓冲液(pH6.6)：称取100mgKH2PO 4和20mgNa2HPO4，先溶解于30ml水中，然后加入45ml丙酮和4%甲醛25m l，充分混合后，调pH至6.6，置4℃冰箱中保存；副品红溶液：称取4g副品红加入到100 ml 2mol/L HCl中，水浴溶解过滤后，置4℃冰箱中保存；六偶氮副品红溶液： 取 4%亚硝酸钠溶液3ml，慢慢滴入3ml副品红溶液中，边滴边摇，充分振荡1min，临用 前配制；2%α-醋酸萘酯溶液：称取2gα-醋酸萘酯溶于100ml乙二醇单甲醚中，置4℃ 避光保存；1/15mol/L，pH7.6磷酸缓冲液：称取KH2PO49.08g溶于1 000ml蒸馏水中，该液为A液；称取Na2HPO4*12H2O23.882g溶于 1000 ml蒸馏水中，为B液。用前取A液13ml，B液87ml，两液混匀即可；孵育液：取1/15m ol/L，pH7.6磷酸盐缓冲液89ml，加入染色缸中，缓缓加入六偶氮副品红液6ml， 充分混匀后再慢慢滴入2%α-醋酸萘酯溶液2.5ml，充分混匀后，调pH至6.1，临用前配 制；1%甲基绿染色液：取甲基绿1g，溶解于100ml热蒸馏水中，溶解后4℃保存备用。
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1.3.2 分组及实验方法 参照《抗衰老研究实验 方法》之细胞免疫功能测定方法[4]。
昆明种小鼠50只，按体重均衡随机分成5组，每组雌雄各半。空白对照组各鼠每日颈背皮下 注射生理盐水0.5ml，衰老模型组，低剂量组、高剂量组及阳性对照组各鼠每日颈背皮下 注射5%D-半乳糖注射液40mg/(kg*d)0.5ml。造模同时空白对照组、衰老模型组每 鼠灌服0.1%淀粉溶液0.5ml，低剂量组每鼠按4g/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0. 5ml，高剂量组每鼠按8mg/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0.5ml(用药剂量分别 为成人临床用量的5倍和10倍)，阳性对照组每鼠按0.75mg/(kg*d)灌服绞股蓝总 甙片混悬液0.5ml(用药剂量为成人用量的5倍)，每日1次，连续40天。
40天后用浸有二甲苯的棉球将小鼠尾巴从上至下涂擦，5min后用75%酒精再将尾巴的尖部 局部消毒，待酒精干燥后用医用剪刀在尾尖部约0.2mm处剪掉，血液自行流出后用玻片取 血、推片。待血片自然干燥后，将血片置于4℃福尔马林丙酮缓冲液中固定30秒，取出后用 自来水流水冲洗1min。于室温下空气干燥1h以上。将干燥后的涂片浸入孵育液中，室温 浸染1h。取出后用流水充分冲洗玻片上的沉淀物，再用甲基绿复染10min。流水冲洗染 色液，空气干燥。待干后置油镜下计数100个淋巴细胞。求出含颗粒的T淋巴细胞的百分率。
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实验结束后，精确剥取小鼠胸腺及脾脏，于电子天平上称重，并计算重量指数(mg/10 g体重)。
1.3.3 结果判断 胞浆中呈现大小不同、数量不 等的黑红色颗 粒为ANAE(+)细胞，即T淋巴细胞；胞浆中无黑红色颗粒为ANAE(-)细胞，即B淋巴细胞。
1.3.4 观察指标 T淋巴细胞百分率即ANAE(+)率 ，胸腺及脾脏指数。
1.3.5 统计学方法 均用单因素方差分析及SPSS7 .5软件进行统计及分析。
2 结 果
2.1 益寿调脂片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 空白对照组的吞噬百分率、吞噬指数明显低于低剂量组、高剂量组、阳 性对照组，P<0.05～0.01，提示益寿调脂片可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的 吞噬百分率和吞噬指数，说明益寿调脂片能激活小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，见表1。
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表1 益寿调脂片对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 (
±s)
用药剂量g/(kg*d)
n/只
吞噬率/%
吞噬指数
空白对照组
*0
10
34.23±3.76
0.51±0.057
低剂量组
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4
10
38.73±4.56*
0.60±0. 073*
高剂量组
8
10
40.45±5.98**
0.64±0 .095**
绞股蓝组
0.75
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10
39.20±3.59*
0.60±0 .055*
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
2.2 益寿调脂片对小鼠溶血素生成的影响 低剂量组、高剂量组、阳性对照组的半数溶血值明显高于空白对照组，P<0. 05～0.001，表明益寿调脂片能明显增强小鼠血清溶血素含量，说明益寿调脂 片能提高机体体液免疫能力，见表2。
表2 益寿调脂片对小鼠溶血素生成影响 (±s)
用药剂量
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g/(kg*d)
n/只
半数溶血值
(HC50 )
空白对照组
0
10
62.76±15.40
低剂量组
4
10
86.60±21.51**
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高剂量组
8
10
98.41±13.22***
绞股蓝组
0.75
10
80.18±19.30*
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
2.3 益寿调脂片对实验致衰老小鼠T细胞总数及免疫器官重 量的影响 衰老模型组的ANAE(+)率、胸腺指数、脾脏指数均显 著低于空白对照组、低剂量组、高剂量组及阳性对照组，P<0.05～0.001， 提示实验致衰老小鼠T细胞总数及免疫器官重量均下降，但服用益寿调脂片后T细胞总数及免 疫器官重量均明显增加，说明益寿调脂片能提高机体细胞免疫能力及恢复免疫器官重量至正 常水平，见表3。
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表3 益寿调脂片对实验致衰老小鼠T细胞总数及免疫器官 重量的影响(±s)
用药剂量
/g/(kg*d)
n/只
ANAE(+)率
/%
胸腺指数
/(mg/10g)
脾脏指数
/(mg/10g)
空白对照
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0
10
49.91±2.99**
42.39±9.17**
55 .66±6.17***
衰老模型组
0
10
44.35±4.31
33.97±7. 04
44.83±6.58
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低剂量组
4
10
50.36±4.38*
41.88±6.1 0*
50.60±6.78*
高剂量组
8
10
52.91±4.12***
42.80 ±6.27**
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54.38±4.69**
绞股蓝组
0.75
10
48.95±3.29*
42.77± 4.33**
54.16±6.90**
与对照 组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
3 讨 论
目前普遍认为免疫系统的老年期变化与衰老的关系相当密切，研究衰老的免疫机制和抗 衰老药物对免疫功能的影响，将有助于防止衰老和治疗多种老年性免疫疾病[4]。
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研究证明，益寿调脂片中各药均具有提高机体免疫力的作用。黄芪能增强老龄鼠及氢化可的 松致免疫功能低下模型鼠的免疫功能，提高细胞免疫、体液免疫、补体水平、补体介导免疫 复合物溶解活性，使老龄鼠免疫器官和组织超微结构恢复正常[5]。丹参煎剂注 射液能明显增加小鼠吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数；可提高大鼠血中淋巴细胞转化。枸杞子、 枸杞多糖均可显著提高吞噬细胞吞噬能力和血清溶菌酶活力；对IgE抗体应答有调节作用 ，可增强正常小鼠和Cy处理鼠的T细胞介导的免疫反应和NK细胞的活性等[5]。 何首乌提取物能增加胸腺核酸和蛋白质的含量，保护胸腺组织；增强ConA诱导的胸腺淋 巴细胞增殖反应及正常小鼠脾脏抗体形成细胞；增加小鼠血浆中cAMP的含量，对小鼠脾 细胞conA和PHA的增殖反应有明显增强，提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能等。泽泻 煎剂能抑制小鼠碳末廓清速率及2，4-二硝基氯苯所致的接触性皮炎，具有凝集素作用等 [5]。海藻提取物能使小鼠脾细胞增殖 活性和腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的功能增强[5]。山楂能明显提高家兔的血 清溶菌酶含量、血清血凝抗体滴度、T淋巴细胞E玫瑰花环形成率及T淋巴细胞转化率。大蒜 能提高ANAE及E花环的活性，可明显增强小鼠的特异性细胞免疫功能和非特异性免疫功能。
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参考文献
1，钟毅，朱秉匡，郑仕富.益寿调脂片抗高脂血症及动脉粥样 硬化的实验研究.中国中西医结合杂志，1998，18(10)：616～619
2，朱秉匡，钟毅，郑仕富.益寿调脂片对血脂和血液流变学作用的影响.中国 实验方剂学杂志，1999，5(3)：40～43
3，李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991.158～161[ ZK)
4，陈勤.抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社，1996.304～371
5，郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用(第四卷).北京：学苑出版社 ，1997.3027～3906
收稿日期：1998-01-02, http://www.100md.com
单位：钟毅(广东省中医院 广州 510120)；孙立 朱秉匡 郑仕富(暨南大学中西医结合气血研究室)
关键词：益寿调脂片；免疫功能；衰老模型
浙江中西医结合杂志000810 摘要 目的：观察益寿调脂片对 小鼠免疫功能的影响。方法：采用腹腔巨噬细胞功能测定法、溶血 素测定法及非特异酯酶法，观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数、 小鼠血清半数溶血值及实验致衰老小鼠T淋巴细胞百分率、胸腺和脾脏重量指数。结果：益寿调脂片可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数， 能明显增加小鼠血清溶血素含量和实验致衰老小鼠T淋巴细胞总数、免疫器官重量；与对照 组比较，P<0.05～0.001。结论：益寿调脂片能激 活小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，能提高机体体液和细胞免疫能力以及恢复免疫器官重量至 正常水平。
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有关益寿调脂片的抗高脂血症、动脉粥样硬化形成、改善 血液流变学等 作用，我们已先后作了报道[1，2]。为了探讨其对免疫功能的影响，我们作了以 下实验，现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 益寿调脂片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
1.1.1 动 物 昆明种小鼠，雌雄各半，20±2g ，暨南大学医学院实验动物所提供，合格证号：粤检证字97A011号；公鸡，市售。
1.1.2 药 物 益寿调脂片(广州中药一厂生产， 由黄芪30g，丹参12g，枸杞子15g，首乌15g，大蒜20g等中药组成)，每片含生药0.5 3g；绞股蓝总甙片为陕西安康中药厂产品，每粒20mg，批号940626。
1.1.3 试 剂 Alsever’s溶液 枸橼 酸三钠 *2H2O 8.0g，枸橼酸0.5g，无水葡萄糖18.7g，氯化钠4.2g，蒸馏 水加至1000ml，过滤分装 ，10磅高压20min，4℃冰箱保存备用；鸡红细胞悬液 于无菌操作下，自鸡翼下静脉采 血，置100ml疫苗瓶中，加入相当于鸡血体积5倍的Alsever’s溶液，混匀，4℃ 冰箱保存。临用时，用生理盐水洗涤3次，前二次离心速度为1500r/min，离心5min ，弃上清液和界面的白细胞层。最后应连续两次离心(2000r/min，5min)， 直至红细胞压积值恒定，按此值用生理盐水配成所需浓度的红细胞悬液(V/V)。
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1.1.4 分组及实验方法 参照《中药药理实验方 法学 》之影响非特异性免疫功能的实验方法[3]及暨南大学医学院免疫与微生物教研室 方法改进。
昆明种小鼠40只，按体重均衡随机分为4组，每组雌雄各半。空白对照组每鼠灌服 0.1%淀粉溶液0.5ml，低剂量组每鼠按4g/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0.5 ml，高剂量组每鼠按8g/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0.5ml(用药剂量相当于 成人剂量的5倍和10倍)，阳性对照组每鼠按0.75g/(kg*d)灌服绞股蓝总甙片混悬液 0.5ml(用药剂量相当于成人剂量的5倍)，每日1次，共7天。
末次给药2h后，无菌条件下每鼠腹腔注射5%(V/V)鸡红细胞悬液1ml。17h后，每鼠腹腔 注射1%肉汤1ml，间隔2.5h后，颈椎脱臼处死小鼠，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹腔皮 肤，吸取腹腔液1ml分滴于两张载玻片上，铺成厚薄均匀的涂片，自然干燥，而后以甲醇 固定10分钟，吹干后用4%Giemsawright染液染色15～20分钟，用自来水轻轻漂 洗，晾干，进行油镜观察。记录100个巨噬细胞中所吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的 鸡红细胞数。
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1.1.5 观察指标 吞噬百分率及吞噬指数。
1.2 益寿调脂片对小鼠溶血素生成的影响
1.2.1 动 物 小鼠同上，豚鼠、绵羊均为暨南 大学实验动物所饲养。
1.2.2 药 物 同上。
1.2.3 试 剂 都氏试剂碳酸氢钠1.0g，氰化钾 0.05g，高铁氰化钾 0.2g，加入蒸馏水至1000ml，置4℃冰箱保存；豚鼠血清：豚鼠心脏抽血，分离血清，将 血清加入压积绵羊红细胞(SRBC)中。按血清：SRBC＝5∶1(V/V)，于4℃冰箱放置30min， 以除去非特异性补体参与的溶血，2000rpm离心10min，吸取上清液，用生理盐水稀 释成1∶10血清，备用；绵羊红细胞(SRBC)悬液：从健康年轻(约半岁)绵羊颈静脉采血，加 入两倍量的Alsever’s血细胞保存液(见实验1)，置4℃保存。实验时取保存的羊血 ，用生理盐水洗涤3次，每次离心5分钟(2000rpm)，除去其中的纤维蛋白和白细胞、血小 板等，以生理盐水配成所需浓度。
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1.2.4 分组及实验方法 参照《中药药理实验方 法学》之影响体液免疫功能的实验方法[3]。
昆明种小鼠40只，分组及给药方法、剂量同上。连续7天后，每鼠腹腔注射3∶5(V/V)稀释的 SRBC悬液0.2ml进行免疫，免疫当天停药1次，第2天继续给药。免疫4天后摘除小鼠眼球 取 血约1ml，分离血清，取用生理盐水稀释好的血清样品1ml加至反应管内，再加入10%SRB C0.5ml，置冰浴中，并于试管中加入1ml以生理盐水1∶10稀释的豚鼠血清，随即移置37 ℃恒温水浴中，保温10min。孵育完毕即放入冰浴中以终止反应，以2000rpm离心10m in。取上清液1ml加3ml都氏试剂，混匀，放置10min后，在Beckman70 0型生化分析仪(波长540nm)上比色，以不加血清的空白管作对照，测录各样品的吸收度 值(OD)。
取0.25ml的SRBC用都氏试剂稀释至4ml，摇匀，放置10min，以2000rpm离心10m i n，取上清液，在Beckman700型生化分析仪(波长540nm)上进行比色，测录吸 收度值，该值即为SRBC半数溶血时的吸收度值。
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1.2.5 观察指标 样品半数溶血值(HC50 )＝(样品吸收度值/SRBC半数溶血时的吸收度值)×稀释倍数。
1.3 益寿调脂片对实验致衰老小鼠T 细胞总数及免疫器官重量的影响(动物及药物同上)。
1.3.1 试 剂 5%D-半乳糖注射液：中国医药公 司北京采购供应站结晶 粉配制，批号960201；福尔马林丙酮缓冲液(pH6.6)：称取100mgKH2PO 4和20mgNa2HPO4，先溶解于30ml水中，然后加入45ml丙酮和4%甲醛25m l，充分混合后，调pH至6.6，置4℃冰箱中保存；副品红溶液：称取4g副品红加入到100 ml 2mol/L HCl中，水浴溶解过滤后，置4℃冰箱中保存；六偶氮副品红溶液： 取 4%亚硝酸钠溶液3ml，慢慢滴入3ml副品红溶液中，边滴边摇，充分振荡1min，临用 前配制；2%α-醋酸萘酯溶液：称取2gα-醋酸萘酯溶于100ml乙二醇单甲醚中，置4℃ 避光保存；1/15mol/L，pH7.6磷酸缓冲液：称取KH2PO49.08g溶于1 000ml蒸馏水中，该液为A液；称取Na2HPO4*12H2O23.882g溶于 1000 ml蒸馏水中，为B液。用前取A液13ml，B液87ml，两液混匀即可；孵育液：取1/15m ol/L，pH7.6磷酸盐缓冲液89ml，加入染色缸中，缓缓加入六偶氮副品红液6ml， 充分混匀后再慢慢滴入2%α-醋酸萘酯溶液2.5ml，充分混匀后，调pH至6.1，临用前配 制；1%甲基绿染色液：取甲基绿1g，溶解于100ml热蒸馏水中，溶解后4℃保存备用。
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1.3.2 分组及实验方法 参照《抗衰老研究实验 方法》之细胞免疫功能测定方法[4]。
昆明种小鼠50只，按体重均衡随机分成5组，每组雌雄各半。空白对照组各鼠每日颈背皮下 注射生理盐水0.5ml，衰老模型组，低剂量组、高剂量组及阳性对照组各鼠每日颈背皮下 注射5%D-半乳糖注射液40mg/(kg*d)0.5ml。造模同时空白对照组、衰老模型组每 鼠灌服0.1%淀粉溶液0.5ml，低剂量组每鼠按4g/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0. 5ml，高剂量组每鼠按8mg/(kg*d)灌服益寿调脂片混悬液0.5ml(用药剂量分别 为成人临床用量的5倍和10倍)，阳性对照组每鼠按0.75mg/(kg*d)灌服绞股蓝总 甙片混悬液0.5ml(用药剂量为成人用量的5倍)，每日1次，连续40天。
40天后用浸有二甲苯的棉球将小鼠尾巴从上至下涂擦，5min后用75%酒精再将尾巴的尖部 局部消毒，待酒精干燥后用医用剪刀在尾尖部约0.2mm处剪掉，血液自行流出后用玻片取 血、推片。待血片自然干燥后，将血片置于4℃福尔马林丙酮缓冲液中固定30秒，取出后用 自来水流水冲洗1min。于室温下空气干燥1h以上。将干燥后的涂片浸入孵育液中，室温 浸染1h。取出后用流水充分冲洗玻片上的沉淀物，再用甲基绿复染10min。流水冲洗染 色液，空气干燥。待干后置油镜下计数100个淋巴细胞。求出含颗粒的T淋巴细胞的百分率。
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实验结束后，精确剥取小鼠胸腺及脾脏，于电子天平上称重，并计算重量指数(mg/10 g体重)。
1.3.3 结果判断 胞浆中呈现大小不同、数量不 等的黑红色颗 粒为ANAE(+)细胞，即T淋巴细胞；胞浆中无黑红色颗粒为ANAE(-)细胞，即B淋巴细胞。
1.3.4 观察指标 T淋巴细胞百分率即ANAE(+)率 ，胸腺及脾脏指数。
1.3.5 统计学方法 均用单因素方差分析及SPSS7 .5软件进行统计及分析。
2 结 果
2.1 益寿调脂片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 空白对照组的吞噬百分率、吞噬指数明显低于低剂量组、高剂量组、阳 性对照组，P<0.05～0.01，提示益寿调脂片可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的 吞噬百分率和吞噬指数，说明益寿调脂片能激活小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，见表1。
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表1 益寿调脂片对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 (
±s)用药剂量g/(kg*d)
n/只
吞噬率/%
吞噬指数
空白对照组
*0
10
34.23±3.76
0.51±0.057
低剂量组
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4
10
38.73±4.56*
0.60±0. 073*
高剂量组
8
10
40.45±5.98**
0.64±0 .095**
绞股蓝组
0.75
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10
39.20±3.59*
0.60±0 .055*
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
2.2 益寿调脂片对小鼠溶血素生成的影响 低剂量组、高剂量组、阳性对照组的半数溶血值明显高于空白对照组，P<0. 05～0.001，表明益寿调脂片能明显增强小鼠血清溶血素含量，说明益寿调脂 片能提高机体体液免疫能力，见表2。
表2 益寿调脂片对小鼠溶血素生成影响 (
±s)用药剂量
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g/(kg*d)
n/只
半数溶血值
(HC50 )
空白对照组
0
10
62.76±15.40
低剂量组
4
10
86.60±21.51**
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高剂量组
8
10
98.41±13.22***
绞股蓝组
0.75
10
80.18±19.30*
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
2.3 益寿调脂片对实验致衰老小鼠T细胞总数及免疫器官重 量的影响 衰老模型组的ANAE(+)率、胸腺指数、脾脏指数均显 著低于空白对照组、低剂量组、高剂量组及阳性对照组，P<0.05～0.001， 提示实验致衰老小鼠T细胞总数及免疫器官重量均下降，但服用益寿调脂片后T细胞总数及免 疫器官重量均明显增加，说明益寿调脂片能提高机体细胞免疫能力及恢复免疫器官重量至正 常水平，见表3。
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表3 益寿调脂片对实验致衰老小鼠T细胞总数及免疫器官 重量的影响(
±s)用药剂量
/g/(kg*d)
n/只
ANAE(+)率
/%
胸腺指数
/(mg/10g)
脾脏指数
/(mg/10g)
空白对照
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0
10
49.91±2.99**
42.39±9.17**
55 .66±6.17***
衰老模型组
0
10
44.35±4.31
33.97±7. 04
44.83±6.58
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低剂量组
4
10
50.36±4.38*
41.88±6.1 0*
50.60±6.78*
高剂量组
8
10
52.91±4.12***
42.80 ±6.27**
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54.38±4.69**
绞股蓝组
0.75
10
48.95±3.29*
42.77± 4.33**
54.16±6.90**
与对照 组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
3 讨 论
目前普遍认为免疫系统的老年期变化与衰老的关系相当密切，研究衰老的免疫机制和抗 衰老药物对免疫功能的影响，将有助于防止衰老和治疗多种老年性免疫疾病[4]。
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研究证明，益寿调脂片中各药均具有提高机体免疫力的作用。黄芪能增强老龄鼠及氢化可的 松致免疫功能低下模型鼠的免疫功能，提高细胞免疫、体液免疫、补体水平、补体介导免疫 复合物溶解活性，使老龄鼠免疫器官和组织超微结构恢复正常[5]。丹参煎剂注 射液能明显增加小鼠吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数；可提高大鼠血中淋巴细胞转化。枸杞子、 枸杞多糖均可显著提高吞噬细胞吞噬能力和血清溶菌酶活力；对IgE抗体应答有调节作用 ，可增强正常小鼠和Cy处理鼠的T细胞介导的免疫反应和NK细胞的活性等[5]。 何首乌提取物能增加胸腺核酸和蛋白质的含量，保护胸腺组织；增强ConA诱导的胸腺淋 巴细胞增殖反应及正常小鼠脾脏抗体形成细胞；增加小鼠血浆中cAMP的含量，对小鼠脾 细胞conA和PHA的增殖反应有明显增强，提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能等。泽泻 煎剂能抑制小鼠碳末廓清速率及2，4-二硝基氯苯所致的接触性皮炎，具有凝集素作用等 [5]。海藻提取物能使小鼠脾细胞增殖 活性和腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的功能增强[5]。山楂能明显提高家兔的血 清溶菌酶含量、血清血凝抗体滴度、T淋巴细胞E玫瑰花环形成率及T淋巴细胞转化率。大蒜 能提高ANAE及E花环的活性，可明显增强小鼠的特异性细胞免疫功能和非特异性免疫功能。
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参考文献
1，钟毅，朱秉匡，郑仕富.益寿调脂片抗高脂血症及动脉粥样 硬化的实验研究.中国中西医结合杂志，1998，18(10)：616～619
2，朱秉匡，钟毅，郑仕富.益寿调脂片对血脂和血液流变学作用的影响.中国 实验方剂学杂志，1999，5(3)：40～43
3，李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991.158～161[ ZK)
4，陈勤.抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社，1996.304～371
5，郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用(第四卷).北京：学苑出版社 ，1997.3027～3906
收稿日期：1998-01-02, http://www.100md.com