p27KIP1在骨巨细胞瘤中表达的意义
韩壮 王敏 吕刚 范广宇 姜彦多
摘 要 目的：研究骨巨细胞瘤中p27KIP1的表达，探讨其与骨巨细胞瘤发生病理分级与预后的关系。方法：应用免疫组化S-P法检测40例骨巨细胞瘤石蜡标本中p27KIP1的表达。结果：p27KIP1的表达与骨巨细胞瘤的病理分级呈明显相关。p27KIP1在40例骨巨细胞瘤中总表达阳性率为45.0%(18/40)，其中Ⅰ、Ⅱ级为57.1%(16/28)，Ⅲ级为16.7%(2/12)，组间差异显著。结论：p27KIP1蛋白在Ⅲ级骨巨细胞瘤表达阳性率较Ⅰ、Ⅱ级明显减低，对骨巨细胞瘤的诊断和分级有意义，可作为诊断、分级和预后判定的指标之一。
关键词：p27KIP1蛋白 骨巨细胞瘤 免疫组化
, 百拇医药
骨巨细胞瘤为源于松质骨的溶骨性肿瘤，具有潜在恶性，Ⅲ级骨巨细胞瘤具有明显肉瘤证据[1]。p27KIP1是新近发现的一种肿瘤抑制基因[2，3]，在细胞周期调控中属细胞周期依赖激酶抑制剂(CDKI)，能抑制细胞从G1期到S期的转化，抑制肿瘤发生和进展。本研究通过免疫组化S-P法检测p27KIP1在骨巨细胞瘤中的表达，探讨p27KIP1与骨巨细胞瘤发生和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 40例骨巨细胞瘤石蜡标本取自中国医科大学病理学教研室(1989～1999年)。病理分级：Ⅰ、Ⅱ级28例；Ⅲ级12例。
1.2 方法
1.2.1 试剂：鼠抗人p27单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，生物素标记二抗及链霉素亲生物蛋白-过氧化物酶(S-P液)购自美国Zymed公司，DAB购自美国DAKO公司。
, 百拇医药
1.2.2 染色流程：5 μm切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，PBS洗2 min×3，3% H2O2 10 min，PBS洗2 min×3，10%山羊血清15 min，p27KIP1一抗室温过夜，PBS洗2 min×3，生物素标记二抗15 min，PBS洗2 min×3，DAB显色5～10 min，自来水充分冲洗，苏木精复染，脱水，透明，封固。已知p27表达阳性的肺癌标本作阳性对照，PBS液取代一抗作阴性对照。
1.2.3 染色结果判断及统计学处理：以细胞呈清晰棕色为阳性。高倍镜下观察10个视野计数。按阳性细胞所占比例分：阳性细胞<25%为+；阳性细胞26%～50%为；阳性细胞>50%为；以细胞无棕色或与背景一致为阴性。所得数据应用卡方检验进行统计学分析。
2 结果
p27KIP1蛋白产物的阳性表达部位主要位于细胞核。40例骨巨细胞瘤中有18例p27KIP1表达阳性，总阳性率为45.0%。而且骨巨细胞瘤分级越高，p27KIP1表达越低(表1)。经统计学处理骨巨细胞瘤Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ级之间差异显著(χ2=4.05，P<0.05)。
, 百拇医药
表1 p27KIP1蛋白在骨巨细胞瘤中的表达
Table 1 The expression of p27KIP1 protein in giant
cell tumor of bone
分级
n
p27KIP1阳性
阳性强度
例
(%)
-
, 百拇医药 +
++
+++
Ⅰ、Ⅱ级
Ⅲ级
28
12
16
2
(57.1)
(16.7)
12
10
2
, http://www.100md.com
1
13
1
1
0
3 讨论
细胞周期是由多层次、多因子调控的。一系列周期依赖激酶(CDKs)和周期素(Cyclins)结合，催化细胞周期进程，而周期素依赖激酶抑制剂(CDKIs)作为细胞周期的负调控因子抑制其活性或结合。目前人们将CDKIs按结构分为p16和p21两个家族。p21家族中的p27KIP1是1994年由Polyak等[2]和Toyoshima等[3]发现的分子量为27 kd的热稳定蛋白质，也是新近克隆的肿瘤抑制基因。p27KIP1为非特异CDKI，能以化学计量方式抑制不同的CDK复合物，主要是与Cyclin E-CDK2和Cyclin D-CDK2紧密结合，抑制其活性，从而抑制细胞由G1至S期转化。
, http://www.100md.com
多数学者认为p27KIP1在肿瘤中的改变为蛋白水平的异常，可能途径为转录水平降低和(或)蛋白降解活动提高[4]。Charles等用免疫组化方法测定原发性乳癌中p27KIP1蛋白水平，结果提示p27KIP1与肿瘤分级有关，并影响细胞分化，在肿瘤进展中起重要作用，是一个独立的诊断指标[5]。Marco等应用同样的方法研究一系列不同阶段人类结肠癌标本，得出类似结论，并认为p27KIP1的低水平表达是预后不良的一个独立性指标[6]。
骨巨细胞瘤是一种具有潜在恶性的骨肿瘤，其主要细胞为巨细胞(破骨细胞)和基质细胞，其中Ⅰ型基质细胞是主要的肿瘤细胞。骨巨细胞瘤按严重程度分为3级：Ⅰ级：基质细胞正常，有大量巨细胞；Ⅱ级：基质细胞较多，巨细胞数量减少，有向恶性转化倾向；Ⅲ级：以基质细胞为主，巨细胞数量很少，并有明显肉瘤证据[1]。由于临床工作中骨巨细胞瘤Ⅰ、Ⅱ级有时难以区分，而且临床治疗措施基本相同，所以本实验将Ⅰ、Ⅱ级归为一组。骨巨细胞瘤在临床治疗上由于化疗无效且放疗易引起肉瘤变，故主要以手术为主，因而肿瘤性质的判定对骨巨细胞瘤的临床术式选择和预后判定极为重要。本组结果提示，p27KIP1表达在两组间差异显著，与国外学者对原发性乳腺癌的研究结果相似[7]。p27KIP1作为一种肿瘤抑制基因在肿瘤中的作用是由于其蛋白水平下降而减低了对Cyclin-CDK的抑制作用，从而影响细胞分化和肿瘤进展。本研究中Ⅲ级骨巨细胞瘤p27KIP1低表达，符合p27KIP1作为抑癌基因在肿瘤发生、发展中的作用。故p27KIP1可作为骨巨细胞瘤诊断和病理分级的辅助指标之一，对骨巨细胞瘤的临床诊断和治疗方式的选择有一定意义。通常认为骨巨细胞瘤分级越高，其预后越差。本研究表明骨巨细胞瘤分级越高p27KIP1表达越低，因此p27KIP1低表达可作为判定骨巨细胞瘤预后不良的指标之一。当然，肿瘤预后受多种因素影响，尚需进一步研究。
, 百拇医药
韩壮(中国医科大学第一临床学院骨科，沈阳 110001)
吕刚(中国医科大学第一临床学院骨科，沈阳 110001)
范广宇(中国医科大学第一临床学院骨科，沈阳 110001)
王敏(中国医科大学医学遗传学教研室)
姜彦多(解放军202医院病理科)
参考文献
1，裘法祖.外科学.第四版，北京：人民卫生出版社，1995.931～932
2，Kornella Polyak, Mong-Hong Lee, Hedlye Erdjument-Bromage, et al. Cloning of a cyclin-dependent kinase inhibitor and a potential mediator. Cell, 1994,78:59_66
, http://www.100md.com
3，Hideo Toyoshima, Tony Hunter. p27, a novel inhibitor of G1 cyclin-CDK protein kinase activity, is related to p21. Cell 1994,78:67_74
4，Massimo Loda, Barry Cukor, Sun W Tam, et al. Increased proteasome-dependent degradation of the cyclin-dependent kinase inhibitor in aggressive colorectal carcinoma. Nature Medicine, 1997,3:231_234
5，Charles Catzavelos, Nandita Bhattacharya, Yee C Ung, et al. Decreased levels of the cell-cycle inhibitor p27KIP1 protein: prognostic implication in primary breast cancer. Nature Medicine, 1997,3:227_230
, 百拇医药
6，Marco Ciaparron, Hirofumi Yamamoto, Yao Yao, et al. Localization and expression of p27KIP1 in multistage colorectal carcinogenesis. Cancer Res, 1988,58:114_122
7，Peggy L Porter, Kathleen E Malone, Patrick J Heagerty, et al. Expression of cell-cycle regulators p27KIP1 and cyclin E alone and in combination correlate with survival in young breast cancer patient. Nature Medicine, 1997,3:222_225, http://www.100md.com
摘 要 目的：研究骨巨细胞瘤中p27KIP1的表达，探讨其与骨巨细胞瘤发生病理分级与预后的关系。方法：应用免疫组化S-P法检测40例骨巨细胞瘤石蜡标本中p27KIP1的表达。结果：p27KIP1的表达与骨巨细胞瘤的病理分级呈明显相关。p27KIP1在40例骨巨细胞瘤中总表达阳性率为45.0%(18/40)，其中Ⅰ、Ⅱ级为57.1%(16/28)，Ⅲ级为16.7%(2/12)，组间差异显著。结论：p27KIP1蛋白在Ⅲ级骨巨细胞瘤表达阳性率较Ⅰ、Ⅱ级明显减低，对骨巨细胞瘤的诊断和分级有意义，可作为诊断、分级和预后判定的指标之一。
关键词：p27KIP1蛋白 骨巨细胞瘤 免疫组化
, 百拇医药
骨巨细胞瘤为源于松质骨的溶骨性肿瘤，具有潜在恶性，Ⅲ级骨巨细胞瘤具有明显肉瘤证据[1]。p27KIP1是新近发现的一种肿瘤抑制基因[2，3]，在细胞周期调控中属细胞周期依赖激酶抑制剂(CDKI)，能抑制细胞从G1期到S期的转化，抑制肿瘤发生和进展。本研究通过免疫组化S-P法检测p27KIP1在骨巨细胞瘤中的表达，探讨p27KIP1与骨巨细胞瘤发生和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 40例骨巨细胞瘤石蜡标本取自中国医科大学病理学教研室(1989～1999年)。病理分级：Ⅰ、Ⅱ级28例；Ⅲ级12例。
1.2 方法
1.2.1 试剂：鼠抗人p27单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，生物素标记二抗及链霉素亲生物蛋白-过氧化物酶(S-P液)购自美国Zymed公司，DAB购自美国DAKO公司。
, 百拇医药
1.2.2 染色流程：5 μm切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，PBS洗2 min×3，3% H2O2 10 min，PBS洗2 min×3，10%山羊血清15 min，p27KIP1一抗室温过夜，PBS洗2 min×3，生物素标记二抗15 min，PBS洗2 min×3，DAB显色5～10 min，自来水充分冲洗，苏木精复染，脱水，透明，封固。已知p27表达阳性的肺癌标本作阳性对照，PBS液取代一抗作阴性对照。
1.2.3 染色结果判断及统计学处理：以细胞呈清晰棕色为阳性。高倍镜下观察10个视野计数。按阳性细胞所占比例分：阳性细胞<25%为+；阳性细胞26%～50%为；阳性细胞>50%为；以细胞无棕色或与背景一致为阴性。所得数据应用卡方检验进行统计学分析。
2 结果
p27KIP1蛋白产物的阳性表达部位主要位于细胞核。40例骨巨细胞瘤中有18例p27KIP1表达阳性，总阳性率为45.0%。而且骨巨细胞瘤分级越高，p27KIP1表达越低(表1)。经统计学处理骨巨细胞瘤Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ级之间差异显著(χ2=4.05，P<0.05)。
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表1 p27KIP1蛋白在骨巨细胞瘤中的表达
Table 1 The expression of p27KIP1 protein in giant
cell tumor of bone
分级
n
p27KIP1阳性
阳性强度
例
(%)
-
, 百拇医药 +
++
+++
Ⅰ、Ⅱ级
Ⅲ级
28
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2
(57.1)
(16.7)
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3 讨论
细胞周期是由多层次、多因子调控的。一系列周期依赖激酶(CDKs)和周期素(Cyclins)结合，催化细胞周期进程，而周期素依赖激酶抑制剂(CDKIs)作为细胞周期的负调控因子抑制其活性或结合。目前人们将CDKIs按结构分为p16和p21两个家族。p21家族中的p27KIP1是1994年由Polyak等[2]和Toyoshima等[3]发现的分子量为27 kd的热稳定蛋白质，也是新近克隆的肿瘤抑制基因。p27KIP1为非特异CDKI，能以化学计量方式抑制不同的CDK复合物，主要是与Cyclin E-CDK2和Cyclin D-CDK2紧密结合，抑制其活性，从而抑制细胞由G1至S期转化。
, http://www.100md.com
多数学者认为p27KIP1在肿瘤中的改变为蛋白水平的异常，可能途径为转录水平降低和(或)蛋白降解活动提高[4]。Charles等用免疫组化方法测定原发性乳癌中p27KIP1蛋白水平，结果提示p27KIP1与肿瘤分级有关，并影响细胞分化，在肿瘤进展中起重要作用，是一个独立的诊断指标[5]。Marco等应用同样的方法研究一系列不同阶段人类结肠癌标本，得出类似结论，并认为p27KIP1的低水平表达是预后不良的一个独立性指标[6]。
骨巨细胞瘤是一种具有潜在恶性的骨肿瘤，其主要细胞为巨细胞(破骨细胞)和基质细胞，其中Ⅰ型基质细胞是主要的肿瘤细胞。骨巨细胞瘤按严重程度分为3级：Ⅰ级：基质细胞正常，有大量巨细胞；Ⅱ级：基质细胞较多，巨细胞数量减少，有向恶性转化倾向；Ⅲ级：以基质细胞为主，巨细胞数量很少，并有明显肉瘤证据[1]。由于临床工作中骨巨细胞瘤Ⅰ、Ⅱ级有时难以区分，而且临床治疗措施基本相同，所以本实验将Ⅰ、Ⅱ级归为一组。骨巨细胞瘤在临床治疗上由于化疗无效且放疗易引起肉瘤变，故主要以手术为主，因而肿瘤性质的判定对骨巨细胞瘤的临床术式选择和预后判定极为重要。本组结果提示，p27KIP1表达在两组间差异显著，与国外学者对原发性乳腺癌的研究结果相似[7]。p27KIP1作为一种肿瘤抑制基因在肿瘤中的作用是由于其蛋白水平下降而减低了对Cyclin-CDK的抑制作用，从而影响细胞分化和肿瘤进展。本研究中Ⅲ级骨巨细胞瘤p27KIP1低表达，符合p27KIP1作为抑癌基因在肿瘤发生、发展中的作用。故p27KIP1可作为骨巨细胞瘤诊断和病理分级的辅助指标之一，对骨巨细胞瘤的临床诊断和治疗方式的选择有一定意义。通常认为骨巨细胞瘤分级越高，其预后越差。本研究表明骨巨细胞瘤分级越高p27KIP1表达越低，因此p27KIP1低表达可作为判定骨巨细胞瘤预后不良的指标之一。当然，肿瘤预后受多种因素影响，尚需进一步研究。
, 百拇医药
韩壮(中国医科大学第一临床学院骨科，沈阳 110001)
吕刚(中国医科大学第一临床学院骨科，沈阳 110001)
范广宇(中国医科大学第一临床学院骨科，沈阳 110001)
王敏(中国医科大学医学遗传学教研室)
姜彦多(解放军202医院病理科)
参考文献
1，裘法祖.外科学.第四版，北京：人民卫生出版社，1995.931～932
2，Kornella Polyak, Mong-Hong Lee, Hedlye Erdjument-Bromage, et al. Cloning of a cyclin-dependent kinase inhibitor and a potential mediator. Cell, 1994,78:59_66
, http://www.100md.com
3，Hideo Toyoshima, Tony Hunter. p27, a novel inhibitor of G1 cyclin-CDK protein kinase activity, is related to p21. Cell 1994,78:67_74
4，Massimo Loda, Barry Cukor, Sun W Tam, et al. Increased proteasome-dependent degradation of the cyclin-dependent kinase inhibitor in aggressive colorectal carcinoma. Nature Medicine, 1997,3:231_234
5，Charles Catzavelos, Nandita Bhattacharya, Yee C Ung, et al. Decreased levels of the cell-cycle inhibitor p27KIP1 protein: prognostic implication in primary breast cancer. Nature Medicine, 1997,3:227_230
, 百拇医药
6，Marco Ciaparron, Hirofumi Yamamoto, Yao Yao, et al. Localization and expression of p27KIP1 in multistage colorectal carcinogenesis. Cancer Res, 1988,58:114_122
7，Peggy L Porter, Kathleen E Malone, Patrick J Heagerty, et al. Expression of cell-cycle regulators p27KIP1 and cyclin E alone and in combination correlate with survival in young breast cancer patient. Nature Medicine, 1997,3:222_225, http://www.100md.com