小柴胡汤分解剂抗柯萨奇B3病毒感染及其对心肌炎防治作用的研究
防治作用的研究
王雪峰 郭津津 魏克伦 魏宏斌 段淑敏 崔小岱
摘 要 目的：探讨小柴胡汤分解剂在体外及体内抗柯萨奇B3病毒(CVB3)及保护心肌细胞的作用。方法：用小柴胡汤分解剂通过体外微量细胞培养，作用于被CVB3直接损伤的细胞模型及经腹腔感染CVB3mBalb/c小鼠心肌炎模型，分析不同浓度分解剂的效应。结果：在体外细胞上分解剂A、B液自1∶32稀释度对vero细胞的毒性作用已丧失，至1∶256稀释度时，仍能对抗CVB3对细胞致病变作用。在体内分解剂A、B液治疗组小鼠35只，心肌炎发生率37.14%；而20只对照组小鼠心肌炎发生率59.1%，两者有显著性差异(χ2＝4.68，P<0.05)，在预防给药组更为明显(P<0.01)。结论：小柴胡汤分解剂A、B液在体内、体外均具有抗病毒及保护心肌的作用。
, 百拇医药
关键词：小柴胡汤 柯萨奇病毒 心肌炎
柯萨奇B组病毒(Coxsackie virus B, CVB)有很强的亲心肌性，是病毒性心肌炎的主要致病原[1]。目前中草药的抗病毒活性物质研究已受到重视。作者以往的研究表明小柴胡汤加味治疗病毒性心肌炎具有一定疗效[2,3]。小柴胡汤分解剂提取液在体内、外均有显著的抗病毒及调节细胞免疫作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 病毒：柯萨奇B3病毒(CVB3)由中国预防医学科学院毒种室提供，经vero细胞传 2 代，病毒滴度为TCID5010-6。柯萨奇B3m病毒，Nancy株，Wocdruf亲心肌株，引自首都儿科研究所，经Hela传 3 代，病毒滴度为2×103 PFU/L。
, http://www.100md.com
1.1.2 动物及细胞来源：5～6 周龄、雄性Balb/c小鼠 254 只，购自中国医学科学院动物中心，vero细胞引自中国预防医学科学院病毒所。
1.1.3 小柴胡汤分解剂(简称分解剂)用水提醇沉淀及正己烷、氯仿萃取，由辽宁中医学院中药化学分析教研室研制，经军事医学研究所60Co照射灭菌。分解剂浓度均为含生药0.1 g/ml(1%)。分解剂A液为小柴胡汤提取液；B液为只保留君臣药小柴胡汤提取液；C液为去君臣药不完全小柴胡汤提取液。
1.2 方法
1.2.1 分解剂体外抗病毒作用的测定：
1.2.1.1 分解剂对培养细胞毒性测定：将分解剂A、B、C液分别用改良伊格尔培养基(modified Eagle medium, MEM)作连续对倍稀释至1∶1024，共 8 个稀释度，同时做正常vero细胞对照。将板在37℃、5%CO2环境下培养，观察不同稀释度分解剂对细胞贴壁及生长的影响。选择出对细胞无毒性反应的最高浓度为分解剂最高无毒剂量。
, 百拇医药
1.2.1.2 分解剂在细胞外抑制病毒实验：将分解剂A、B、C液从1∶8起用MEM进行连续对倍稀释至 1∶1024，共 8 个浓度。分别与已知TCID50的CVB3病毒等量混合，37℃作用1 h，在 96 孔细胞培养测定板上，每个分解剂稀释度感染 4 个细胞培养孔。同法设病毒对照孔、分解剂对照孔和vero细胞对照孔。随后放入5%CO2孵育箱，37℃培养 36 h，观察记录结果，计算半数组织培养感染量(TCID50)，重复实验 3 次，记录结果。
1.2.1.3 分解剂增强细胞抗病毒作用实验：预防组配制含药细胞营养液A、B、C液及无药细胞培养液。将vero细胞悬液分别加入以上组织培养液中进行细胞培养，观察药物对细胞生长及对该细胞抗病毒感染能力的影响。细胞长成单层后，在细胞单层上滴定CVB3病毒，记录结果。治疗组在长成单层细胞上滴定CVB3病毒TCID50。每个病毒稀释度感染 8 个细胞孔，细胞对照组用Eagle液模拟感染，同时放37℃吸附 1 h后，将每个病毒稀释度的 4 孔细胞加入含药细胞维持液，另外 4 孔加入无药细胞维持液，各组同时放在37℃、5%CO2孵育培养，观察 36 h，记录结果。
, 百拇医药
1.2.2 分解剂体内抗病毒作用观察：
将 254 只小鼠随机分为 8 组，其中预防组(A、B、C液)、治疗组(A、B、C液)和模型组采用腹腔接种0.2 mlCVB3以诱导小鼠病毒性心肌炎模型。正常对照组同法接种0.2 ml不含病毒的Eagle液，预防组在接种前2 d给药。治疗组在接种病毒后1 h 以0.15 ml/10 g灌胃给药，每日1次。病毒对照组及正常组小鼠给等量生理盐水灌胃。连续观察小鼠表现，分别在3、5、7、10、15 d乙醚麻醉活杀各分解剂组6只小鼠。各对照组3只小鼠，对在实验治疗期死亡小鼠亦收取心脏检测。心脏巨检及心脏做组织学检查，HE染色，光学显微镜下观察各组小鼠心肌组织病变程度及心肌炎发生率。
2 结果
2.1 分解剂增强细胞的抗病毒作用
当分解剂A、B液均稀释至1∶32，即3.125 mg/ml以下时，对细胞的毒性消失，在预防组发现分解剂B液对细胞生长有促进作用。当1∶32分解剂A、B液自无细胞毒性浓度开始直至1∶256时即浓度为3.125～0.406mg/ml时细胞死亡率明显低于病毒感染对照组，均能抑制CVB3对vero细胞的致病作用。
, 百拇医药
2.2 分解剂细胞外抑制病毒作用
分解剂A、B、C液分别经1∶32、1∶32、1∶64稀释后，培养的vero细胞毒性消失，无细胞毒性的浓度下，分解剂A、B分别呈现了显著的抗CVB3作用，C液抗CVB3作用不明显。A、B液在1∶128的稀释度下仍能消除CVB3对细胞致病变作用，同时发现分解剂A、B液对细胞有保护作用。药物对细胞无毒剂量开始对病毒有明显抑制作用，同时发现分解剂A、B液对细胞有保护作用。药物对细胞无毒剂量开始对病毒有明显抑制作用，但提前1个浓度(1∶16)，药物与病毒同时作用于细胞，实验表现细胞略变大，无脱落，形态未发生任何改变。再提高1个浓度(1∶8)，表现出药物毒性反应，但均未表现出病毒致细胞变小变圆及脱落病变。该实验重复3次均得到同样结果(表1)。
2.3 分解剂体内抗病毒作用结果
分解剂治疗组A、B液组中少数小鼠出现发病症状， 2 个组各死亡3只，生存率为91.4%(32/35)。镜检有轻微心肌炎发生；C液组也出现发病症状，死亡5只，生存率为85.7%(30/35)，镜检心肌炎灶性改变；对照组死亡7只，生存率为63.6%(14/22)，心肌炎呈弥漫性分布大面积灶性坏死。A、B、C液 3 组生存率与病毒对照的差异有显著差异(χ2＝8.85，P<0.01)，心肌炎病变发生率也有显著差异(χ2＝4.86，P<0.05)，而A、B液生存率与C液组生存率及心肌炎发生率比较无明显差异，分别为(χ2＝1.625，χ2＝2.52，P<0.05)(见表2)。显示出药物对心肌的保护作用，这种保护作用在预防组中更明显。
, 百拇医药
表1 不同浓度分解剂A、B、C液抗CVB3作用
Table 1 The effects of divided agents with different doses
分 组
分解剂稀释度
1∶8
1∶16
1∶32
1∶64
1∶128
1∶256
1∶516
, 百拇医药
1∶1024
CVB3 感染A液
⊙
○
-
-
-
+
+
+
B液
⊙
○
, 百拇医药
-
-
-
+
+
C液
+
+
+
+
+
+
+
+
, 百拇医药
分解剂对照A液
⊙
⊙
-
-
-
-
-
-
B液
⊙
⊙
-
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
C液
⊙
⊙
⊙
-
-
-
-
-
CVB3 对照
, http://www.100md.com
+
+
+
+
+
+
+
+
vero 细胞对照
-
-
-
-
-
, http://www.100md.com
-
-
-
“+”出现细胞病变(细胞变小变圆)，无抗病毒作用；“-”无细胞病变，抗病毒阳性；
“○”细胞略变大，形态无改变，无脱落；“⊙”出现药物对细胞毒性的反应表2 分解剂体内抗病毒保护心肌作用
Table 2 The divided agents’ effects on anti-virus and myocardium protection
分 组
动物数
生存率(%)
, 百拇医药
心肌病变发生率
心肌病变程度
病变鼠数
%
心肌坏死
炎性细胞浸润
治疗组A液
35
91.4(32/35)
13
37.14
+～
, 百拇医药
+～
B液
35
91.4(32/35)
13
37.14
+～
+～
, 百拇医药
C液
35
85.7(30/35)
17
48.6～
～
, 百拇医药
病毒对照组
22
63.6(14/22)
13
59.1
预防组A液
35
91.4(32/35)
, 百拇医药 21
31.4**
+～
+～
B液
35
97.1(34/35)
9
25.7**
, 百拇医药
+
+
C液
35
68.6(24/35)
15
42.8*～
, 百拇医药
病毒对照组
22
54.5(12/22)
15
68.2
心室段横切面+孤立病灶：<5个小灶性坏死散病灶；>5个片状坏死；* P<0.05，** P<0.01
, 百拇医药
3 讨论
小柴胡汤广泛应用于抗炎及免疫调节[4]，对乙型肝炎病毒及艾滋病病毒复制有抑制作用[5]和非特异性保护细胞作用[6]。小柴胡汤具有和解少阳、通达表里、扶正祛邪的作用。为了验证药效和进一步筛选有效药物，将小柴胡汤采用不同提取方法，观察药物有效成分。将其分解剂A、B、C液先后制备了不同浓度的分解剂型，在对CVB3体外直接杀伤细胞模型及CVB3体内感染心肌细胞模型基础实验中，初步确定了合适的药物浓度及剂量。
结果表明，分解剂A、B液分别与正常细胞组、病毒细胞组、病毒感染细胞组进行实验对照，在药物无毒剂量以下3.125～0.406 mg/ml，对病毒感染细胞均有明显保护作用，提高一个药物浓度A、B液单独作用于细胞有毒性反应，但与病毒同时作用于细胞，竟未表现出对细胞的毒性及病毒致细胞病变作用，其机制有待于研究。Balb/c雄性小鼠对CVB3特别敏感，接毒后全部发病，CVB3有很强的嗜心肌性，经病理学证实发生实验性心肌炎与人类心肌炎类似。因此，生存率、心肌炎病复发率及病变程度，可作为药物治疗效果观察的综合指标。分解剂预防组中A、B液两组分别有3只、2只小鼠克服了病毒的致死作用而存活，提示分解剂A、B液有治愈病毒感染的可能性。在提高生存率和减少心肌炎病发生中，预防组优于治疗组，预防给药有利于促进机体特异性免疫充分发挥。因此，通过药物治疗和自身免疫调节作用两者抗病毒保护心肌可能性是存在的。
, 百拇医药
国家自然科学基金资助项目，39670869
王雪峰(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
郭津津(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
魏克伦(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
魏宏斌(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
段淑敏(中国预防医学科学院病毒所)
崔小岱(首都儿科研究所免疫生化研究室)
参考文献
1，杨英珍，金佩英，李李，等.小鼠急慢性柯萨奇B3病毒性心肌炎的病理改变.中华医学杂志，1991， 71(11)： 639～640
, 百拇医药
2，王雪峰，严文初，郭振武，等.柴琥清心饮为主对小儿病毒性心肌炎左心功能及外周血T细胞亚群的影响.中国中西医结合杂志，1997， 17(2)： 73～75
3，王雪峰，张晓梅.从少阳三焦枢机论治小儿急性肠道病毒心肌炎探要.中医函授杂志，1995，3： 42～43
4，Kumazawa Y, Takinoto H, Mima S, et al. Activaion of medicine peritoneal macrophages by intraperitoneal administration of a traditional Chinese herbal medicine, Xiao-chaihu-tang, Int J Immunopharmac, 1988, 10: 395-403
5，张志军，李钟英.日本对小柴胡汤的研究.中医杂志，1993， 34(10)： 626～628
6，雨谷荣，获原幸夫.药理.化学からみた小柴胡汤のすべて(3)免疫调节作用ついて.现代东洋医学，1989，10(3)： 74～85, http://www.100md.com
王雪峰 郭津津 魏克伦 魏宏斌 段淑敏 崔小岱
摘 要 目的：探讨小柴胡汤分解剂在体外及体内抗柯萨奇B3病毒(CVB3)及保护心肌细胞的作用。方法：用小柴胡汤分解剂通过体外微量细胞培养，作用于被CVB3直接损伤的细胞模型及经腹腔感染CVB3mBalb/c小鼠心肌炎模型，分析不同浓度分解剂的效应。结果：在体外细胞上分解剂A、B液自1∶32稀释度对vero细胞的毒性作用已丧失，至1∶256稀释度时，仍能对抗CVB3对细胞致病变作用。在体内分解剂A、B液治疗组小鼠35只，心肌炎发生率37.14%；而20只对照组小鼠心肌炎发生率59.1%，两者有显著性差异(χ2＝4.68，P<0.05)，在预防给药组更为明显(P<0.01)。结论：小柴胡汤分解剂A、B液在体内、体外均具有抗病毒及保护心肌的作用。
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关键词：小柴胡汤 柯萨奇病毒 心肌炎
柯萨奇B组病毒(Coxsackie virus B, CVB)有很强的亲心肌性，是病毒性心肌炎的主要致病原[1]。目前中草药的抗病毒活性物质研究已受到重视。作者以往的研究表明小柴胡汤加味治疗病毒性心肌炎具有一定疗效[2,3]。小柴胡汤分解剂提取液在体内、外均有显著的抗病毒及调节细胞免疫作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 病毒：柯萨奇B3病毒(CVB3)由中国预防医学科学院毒种室提供，经vero细胞传 2 代，病毒滴度为TCID5010-6。柯萨奇B3m病毒，Nancy株，Wocdruf亲心肌株，引自首都儿科研究所，经Hela传 3 代，病毒滴度为2×103 PFU/L。
, http://www.100md.com
1.1.2 动物及细胞来源：5～6 周龄、雄性Balb/c小鼠 254 只，购自中国医学科学院动物中心，vero细胞引自中国预防医学科学院病毒所。
1.1.3 小柴胡汤分解剂(简称分解剂)用水提醇沉淀及正己烷、氯仿萃取，由辽宁中医学院中药化学分析教研室研制，经军事医学研究所60Co照射灭菌。分解剂浓度均为含生药0.1 g/ml(1%)。分解剂A液为小柴胡汤提取液；B液为只保留君臣药小柴胡汤提取液；C液为去君臣药不完全小柴胡汤提取液。
1.2 方法
1.2.1 分解剂体外抗病毒作用的测定：
1.2.1.1 分解剂对培养细胞毒性测定：将分解剂A、B、C液分别用改良伊格尔培养基(modified Eagle medium, MEM)作连续对倍稀释至1∶1024，共 8 个稀释度，同时做正常vero细胞对照。将板在37℃、5%CO2环境下培养，观察不同稀释度分解剂对细胞贴壁及生长的影响。选择出对细胞无毒性反应的最高浓度为分解剂最高无毒剂量。
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1.2.1.2 分解剂在细胞外抑制病毒实验：将分解剂A、B、C液从1∶8起用MEM进行连续对倍稀释至 1∶1024，共 8 个浓度。分别与已知TCID50的CVB3病毒等量混合，37℃作用1 h，在 96 孔细胞培养测定板上，每个分解剂稀释度感染 4 个细胞培养孔。同法设病毒对照孔、分解剂对照孔和vero细胞对照孔。随后放入5%CO2孵育箱，37℃培养 36 h，观察记录结果，计算半数组织培养感染量(TCID50)，重复实验 3 次，记录结果。
1.2.1.3 分解剂增强细胞抗病毒作用实验：预防组配制含药细胞营养液A、B、C液及无药细胞培养液。将vero细胞悬液分别加入以上组织培养液中进行细胞培养，观察药物对细胞生长及对该细胞抗病毒感染能力的影响。细胞长成单层后，在细胞单层上滴定CVB3病毒，记录结果。治疗组在长成单层细胞上滴定CVB3病毒TCID50。每个病毒稀释度感染 8 个细胞孔，细胞对照组用Eagle液模拟感染，同时放37℃吸附 1 h后，将每个病毒稀释度的 4 孔细胞加入含药细胞维持液，另外 4 孔加入无药细胞维持液，各组同时放在37℃、5%CO2孵育培养，观察 36 h，记录结果。
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1.2.2 分解剂体内抗病毒作用观察：
将 254 只小鼠随机分为 8 组，其中预防组(A、B、C液)、治疗组(A、B、C液)和模型组采用腹腔接种0.2 mlCVB3以诱导小鼠病毒性心肌炎模型。正常对照组同法接种0.2 ml不含病毒的Eagle液，预防组在接种前2 d给药。治疗组在接种病毒后1 h 以0.15 ml/10 g灌胃给药，每日1次。病毒对照组及正常组小鼠给等量生理盐水灌胃。连续观察小鼠表现，分别在3、5、7、10、15 d乙醚麻醉活杀各分解剂组6只小鼠。各对照组3只小鼠，对在实验治疗期死亡小鼠亦收取心脏检测。心脏巨检及心脏做组织学检查，HE染色，光学显微镜下观察各组小鼠心肌组织病变程度及心肌炎发生率。
2 结果
2.1 分解剂增强细胞的抗病毒作用
当分解剂A、B液均稀释至1∶32，即3.125 mg/ml以下时，对细胞的毒性消失，在预防组发现分解剂B液对细胞生长有促进作用。当1∶32分解剂A、B液自无细胞毒性浓度开始直至1∶256时即浓度为3.125～0.406mg/ml时细胞死亡率明显低于病毒感染对照组，均能抑制CVB3对vero细胞的致病作用。
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2.2 分解剂细胞外抑制病毒作用
分解剂A、B、C液分别经1∶32、1∶32、1∶64稀释后，培养的vero细胞毒性消失，无细胞毒性的浓度下，分解剂A、B分别呈现了显著的抗CVB3作用，C液抗CVB3作用不明显。A、B液在1∶128的稀释度下仍能消除CVB3对细胞致病变作用，同时发现分解剂A、B液对细胞有保护作用。药物对细胞无毒剂量开始对病毒有明显抑制作用，同时发现分解剂A、B液对细胞有保护作用。药物对细胞无毒剂量开始对病毒有明显抑制作用，但提前1个浓度(1∶16)，药物与病毒同时作用于细胞，实验表现细胞略变大，无脱落，形态未发生任何改变。再提高1个浓度(1∶8)，表现出药物毒性反应，但均未表现出病毒致细胞变小变圆及脱落病变。该实验重复3次均得到同样结果(表1)。
2.3 分解剂体内抗病毒作用结果
分解剂治疗组A、B液组中少数小鼠出现发病症状， 2 个组各死亡3只，生存率为91.4%(32/35)。镜检有轻微心肌炎发生；C液组也出现发病症状，死亡5只，生存率为85.7%(30/35)，镜检心肌炎灶性改变；对照组死亡7只，生存率为63.6%(14/22)，心肌炎呈弥漫性分布大面积灶性坏死。A、B、C液 3 组生存率与病毒对照的差异有显著差异(χ2＝8.85，P<0.01)，心肌炎病变发生率也有显著差异(χ2＝4.86，P<0.05)，而A、B液生存率与C液组生存率及心肌炎发生率比较无明显差异，分别为(χ2＝1.625，χ2＝2.52，P<0.05)(见表2)。显示出药物对心肌的保护作用，这种保护作用在预防组中更明显。
, 百拇医药
表1 不同浓度分解剂A、B、C液抗CVB3作用
Table 1 The effects of divided agents with different doses
分 组
分解剂稀释度
1∶8
1∶16
1∶32
1∶64
1∶128
1∶256
1∶516
, 百拇医药
1∶1024
CVB3 感染A液
⊙
○
-
-
-
+
+
+
B液
⊙
○
, 百拇医药
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+
+
C液
+
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分解剂对照A液
⊙
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B液
⊙
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, http://www.100md.com
-
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C液
⊙
⊙
⊙
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CVB3 对照
, http://www.100md.com
+
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vero 细胞对照
-
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, http://www.100md.com
-
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-
“+”出现细胞病变(细胞变小变圆)，无抗病毒作用；“-”无细胞病变，抗病毒阳性；
“○”细胞略变大，形态无改变，无脱落；“⊙”出现药物对细胞毒性的反应表2 分解剂体内抗病毒保护心肌作用
Table 2 The divided agents’ effects on anti-virus and myocardium protection
分 组
动物数
生存率(%)
, 百拇医药
心肌病变发生率
心肌病变程度
病变鼠数
%
心肌坏死
炎性细胞浸润
治疗组A液
35
91.4(32/35)
13
37.14
+～
, 百拇医药
+～
B液
35
91.4(32/35)
13
37.14
+～
+～
, 百拇医药
C液
35
85.7(30/35)
17
48.6
～～, 百拇医药
病毒对照组
22
63.6(14/22)
13
59.1
预防组A液
35
91.4(32/35)
, 百拇医药 21
31.4**
+～
+～
B液
35
97.1(34/35)
9
25.7**
, 百拇医药
+
+
C液
35
68.6(24/35)
15
42.8*
～, 百拇医药
病毒对照组
22
54.5(12/22)
15
68.2
心室段横切面+孤立病灶：
<5个小灶性坏死散病灶；>5个片状坏死；* P<0.05，** P<0.01, 百拇医药
3 讨论
小柴胡汤广泛应用于抗炎及免疫调节[4]，对乙型肝炎病毒及艾滋病病毒复制有抑制作用[5]和非特异性保护细胞作用[6]。小柴胡汤具有和解少阳、通达表里、扶正祛邪的作用。为了验证药效和进一步筛选有效药物，将小柴胡汤采用不同提取方法，观察药物有效成分。将其分解剂A、B、C液先后制备了不同浓度的分解剂型，在对CVB3体外直接杀伤细胞模型及CVB3体内感染心肌细胞模型基础实验中，初步确定了合适的药物浓度及剂量。
结果表明，分解剂A、B液分别与正常细胞组、病毒细胞组、病毒感染细胞组进行实验对照，在药物无毒剂量以下3.125～0.406 mg/ml，对病毒感染细胞均有明显保护作用，提高一个药物浓度A、B液单独作用于细胞有毒性反应，但与病毒同时作用于细胞，竟未表现出对细胞的毒性及病毒致细胞病变作用，其机制有待于研究。Balb/c雄性小鼠对CVB3特别敏感，接毒后全部发病，CVB3有很强的嗜心肌性，经病理学证实发生实验性心肌炎与人类心肌炎类似。因此，生存率、心肌炎病复发率及病变程度，可作为药物治疗效果观察的综合指标。分解剂预防组中A、B液两组分别有3只、2只小鼠克服了病毒的致死作用而存活，提示分解剂A、B液有治愈病毒感染的可能性。在提高生存率和减少心肌炎病发生中，预防组优于治疗组，预防给药有利于促进机体特异性免疫充分发挥。因此，通过药物治疗和自身免疫调节作用两者抗病毒保护心肌可能性是存在的。
, 百拇医药
国家自然科学基金资助项目，39670869
王雪峰(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
郭津津(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
魏克伦(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
魏宏斌(中国医科大学第二临床学院儿科，沈阳 110003)
段淑敏(中国预防医学科学院病毒所)
崔小岱(首都儿科研究所免疫生化研究室)
参考文献
1，杨英珍，金佩英，李李，等.小鼠急慢性柯萨奇B3病毒性心肌炎的病理改变.中华医学杂志，1991， 71(11)： 639～640
, 百拇医药
2，王雪峰，严文初，郭振武，等.柴琥清心饮为主对小儿病毒性心肌炎左心功能及外周血T细胞亚群的影响.中国中西医结合杂志，1997， 17(2)： 73～75
3，王雪峰，张晓梅.从少阳三焦枢机论治小儿急性肠道病毒心肌炎探要.中医函授杂志，1995，3： 42～43
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