Budd-Chiari综合征——两个家系调查
作者：冯博 徐克 姜宏 付伟能 李红 郭敏 刘小倩 王志明
单位：冯博 徐克 李红 郭敏 刘小倩(110001 沈阳，中国医科大学附属第一医院放射科)；姜宏(解放军第四六三医院放射科)；付伟能(中国医科大学遗传学教研室)；王志明(锦州医学院附属第一医院放射科)
关键词：肝静脉血栓形成；突变，FⅤ；Leiden；聚合酶链反应
中华血液学杂志000910
【摘要】 目的 探讨A、B两个家系家族性Budd-Chiari综合征(BCS)相关病因。方法 对4例BCS先证者及其家系成员进行血管造影、超声波检查、病因调查及因子Ⅴ Leiden(FⅤ∶Q506)突变分析。结果 4例BCS先证者的诊断经血管造影证实。超声波检查AⅢ11,16诊断为BCS。A家系10名成员有下肢静脉曲张。6例BCS中，4例(AⅢ7,11,15，BⅡ10)FⅤ Leiden突变阳性。两家系成员中，AⅡ2、BⅢ5突变阳性，但未患BCS。系谱分析两家系FⅤ Leiden突变符合孟德尔遗传规律，与BCS具有较高的吻合度。结论 FⅤ Leiden突变是家族性BCS发病的危险因素之一。下肢静脉曲张可能是家族性BCS的诱发因素之一。
, http://www.100md.com
A report of two Chinese familial Budd-Chiari syndrome
FENG Bo XU Ke JIANG Hong
(Department of Radiology,the First Affiliated Hospital of China Medical University,Shenyang 110001，China)
【Abstract】 Objective To investigate the etiology of two Chinese familial Budd-Chiari syndrome(BCS). Method Four patients with familial BCS (from A and B families),and the other 41 family members were detected by angiography, ultrasound Dopler, etiology analysis and Factor Ⅴ Leiden(FvL) mutation analysis. Result Four BCS patients were proved by angiography，2 by ultra sound Dopler in family A. Ten members in family A were varicosis in low extremeties. FvL mutation was detected in 4 of 6 patients and 2 normal family members. AⅡ2，AⅢ7,11,15， BⅡ10 and BⅢ5 had FvL mutation. The FvL mutations were compatible with Mendel hereditary law. Conclusion FvL mutation may be one of main risk factors and varicosis in low extremeties may be another risk factors for familial BCS.
, 百拇医药
【Key words】 Hepatic vein thrombosis； Mutation,factor Ⅴ Leiden; Polymerase chain reaction
近年来，有关Budd-Chiari 综合征(BCS)的报告比较多见，但家族性BCS报告尚少，确切病因并不十分清楚[1，2]。我们对两个BCS家系进行了病因调查及FⅤ 1691G→A突变(即FⅤ Leiden突变 ，FⅤ∶Q506突变)分析，初步探讨了家族性BCS的病因。
对象和方法
1 病例 4例BCS先证者均为女性，来自A、B家系。A家系姐妹年龄为28岁、40岁。B家系姐妹33岁、43岁。临床表现为腹胀、腹水、肝脏肿大、胸腹壁静脉曲张、下肢静脉曲张等。调查A家系4代，男14人，女15人，年龄8～94岁；B家系3代，男9人，女7人，年龄1～67岁。
, 百拇医药
2 方法
2.1 血管造影及彩超普查 4例 BCS先证者行血管造影，41名家系成员进行彩超普查。
2.2 病因调查(包括实验室检查) 外伤、术后感染、骨髓增生异常综合症、血小板增多症等血液疾患。
2.3 FⅤ∶Q506突变分析参照Bertina等方法[3]。饱和盐析法提取DNA。上游引物：5′-TGCCAGTGCTTAACAAGACCA-3′，下游引物：5′-TGTTATCACACTGGTAGCTAA-3′，使扩增片段包括FⅤ基因1691位点，扩增片段长度为267bp。
PCR扩增条件：取各样本DNA 0.5μl(2μg/μl)，PCR反应总体积为25μl，PCR缓冲液10×2.5μl，dNTP 1.8μl，Taq DNA合成酶0.4μl(5U/μl),引物0.8μl (20pmol/L)。91℃ 40s(变性),55℃ 40s(复性),71℃ 2min(延伸),共36个循环。
, 百拇医药
FⅤ∶Q506的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性突变检测：反应总体积20μl。缓冲液 2.0μl，MnL Ⅰ内切酶0.1μl(50U/μl)，PCR产物 10μl，蒸馏水 7.9μl。产物置37℃水浴反应1h。聚丙烯酰胺凝胶电泳，判断FⅤ 1691位点是否存在点突变。
结果
1 血管造影 AⅢ7及BⅡ3为下腔静脉节段性闭塞(SOVC)，AⅢ15及BⅡ10为下腔静脉膜性闭塞(MOVC)(图1)。彩超普查：AⅢ11及AⅢ16又诊为MOVC。
M：Marker；1，2，3，4，5，6分别：AⅡ2、AⅢ15、AⅢ7、AⅢ11、BⅡ10、BⅢ5；
, 百拇医药
267bp表示尚未完全酶切的PCR产物；200 bp、167 bp、67 bp、37 bp表示酶切后产物
图1 PCR产物经MnL Ⅰ酶切后的聚丙烯酰胺凝胶电泳图
2 病因调查 A家系先证者AⅢ7,15及8名家系成员有程度不同的下肢静脉曲张。系谱分析符合常染色体显性遗传。
3 家系分析 经系谱分析，AⅢ7,11,15FⅤ∶Q506突变由其母亲遗传而来，BⅢ5由其母亲(BⅡ10)而来。两家系FⅤ∶Q506突变符合孟德尔遗传规律，与BCS发病具有较高的吻合度(图1，2)。
图2 A家系FⅤ∶Q506突变与BCS发病系谱
, 百拇医药
4 FⅤ∶Q506突变检测结果 两家系先证者中 3例(AⅢ7,15，BⅡ10)FⅤ∶Q506突变阳性。彩超诊断的BCS中，AⅢ11突变阳性。两家系成员中，AⅡ2、BⅢ5有FⅤ∶Q506突变(图3，表1)，均为杂合子。
图3 B家系FⅤ∶Q506突变与BCS发病系谱
表1 A、B家系中BCS及FⅤ∶Q506突变阳性者情况 编号
性别
年龄(岁)
, 百拇医药
来源
BCS
FⅤ∶Q506突变
AⅡ2
女
70
A家母亲
-
+
AⅢ15
女
28
A家八姐
, 百拇医药
+
+
AⅢ7
女
40
A家四姐
+
+
AⅢ11
女
35
A家六姐
+
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+
BⅡ10
女
33
B家五姐
+
+
BⅡ3
女
43
B家二姐
+
-
, 百拇医药
BⅢ5
男
1
B家五姐之子
-
+
AⅢ16
女
23
A家老姨之女
+
-
讨论 家族性BCS病因尚不清楚。有报道认为是先天发育畸形[1]或静脉血栓[2]而造成。我们的研究中A家系存在下肢静脉曲张聚集性，经系谱分析符合常染色体显性遗传特征，并与BCS有较高的吻合率。表明二者间可能有相关的发病基础，也可能下肢静脉曲张诱发了BCS的形成。
, 百拇医药
有关FⅤ∶Q506突变与BCS的相关性，国外有较多报道。原因在于西方国家BCS多由静脉血栓造成，而20%～40%的静脉血栓与FⅤ∶Q506突变产生的抗活化的蛋白C现象(APCR)相关[4]，但由于人种与地域的差别，中国人群FⅤ∶Q506突变报道极少。在我们的研究中，两个家系具有明显的BCS和FⅤ∶Q506突变聚集性，FⅤ∶Q506突变与BCS发病密切相关，二者间具有很高的一致性。表明FⅤ∶Q506突变与中国人家族性BCS有相关性。由于FⅤ∶Q506突变可产生APCR，并造成血液高凝状态及静脉血栓，因此，FⅤ∶Q506突变可能是中国人家族性BCS发病的危险因素之一。
AⅢ16、BⅡ3虽诊断为BCS，但并不存在FⅤ∶Q506突变；AⅡ2、 BⅢ5虽有FⅤ∶Q506突变，却并未发病。因此，BCS的发病可能与多个基因缺陷有关。据文献报道，中国人群中抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、纤溶酶原(Plg)等遗传性缺乏较多见[6]，家族性BCS发病与上述遗传缺陷是否有关，尚待进一步研究。
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基金项目：本课题受国家“九五”攻关项目资助(969070102)
参 考 文 献
1，egin RD,Glickson M,Varstending A, et al.Familial Budd-Chiari syndrome due to membranous obstruction of the right hepatic vein treated with transluminal angioplasty. Am Gastroenterol.1990, 85:94-97.
2，Riemens SC,Haagsma EB,Kok T,et al. Familial occurrence of membranous obstruction of the inferior vena cava:arguments in favor of a congenital etiology. J Hepatol,1995,22:404-409.
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3，Bertina RM,Koeleman PC,Koster T,et al.Mutation in blood coagulation factor Ⅴ associated with resistance to activated protein C. Nature， 1994， 369:64-67.
4，Mahmoud AE,Elias E,Beauchamp N,et al.Prevalence of the factor Ⅴ Leiden mutation in hepatic and portal vein thrombosis.Gut, 1997, 40:798-800.
5，Liu HW,Kwong YL,Lam CK,et al.High incidence of thrombophilia detected in Chinese patients with venous thrombosis.Thromb Haemost,1994,71:416-419.
(收稿日期：1999-11-29), 百拇医药
单位：冯博 徐克 李红 郭敏 刘小倩(110001 沈阳，中国医科大学附属第一医院放射科)；姜宏(解放军第四六三医院放射科)；付伟能(中国医科大学遗传学教研室)；王志明(锦州医学院附属第一医院放射科)
关键词：肝静脉血栓形成；突变，FⅤ；Leiden；聚合酶链反应
中华血液学杂志000910
【摘要】 目的 探讨A、B两个家系家族性Budd-Chiari综合征(BCS)相关病因。方法 对4例BCS先证者及其家系成员进行血管造影、超声波检查、病因调查及因子Ⅴ Leiden(FⅤ∶Q506)突变分析。结果 4例BCS先证者的诊断经血管造影证实。超声波检查AⅢ11,16诊断为BCS。A家系10名成员有下肢静脉曲张。6例BCS中，4例(AⅢ7,11,15，BⅡ10)FⅤ Leiden突变阳性。两家系成员中，AⅡ2、BⅢ5突变阳性，但未患BCS。系谱分析两家系FⅤ Leiden突变符合孟德尔遗传规律，与BCS具有较高的吻合度。结论 FⅤ Leiden突变是家族性BCS发病的危险因素之一。下肢静脉曲张可能是家族性BCS的诱发因素之一。
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A report of two Chinese familial Budd-Chiari syndrome
FENG Bo XU Ke JIANG Hong
(Department of Radiology,the First Affiliated Hospital of China Medical University,Shenyang 110001，China)
【Abstract】 Objective To investigate the etiology of two Chinese familial Budd-Chiari syndrome(BCS). Method Four patients with familial BCS (from A and B families),and the other 41 family members were detected by angiography, ultrasound Dopler, etiology analysis and Factor Ⅴ Leiden(FvL) mutation analysis. Result Four BCS patients were proved by angiography，2 by ultra sound Dopler in family A. Ten members in family A were varicosis in low extremeties. FvL mutation was detected in 4 of 6 patients and 2 normal family members. AⅡ2，AⅢ7,11,15， BⅡ10 and BⅢ5 had FvL mutation. The FvL mutations were compatible with Mendel hereditary law. Conclusion FvL mutation may be one of main risk factors and varicosis in low extremeties may be another risk factors for familial BCS.
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【Key words】 Hepatic vein thrombosis； Mutation,factor Ⅴ Leiden; Polymerase chain reaction
近年来，有关Budd-Chiari 综合征(BCS)的报告比较多见，但家族性BCS报告尚少，确切病因并不十分清楚[1，2]。我们对两个BCS家系进行了病因调查及FⅤ 1691G→A突变(即FⅤ Leiden突变 ，FⅤ∶Q506突变)分析，初步探讨了家族性BCS的病因。
对象和方法
1 病例 4例BCS先证者均为女性，来自A、B家系。A家系姐妹年龄为28岁、40岁。B家系姐妹33岁、43岁。临床表现为腹胀、腹水、肝脏肿大、胸腹壁静脉曲张、下肢静脉曲张等。调查A家系4代，男14人，女15人，年龄8～94岁；B家系3代，男9人，女7人，年龄1～67岁。
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2 方法
2.1 血管造影及彩超普查 4例 BCS先证者行血管造影，41名家系成员进行彩超普查。
2.2 病因调查(包括实验室检查) 外伤、术后感染、骨髓增生异常综合症、血小板增多症等血液疾患。
2.3 FⅤ∶Q506突变分析参照Bertina等方法[3]。饱和盐析法提取DNA。上游引物：5′-TGCCAGTGCTTAACAAGACCA-3′，下游引物：5′-TGTTATCACACTGGTAGCTAA-3′，使扩增片段包括FⅤ基因1691位点，扩增片段长度为267bp。
PCR扩增条件：取各样本DNA 0.5μl(2μg/μl)，PCR反应总体积为25μl，PCR缓冲液10×2.5μl，dNTP 1.8μl，Taq DNA合成酶0.4μl(5U/μl),引物0.8μl (20pmol/L)。91℃ 40s(变性),55℃ 40s(复性),71℃ 2min(延伸),共36个循环。
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FⅤ∶Q506的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性突变检测：反应总体积20μl。缓冲液 2.0μl，MnL Ⅰ内切酶0.1μl(50U/μl)，PCR产物 10μl，蒸馏水 7.9μl。产物置37℃水浴反应1h。聚丙烯酰胺凝胶电泳，判断FⅤ 1691位点是否存在点突变。
结果
1 血管造影 AⅢ7及BⅡ3为下腔静脉节段性闭塞(SOVC)，AⅢ15及BⅡ10为下腔静脉膜性闭塞(MOVC)(图1)。彩超普查：AⅢ11及AⅢ16又诊为MOVC。
M：Marker；1，2，3，4，5，6分别：AⅡ2、AⅢ15、AⅢ7、AⅢ11、BⅡ10、BⅢ5；
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267bp表示尚未完全酶切的PCR产物；200 bp、167 bp、67 bp、37 bp表示酶切后产物
图1 PCR产物经MnL Ⅰ酶切后的聚丙烯酰胺凝胶电泳图
2 病因调查 A家系先证者AⅢ7,15及8名家系成员有程度不同的下肢静脉曲张。系谱分析符合常染色体显性遗传。
3 家系分析 经系谱分析，AⅢ7,11,15FⅤ∶Q506突变由其母亲遗传而来，BⅢ5由其母亲(BⅡ10)而来。两家系FⅤ∶Q506突变符合孟德尔遗传规律，与BCS发病具有较高的吻合度(图1，2)。
图2 A家系FⅤ∶Q506突变与BCS发病系谱
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4 FⅤ∶Q506突变检测结果 两家系先证者中 3例(AⅢ7,15，BⅡ10)FⅤ∶Q506突变阳性。彩超诊断的BCS中，AⅢ11突变阳性。两家系成员中，AⅡ2、BⅢ5有FⅤ∶Q506突变(图3，表1)，均为杂合子。
图3 B家系FⅤ∶Q506突变与BCS发病系谱
表1 A、B家系中BCS及FⅤ∶Q506突变阳性者情况 编号
性别
年龄(岁)
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来源
BCS
FⅤ∶Q506突变
AⅡ2
女
70
A家母亲
-
+
AⅢ15
女
28
A家八姐
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AⅢ7
女
40
A家四姐
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+
AⅢ11
女
35
A家六姐
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BⅡ10
女
33
B家五姐
+
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BⅡ3
女
43
B家二姐
+
-
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BⅢ5
男
1
B家五姐之子
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AⅢ16
女
23
A家老姨之女
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讨论 家族性BCS病因尚不清楚。有报道认为是先天发育畸形[1]或静脉血栓[2]而造成。我们的研究中A家系存在下肢静脉曲张聚集性，经系谱分析符合常染色体显性遗传特征，并与BCS有较高的吻合率。表明二者间可能有相关的发病基础，也可能下肢静脉曲张诱发了BCS的形成。
, 百拇医药
有关FⅤ∶Q506突变与BCS的相关性，国外有较多报道。原因在于西方国家BCS多由静脉血栓造成，而20%～40%的静脉血栓与FⅤ∶Q506突变产生的抗活化的蛋白C现象(APCR)相关[4]，但由于人种与地域的差别，中国人群FⅤ∶Q506突变报道极少。在我们的研究中，两个家系具有明显的BCS和FⅤ∶Q506突变聚集性，FⅤ∶Q506突变与BCS发病密切相关，二者间具有很高的一致性。表明FⅤ∶Q506突变与中国人家族性BCS有相关性。由于FⅤ∶Q506突变可产生APCR，并造成血液高凝状态及静脉血栓，因此，FⅤ∶Q506突变可能是中国人家族性BCS发病的危险因素之一。
AⅢ16、BⅡ3虽诊断为BCS，但并不存在FⅤ∶Q506突变；AⅡ2、 BⅢ5虽有FⅤ∶Q506突变，却并未发病。因此，BCS的发病可能与多个基因缺陷有关。据文献报道，中国人群中抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、纤溶酶原(Plg)等遗传性缺乏较多见[6]，家族性BCS发病与上述遗传缺陷是否有关，尚待进一步研究。
, http://www.100md.com
基金项目：本课题受国家“九五”攻关项目资助(969070102)
参 考 文 献
1，egin RD,Glickson M,Varstending A, et al.Familial Budd-Chiari syndrome due to membranous obstruction of the right hepatic vein treated with transluminal angioplasty. Am Gastroenterol.1990, 85:94-97.
2，Riemens SC,Haagsma EB,Kok T,et al. Familial occurrence of membranous obstruction of the inferior vena cava:arguments in favor of a congenital etiology. J Hepatol,1995,22:404-409.
, http://www.100md.com
3，Bertina RM,Koeleman PC,Koster T,et al.Mutation in blood coagulation factor Ⅴ associated with resistance to activated protein C. Nature， 1994， 369:64-67.
4，Mahmoud AE,Elias E,Beauchamp N,et al.Prevalence of the factor Ⅴ Leiden mutation in hepatic and portal vein thrombosis.Gut, 1997, 40:798-800.
5，Liu HW,Kwong YL,Lam CK,et al.High incidence of thrombophilia detected in Chinese patients with venous thrombosis.Thromb Haemost,1994,71:416-419.
(收稿日期：1999-11-29), 百拇医药