内源性哇巴因在大鼠和恒河猴部分组织中的分布
内源性哇巴因在大鼠和恒河猴部分组织中的分布
曲毅 鲍岚 吕卓人
摘 要：目的 观察内源性哇巴因(EO)在SD大鼠和恒河猴肾上腺、垂体和下丘脑组织的分布. 方法 采用高度特异的抗哇巴因兔血清，用免疫组织化学ABC法观察EO在大鼠和恒河猴肾上腺等组织的分布. 结果 在大鼠和恒河猴的肾上腺皮质内侧网状带细胞中可以观察到丰富的哇巴因免疫反应阳性物质，垂体后叶有较弱的哇巴因免疫反应阳性物质，而下丘脑并未发现有哇巴因免疫反应物质存在. 结论 哇巴因免疫反应阳性物质主要存在于SD大鼠和恒河猴的肾上腺皮质网状带，为EO作为一种新的肾上腺皮质激素提供了形态学依据.
关键词：内源性哇巴因；肾上腺皮质激素；免疫组织化学
0 引言
内源性哇巴因( endogenous ouabain, EO )是一种存在于包括人在内的哺乳动物组织和血浆中的体液因子, 具有调节水钠代谢、心肌收缩和血管张力等生理作用，在高血压和心力衰竭等心血管疾病的发生和发展中起着重要作用[ 1 ]. 近年来许多研究结果表明肾上腺是EO的主要来源，提示EO可能是一种由肾上腺皮质分泌的新类固醇激素[ 2 ]，但目前尚缺乏关于EO在哺乳动物肾上腺等组织分布的形态学证据. 本研究采用高度特异的抗哇巴因兔血清，用免疫组织化学ABC法对EO在SD大鼠和恒河猴肾上腺、垂体和下丘脑组织的分布进行观察，为确定EO是一种新的肾上腺皮质激素提供形态学依据.
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1 材料和方法
1.1 试剂及标本处理 抗哇巴因兔血清由美国Maryland大学医学院高血压研究中心Hamlyn教授提供[ 3 ]，该抗体与地高辛的交叉反应率为5.2%，与醛固酮、皮质醇和脱氧皮质酮等肾上腺皮质激素的交叉反应率均小于0.01%. 免疫组织化学ABC试剂盒为美国Vector公司产品(PK6100). 哇巴因及二甲基联苯胺均购自美国Sigma公司. 10只成年雄性SD大鼠(体质量180～240 g，本校实验动物研究中心提供)用戊巴比妥钠ip麻醉(50 mg.kg-1)，先经左心室灌注37℃生理盐水和40 g.L-1多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(0.1 mol.L-1 PB, pH 7.4)各50 mL，再灌注4℃同样的固定液300 mL后，立即取肾上腺、垂体和下丘脑组织块，置入同样固定液中后固定1.5 h，再浸入200 g.L-1的蔗糖PB溶液中24 h (4℃). -20℃恒冷箱切片机中做连续冰冻切片，片厚12～20 μm，贴在经明胶处理的载玻片上备用. 3只成年雄性恒河猴(体质量3～4 kg，本校实验动物研究中心提供)，经上述步骤制备肾上腺组织冰冻切片.
, 百拇医药
1.2 免疫组织化学ABC染色 按免疫组织化学ABC法进行染色：50 mL.L-1正常羊血清孵育后，加入抗哇巴因兔血清(1∶6000)，4℃孵育48 h；第二抗体为生物素标记的羊抗兔IgG抗体(1∶200)，室温下孵育3 h；ABC复合物中(1∶100)室温下孵育3 h，用二甲基联苯胺-硫酸镍铵加强法进行显色[4]. 然后干燥、脱水、二甲苯透明、DPX封片，Nikon Microphot-FX显微镜下观察, 照相.
1.3 免疫组织化学吸收实验 将10-6 mol.L-1哇巴因与工作浓度(1∶6000)的抗哇巴因兔血清混匀，4℃孵育24 h，然后离心(3000 r.min-1, 15 min)，取上清液作为第一抗体进行染色，以此检验兔抗血清免疫标记的特异性. 阴性对照实验用正常兔血清替代第一抗体进行组化染色.
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2 结果
在SD大鼠肾上腺皮质内侧可以观察到丰富的呈蓝黑色哇巴因免疫反应阳性物质(Fig 1). 这些阳性物主要存在于皮质内侧的网状带，呈点状和条索状分布于细胞中(Fig 2). 在皮质外侧球状带、束状带以及髓质均未发现哇巴因免疫反应阳性物质的存在. 吸收实验呈免疫反应阴性(Fig 3). 垂体后叶细胞中可以观察到较弱的哇巴因免疫反应阳性物质，而垂体前叶和中间叶中没有观察到哇巴因免疫反应阳性物质的存在(Fig 4). 在下丘脑各区未观察到哇巴因免疫反应阳性物质存在(Fig 5). 在恒河猴的肾上腺皮质网状带细胞中同样可以观察到哇巴因免疫反应阳性物质，而在皮质球状带、束状带以及髓质也未发现有阳性物(Fig 6).
图 1 哇巴因免疫反应阳性物质在SD大鼠肾上腺皮质的分布
, 百拇医药
Fig 1 Distribution of ouabain-LI in the adrenal cortex of SD rat ×60
图 2 哇巴因免疫反应阳性物质(箭头所示)在SD大鼠肾上腺皮质网状带细胞中的分布
Fig 2 Distribution of positive ouabain-LI (arrow) in the zone reticularis of adrenal cortex of SD rat .adrenal medulla ×400
, 百拇医药
图 3 用10-6mol.L-1哇巴因做的大鼠肾上腺皮质吸收实验
Fig 3 Immunoabsorption test in the adrenal cortex of SD rat using10-6 mol.L-1 authentic ouabain ×100
图 4 哇巴因免疫反应阳性物质(箭头所示)在SD大鼠垂体的分布
Fig 4 Distribution of ouabain-LI (arrow) in the pituitary of SD rat
, 百拇医药
A: anterior, P: posterior. ×40. Magnify of the posterior pituitary ×100
图 5 SD大鼠下丘脑哇巴因免疫染色阴性
Fig 5 No ouabain-LI exist in the hypothalamus of SD rat third brain ventricle (3V) ×40
图 6 哇巴因免疫反应阳性物质(箭头所示)在恒河猴肾上腺皮质的分布
, 百拇医药
Fig 6 Distribution of ouabain-LI (arrowheads) in the adrenal cortex of Macaca mulatta .adrenal medulla ×40
3 讨论
自20世纪60年代提出哺乳动物体内存在着“第三因子”以来，大量研究显示这种内源性钠泵抑制物(endogenous sodium pump inhibitor, ESPI)在水钠代谢和血压调节等方面具有重要的病理生理作用. 1991年Hamlyn等[5]率先提出这种ESPI与植物来源的哇巴因无法区别，认为其就是哇巴因或哇巴因极其相似的异构体，即内源性哇巴因. 近年来一系列研究表明EO可能是一种新的肾上腺皮质激素[2], 为了明确EO在哺乳动物肾上腺组织的分布，本研究采用特异的兔抗哇巴因抗血清，用免疫组织化学ABC法，对EO在SD大鼠和恒河猴肾上腺、垂体等组织的分布进行定位观察，发现哇巴因免疫反应阳性物质主要存在于大鼠和猴的肾上腺皮质网状带细胞中，而在皮质球状带和髓质并未发现有阳性染色.
, 百拇医药
长期以来关于哺乳动物血浆EO的来源存在争议. 近年来采用3H-哇巴因放免法的研究发现包括人在内的几种哺乳动物组织中肾上腺EO含量最高；切除正常大鼠的两侧肾上腺后血浆EO浓度较对照组明显下降[1]；清醒状态狗的肾上腺静脉血EO浓度比动脉高5倍，且动静脉间EO的浓度梯度持续存在[6]. 这些资料均显示肾上腺是哺乳动物血浆EO的主要来源，最近从人和牛肾上腺皮质细胞培养液中检测到内源性哇巴因的存在，为肾上腺皮质是EO的主要来源提供了直接证据[7,8]. 用10-6 mol.L-1哇巴因做吸收实验可使肾上腺皮质网状带细胞出现的免疫反应阳性物质显著减弱或消失，表明该抗体具有高度特异性，从而为EO在肾上腺皮质的准确定位提供了保证. 本研究发现哇巴因免疫反应阳性物质在肾上腺皮质的分布为这种新的肾上腺皮质激素提供了形态学直接依据，也为进一步确定EO在肾上腺皮质的生物合成和分泌调节规律提供有价值的线索.
, 百拇医药
垂体对肾上腺皮质功能的维持和调节具有十分重要的作用[9]. 研究显示垂体EO含量仅次于肾上腺组织，10-8 mol.L-1 促肾上腺皮质激素(ACTH)能明显刺激牛肾上腺皮质培养细胞分泌哇巴因[8]，用地塞米松抑制垂体功能可使健康志愿者血浆EO和皮质醇水平明显下降[10]. 本研究还观察到在垂体后叶有较弱的哇巴因免疫反应阳性物质存在，而垂体前叶和中间叶中没有阳性物. 目前对EO在垂体分布的生理意义了解甚少，推测EO的分布特点可能与垂体参与肾上腺皮质激素的分泌调节以及下丘脑相关核团的作用有关[10].
有资料显示下丘脑可能是EO的另一个来源. 从下丘脑已纯化出一种钠泵抑制物即下丘脑抑制因子(hypothalamus inhibitory factor, HIF)[2], 最近Kawamura等[11]证实HIF的化学结构与哇巴因一致，HIF就是EO 或哇巴因的异构体. 本研究中在下丘脑并没有发现哇巴因免疫反应阳性物质存在，可能与EO 在下丘脑含量甚微[5](约是肾上腺含量的6%)，受免疫组织化学检测方法灵敏度的限制，故有必要采用更为敏感的方法加以证实.
, http://www.100md.com
总之，本研究采用免疫组织化学方法，以一种新的视角观察了EO 在组织含量较高的肾上腺、垂体、下丘脑的分布，发现哇巴因免疫反应阳性物质主要存在于SD大鼠和恒河猴肾上腺皮质网状带，为EO作为一种新的肾上腺皮质激素提供了形态学基础.
致 谢 第四军医大学全军神经科学研究所张 旭教授、林英华和焦西英老师给予技术指导和热心帮助.
基金项目：国家重点科技项目攻关计划立项资助，陕西省科研发展计划项目(97K12-G1)
作者简介：曲 毅(1970-)，男(汉族)，山东省烟台市人. 西安医科大学心血管病学专业博士生(导师吕卓人)，主治医师. Tel.(029)5252911 Ext.2421
曲毅(西安医科大学第一附属医院心内科，陕西 西安 710061)
鲍岚(第四军医大学航空航天医学系航空航天生理学教研室，陕西 西安 710033)
, http://www.100md.com
吕卓人(西安医科大学第一附属医院心内科，陕西 西安 710061)
参考文献：
[1] Hamlyn JM, Lu ZR, Manunta P et al. Observations on the nature, biosynthesis, secretion and significance of endogenous ouabain[J]. Clin Exp Hypertens, 1998,20(5):523-533.
[2] 吕卓人，丁国良，杨鼎颐. 一种新的肾上腺皮质激素——哇巴因[J]. 西安医科大学学报, 1996,17(1):129-130.
[3] Harris DN, Clark MA, Fisher JF et al. Development of an immunassay for endogenous digitalis-like factor[J]. Hypertension, 1991;17(6 Pt 2):936-943.
, 百拇医药
[4] Shu SY, Ju G, Fan LZ. The glucose oxidase-DAB-nickel method in peroxidase histochemistry of the nervous system[J]. Neurosci Lett, 1988; 85(2): 169
[5] Hamlyn JM, Blaustein M, Bove S et al. Identification and characterization of an ouabain-like compound from human plasma[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1991;88(14):6259-6263.
[6] Boulanger BR, Lilly MP, Hamlyn JM et al. Ouabain is secreted by the adrenal gland in awake dogs[J]. Am J Physiol, 1993;264(3 Pt 1):E413-419.
, http://www.100md.com
[7] Doris PA, Jenkins LA, Stocco DM. Is ouabain an authentic endogenous mammalian substance derived from the adrenal gland[J]? Hypertension, 1994;23(5):632-638.
[8] 曲 毅, 吕卓人, 葛 衡 et al. 内源性哇巴因分泌调节特性的基础研究[J]. 中国病理生理杂志, 1998;14(7):913-914.
[9] Quinn QJ, Williams GH. Regulation of aldosterone secretion[A]. In:James VHT.ed. The Adrenal Gland[M]. 3rd ed. New York: RavenPress, 1992:159-189.
[10] Vinge E, Erfurth EM, Odar-cederlof I. Immunoreactive endogenous digoxin-like substances:Plasma levels are dependent on the hypothalamic-pituitary-adrenal axis for release and on kidney function for elimination[J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1993;22(Suppl 2):S112-113.
[11] Kawamura A, Guo J, Itagki Y et al. On the structure of endogenous ouabain[J]. Proc Nalt Acad Sci USA, 1999; 96(12): 6654-6659., http://www.100md.com
曲毅 鲍岚 吕卓人
摘 要：目的 观察内源性哇巴因(EO)在SD大鼠和恒河猴肾上腺、垂体和下丘脑组织的分布. 方法 采用高度特异的抗哇巴因兔血清，用免疫组织化学ABC法观察EO在大鼠和恒河猴肾上腺等组织的分布. 结果 在大鼠和恒河猴的肾上腺皮质内侧网状带细胞中可以观察到丰富的哇巴因免疫反应阳性物质，垂体后叶有较弱的哇巴因免疫反应阳性物质，而下丘脑并未发现有哇巴因免疫反应物质存在. 结论 哇巴因免疫反应阳性物质主要存在于SD大鼠和恒河猴的肾上腺皮质网状带，为EO作为一种新的肾上腺皮质激素提供了形态学依据.
关键词：内源性哇巴因；肾上腺皮质激素；免疫组织化学
0 引言
内源性哇巴因( endogenous ouabain, EO )是一种存在于包括人在内的哺乳动物组织和血浆中的体液因子, 具有调节水钠代谢、心肌收缩和血管张力等生理作用，在高血压和心力衰竭等心血管疾病的发生和发展中起着重要作用[ 1 ]. 近年来许多研究结果表明肾上腺是EO的主要来源，提示EO可能是一种由肾上腺皮质分泌的新类固醇激素[ 2 ]，但目前尚缺乏关于EO在哺乳动物肾上腺等组织分布的形态学证据. 本研究采用高度特异的抗哇巴因兔血清，用免疫组织化学ABC法对EO在SD大鼠和恒河猴肾上腺、垂体和下丘脑组织的分布进行观察，为确定EO是一种新的肾上腺皮质激素提供形态学依据.
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1 材料和方法
1.1 试剂及标本处理 抗哇巴因兔血清由美国Maryland大学医学院高血压研究中心Hamlyn教授提供[ 3 ]，该抗体与地高辛的交叉反应率为5.2%，与醛固酮、皮质醇和脱氧皮质酮等肾上腺皮质激素的交叉反应率均小于0.01%. 免疫组织化学ABC试剂盒为美国Vector公司产品(PK6100). 哇巴因及二甲基联苯胺均购自美国Sigma公司. 10只成年雄性SD大鼠(体质量180～240 g，本校实验动物研究中心提供)用戊巴比妥钠ip麻醉(50 mg.kg-1)，先经左心室灌注37℃生理盐水和40 g.L-1多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(0.1 mol.L-1 PB, pH 7.4)各50 mL，再灌注4℃同样的固定液300 mL后，立即取肾上腺、垂体和下丘脑组织块，置入同样固定液中后固定1.5 h，再浸入200 g.L-1的蔗糖PB溶液中24 h (4℃). -20℃恒冷箱切片机中做连续冰冻切片，片厚12～20 μm，贴在经明胶处理的载玻片上备用. 3只成年雄性恒河猴(体质量3～4 kg，本校实验动物研究中心提供)，经上述步骤制备肾上腺组织冰冻切片.
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1.2 免疫组织化学ABC染色 按免疫组织化学ABC法进行染色：50 mL.L-1正常羊血清孵育后，加入抗哇巴因兔血清(1∶6000)，4℃孵育48 h；第二抗体为生物素标记的羊抗兔IgG抗体(1∶200)，室温下孵育3 h；ABC复合物中(1∶100)室温下孵育3 h，用二甲基联苯胺-硫酸镍铵加强法进行显色[4]. 然后干燥、脱水、二甲苯透明、DPX封片，Nikon Microphot-FX显微镜下观察, 照相.
1.3 免疫组织化学吸收实验 将10-6 mol.L-1哇巴因与工作浓度(1∶6000)的抗哇巴因兔血清混匀，4℃孵育24 h，然后离心(3000 r.min-1, 15 min)，取上清液作为第一抗体进行染色，以此检验兔抗血清免疫标记的特异性. 阴性对照实验用正常兔血清替代第一抗体进行组化染色.
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2 结果
在SD大鼠肾上腺皮质内侧可以观察到丰富的呈蓝黑色哇巴因免疫反应阳性物质(Fig 1). 这些阳性物主要存在于皮质内侧的网状带，呈点状和条索状分布于细胞中(Fig 2). 在皮质外侧球状带、束状带以及髓质均未发现哇巴因免疫反应阳性物质的存在. 吸收实验呈免疫反应阴性(Fig 3). 垂体后叶细胞中可以观察到较弱的哇巴因免疫反应阳性物质，而垂体前叶和中间叶中没有观察到哇巴因免疫反应阳性物质的存在(Fig 4). 在下丘脑各区未观察到哇巴因免疫反应阳性物质存在(Fig 5). 在恒河猴的肾上腺皮质网状带细胞中同样可以观察到哇巴因免疫反应阳性物质，而在皮质球状带、束状带以及髓质也未发现有阳性物(Fig 6).
图 1 哇巴因免疫反应阳性物质在SD大鼠肾上腺皮质的分布
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Fig 1 Distribution of ouabain-LI in the adrenal cortex of SD rat ×60
图 2 哇巴因免疫反应阳性物质(箭头所示)在SD大鼠肾上腺皮质网状带细胞中的分布
Fig 2 Distribution of positive ouabain-LI (arrow) in the zone reticularis of adrenal cortex of SD rat .adrenal medulla ×400
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图 3 用10-6mol.L-1哇巴因做的大鼠肾上腺皮质吸收实验
Fig 3 Immunoabsorption test in the adrenal cortex of SD rat using10-6 mol.L-1 authentic ouabain ×100
图 4 哇巴因免疫反应阳性物质(箭头所示)在SD大鼠垂体的分布
Fig 4 Distribution of ouabain-LI (arrow) in the pituitary of SD rat
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A: anterior, P: posterior. ×40. Magnify of the posterior pituitary ×100
图 5 SD大鼠下丘脑哇巴因免疫染色阴性
Fig 5 No ouabain-LI exist in the hypothalamus of SD rat third brain ventricle (3V) ×40
图 6 哇巴因免疫反应阳性物质(箭头所示)在恒河猴肾上腺皮质的分布
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Fig 6 Distribution of ouabain-LI (arrowheads) in the adrenal cortex of Macaca mulatta .adrenal medulla ×40
3 讨论
自20世纪60年代提出哺乳动物体内存在着“第三因子”以来，大量研究显示这种内源性钠泵抑制物(endogenous sodium pump inhibitor, ESPI)在水钠代谢和血压调节等方面具有重要的病理生理作用. 1991年Hamlyn等[5]率先提出这种ESPI与植物来源的哇巴因无法区别，认为其就是哇巴因或哇巴因极其相似的异构体，即内源性哇巴因. 近年来一系列研究表明EO可能是一种新的肾上腺皮质激素[2], 为了明确EO在哺乳动物肾上腺组织的分布，本研究采用特异的兔抗哇巴因抗血清，用免疫组织化学ABC法，对EO在SD大鼠和恒河猴肾上腺、垂体等组织的分布进行定位观察，发现哇巴因免疫反应阳性物质主要存在于大鼠和猴的肾上腺皮质网状带细胞中，而在皮质球状带和髓质并未发现有阳性染色.
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长期以来关于哺乳动物血浆EO的来源存在争议. 近年来采用3H-哇巴因放免法的研究发现包括人在内的几种哺乳动物组织中肾上腺EO含量最高；切除正常大鼠的两侧肾上腺后血浆EO浓度较对照组明显下降[1]；清醒状态狗的肾上腺静脉血EO浓度比动脉高5倍，且动静脉间EO的浓度梯度持续存在[6]. 这些资料均显示肾上腺是哺乳动物血浆EO的主要来源，最近从人和牛肾上腺皮质细胞培养液中检测到内源性哇巴因的存在，为肾上腺皮质是EO的主要来源提供了直接证据[7,8]. 用10-6 mol.L-1哇巴因做吸收实验可使肾上腺皮质网状带细胞出现的免疫反应阳性物质显著减弱或消失，表明该抗体具有高度特异性，从而为EO在肾上腺皮质的准确定位提供了保证. 本研究发现哇巴因免疫反应阳性物质在肾上腺皮质的分布为这种新的肾上腺皮质激素提供了形态学直接依据，也为进一步确定EO在肾上腺皮质的生物合成和分泌调节规律提供有价值的线索.
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垂体对肾上腺皮质功能的维持和调节具有十分重要的作用[9]. 研究显示垂体EO含量仅次于肾上腺组织，10-8 mol.L-1 促肾上腺皮质激素(ACTH)能明显刺激牛肾上腺皮质培养细胞分泌哇巴因[8]，用地塞米松抑制垂体功能可使健康志愿者血浆EO和皮质醇水平明显下降[10]. 本研究还观察到在垂体后叶有较弱的哇巴因免疫反应阳性物质存在，而垂体前叶和中间叶中没有阳性物. 目前对EO在垂体分布的生理意义了解甚少，推测EO的分布特点可能与垂体参与肾上腺皮质激素的分泌调节以及下丘脑相关核团的作用有关[10].
有资料显示下丘脑可能是EO的另一个来源. 从下丘脑已纯化出一种钠泵抑制物即下丘脑抑制因子(hypothalamus inhibitory factor, HIF)[2], 最近Kawamura等[11]证实HIF的化学结构与哇巴因一致，HIF就是EO 或哇巴因的异构体. 本研究中在下丘脑并没有发现哇巴因免疫反应阳性物质存在，可能与EO 在下丘脑含量甚微[5](约是肾上腺含量的6%)，受免疫组织化学检测方法灵敏度的限制，故有必要采用更为敏感的方法加以证实.
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总之，本研究采用免疫组织化学方法，以一种新的视角观察了EO 在组织含量较高的肾上腺、垂体、下丘脑的分布，发现哇巴因免疫反应阳性物质主要存在于SD大鼠和恒河猴肾上腺皮质网状带，为EO作为一种新的肾上腺皮质激素提供了形态学基础.
致 谢 第四军医大学全军神经科学研究所张 旭教授、林英华和焦西英老师给予技术指导和热心帮助.
基金项目：国家重点科技项目攻关计划立项资助，陕西省科研发展计划项目(97K12-G1)
作者简介：曲 毅(1970-)，男(汉族)，山东省烟台市人. 西安医科大学心血管病学专业博士生(导师吕卓人)，主治医师. Tel.(029)5252911 Ext.2421
曲毅(西安医科大学第一附属医院心内科，陕西 西安 710061)
鲍岚(第四军医大学航空航天医学系航空航天生理学教研室，陕西 西安 710033)
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参考文献：
[1] Hamlyn JM, Lu ZR, Manunta P et al. Observations on the nature, biosynthesis, secretion and significance of endogenous ouabain[J]. Clin Exp Hypertens, 1998,20(5):523-533.
[2] 吕卓人，丁国良，杨鼎颐. 一种新的肾上腺皮质激素——哇巴因[J]. 西安医科大学学报, 1996,17(1):129-130.
[3] Harris DN, Clark MA, Fisher JF et al. Development of an immunassay for endogenous digitalis-like factor[J]. Hypertension, 1991;17(6 Pt 2):936-943.
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[4] Shu SY, Ju G, Fan LZ. The glucose oxidase-DAB-nickel method in peroxidase histochemistry of the nervous system[J]. Neurosci Lett, 1988; 85(2): 169
[5] Hamlyn JM, Blaustein M, Bove S et al. Identification and characterization of an ouabain-like compound from human plasma[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1991;88(14):6259-6263.
[6] Boulanger BR, Lilly MP, Hamlyn JM et al. Ouabain is secreted by the adrenal gland in awake dogs[J]. Am J Physiol, 1993;264(3 Pt 1):E413-419.
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[7] Doris PA, Jenkins LA, Stocco DM. Is ouabain an authentic endogenous mammalian substance derived from the adrenal gland[J]? Hypertension, 1994;23(5):632-638.
[8] 曲 毅, 吕卓人, 葛 衡 et al. 内源性哇巴因分泌调节特性的基础研究[J]. 中国病理生理杂志, 1998;14(7):913-914.
[9] Quinn QJ, Williams GH. Regulation of aldosterone secretion[A]. In:James VHT.ed. The Adrenal Gland[M]. 3rd ed. New York: RavenPress, 1992:159-189.
[10] Vinge E, Erfurth EM, Odar-cederlof I. Immunoreactive endogenous digoxin-like substances:Plasma levels are dependent on the hypothalamic-pituitary-adrenal axis for release and on kidney function for elimination[J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1993;22(Suppl 2):S112-113.
[11] Kawamura A, Guo J, Itagki Y et al. On the structure of endogenous ouabain[J]. Proc Nalt Acad Sci USA, 1999; 96(12): 6654-6659., http://www.100md.com