普伐他汀调节血脂及对血小板、红细胞膜脂肪酸成份影响的研究
作者：华嘉临 李肖蓉 邵力正 王强
单位：(214002 无锡市第一人民医院)
关键词：普伐他汀；高脂血症；血小板；红细胞；膜脂肪酸成份
江苏医药001024 【摘要】 目的 观察普伐他汀(P)调脂疗效及对血小板、红细胞膜必需脂肪酸成份及多不饱和脂肪酸(PUFA)平衡的影响。方法 对30例原发性高脂血症者应用P 12周。治疗前后分别测定血脂、血小板及红细胞膜花生四烯酸(AA)、廿碳五烯酸(EPA)、廿二碳六烯酸(DHA)。结果 治疗后血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白B100(ApoB100)明显降低(P<0.05～0.001)；血小板、红细胞膜AA/EPA、AA/DHA比值亦明显降低(P<0.05～0.01)，且与TG、TC、LDL-C降低均呈显著正相关(P<0.001)。结论 P除有效调脂外，还能影响血小板、红细胞膜脂肪酸成份及其比率，对防治动脉粥样硬化有重要意义。
, 百拇医药
大量研究表明，血浆脂质代谢紊乱及血小板功能异常在动脉粥样硬化(AS)的发生中起重要作用。Watanabe等认为血小板膜脂肪酸成份的改变可影响血小板功能[1，2]。生物膜脂肪酸成份改变可导致膜流动性改变，后者与许多疾病的发生有关[3]。n-3系PUFA以EPA、DHA为代表，n-6系PUFA以AA为代表，是人体必需脂肪酸，为人体细胞膜的重要组成成份。n-3/n-6脂肪酸的平衡是维持人体健康的重要因素[4]。本研究对原发性高脂血症者应用P调节血脂，并观察其是否对血小板、红细胞膜脂肪酸成份、脂肪酸平稳有影响，以探讨脂代谢紊乱与膜脂肪酸成份变化之间的相互关系。
对象与方法
一、原发性高脂血症诊断：近1～2个月内未服用任何影响血脂的药物，在饮食控制下两次(间隔≥2周)测空腹(>12小时以上)TC≥5.95mmol/L，TG≥2.26mmol/L。符合上述一项或一项以上并排除由糖尿病、甲状腺功能失常、痛风、肝、胆、胰和肾脏等疾患引起的继发性高脂血症。
, 百拇医药
二、对象：1995～1998年本院门诊病例，男20例，女10例，平均年龄53.1±6.9(33～71)岁。体质指数(BMI)≤24者11例，>24者19例。
三、受试者服用P(10mg/日×12周)治疗前及治疗后6周、12周分别测定血清TC及TG(比色法)、HDL-C及LDL-C(均相测定法中的选择性反应法)[5]、ApoB100及Lp(a)(散射比浊法)、血糖及肝、肾功能。
四、血小板悬液制备：肘静脉取血，ACD抗凝，1?000Rpm离心15分钟取上层富血小板血浆400μl，再以3?000Rpm离心沉淀15分钟获压积血小板，CGS缓冲液洗涤血小板三次，以Hepes-Tyrode缓冲液制成经洗涤的血小板悬液。
五、红细胞及红细胞膜制备：取ACD抗凝血，2?500Rpm离心5分钟，去上层富血小板血浆，下层再经2?500Rpm离心15分钟，得压积红细胞。用生理盐水洗涤三次，配成经洗涤的红细胞悬液，再加蒸馏水1.5ml混匀置-18℃使其冻结，然后再温解冻，使红细胞破裂，离心沉淀2?500Rpm5分钟，去上层液后用蒸馏水洗涤三次得红细胞膜。
, http://www.100md.com
六、气相色谱法测定血小板、红细胞膜脂肪酸成份：应用HP5880FID检测器，取分离的血小板，红细胞样品加入预先配制好的含BHT(0.05W/V)的氯仿-甲醇(2∶1)溶液2ml，超声抽提15分钟，加入无水硫酸钠0.5克，转至20ml玻璃管内，置于37℃恒温水浴中，用纯氮吹干，再加入14%三氟化硼-乙醚甲醇2ml，密闭置于80℃水浴30min后取出，冷却后加入正已烷(1ml)萃取三次，合并萃取液，加入无水硫酸钠0.5克，转移出已烷溶液，氮气吹干，用正已烷0.5ml，每次进样1μl。用面积归一化法计算。
七、统计学处理：采用SPSS软件包，均数比较用t检验，不同指标间用线性相关分析。结果
一、30例患者服药前后血脂变化见表1。
二、P对血小板、红细胞膜脂肪酸成份的影响见表2。对血小板、红细胞膜脂肪酸比值的影响见表3。
, 百拇医药 表1 普伐他汀对30例高脂血症患者血脂的影响(
±s) 时间
TG(mmol/L)
TC(mmol/L)
LDL-C(mmol/L)
HDL-C(mmol/L)
ApoAl(g/L)
ApoB100(g/L)
Lp(a)(mg/L)
治前
3.26±2.47
, 百拇医药
6.23±1.29
2.89±0.51
1.19±0.34
1.25±0.28
1.24±0.39
206±210
6周
2.31±1.36**
5.49±1.07**
2.52±0.38**
1.37±1.30
, http://www.100md.com
1.53±0.23**
1.19±0.29
213±244
12周
2.11±1.21**
5.58±1.45**
2.65±0.49**
1.58±2.03
1.31±0.18
1.11±0.24*
, 百拇医药
180±261
与治疗前比*P<0.05， **P<0.01表2 普伐他汀对30例高脂血症患者血小板、红细胞膜脂肪酸成份的影响(±s) 时间
血小板脂肪酸
红细胞膜脂肪酸
AA
EPA
DHA
AA
EPA
DHA
, 百拇医药
治前
5.05±2.50
0.26±0.16
0.35±0.22
6.60±1.84
0.71±0.31
1.36±0.66
6周
5.34±1.27
0.43±0.20**
0.57±0.28**
, http://www.100md.com
6.44±1.20
1.00±0.37*
1.90±0.85*
12周
5.58±1.75
0.53±0.18**
0.81±0.23**
6.19±1.16
1.03±0.29**
2.03±0.85**
, 百拇医药
与治疗前比*P<0.05 **P<0.001表3 普伐他汀对30例高脂血症患者血小板、红细胞膜脂肪酸比值的影响(±s) 时间
血小板脂肪酸比值
红细胞膜脂肪酸比值
AA/EPA
AA/DHA
AA/EPA
AA/DHA
治前
18.4±6.3
, http://www.100md.com
15.4±8.3
10.4±6.3
4.9±2.6
6周
14.6±5.4
10.2±5.9*
7.0±5.3
3.5±2.0
12周
10.4±6.8*
7.7±4.3△
, 百拇医药
5.3±2.7*
3.0±1.7*
与治疗前比*P<0.05 △P<0.01
三、TG、TC、LDL-C下降与血小板、红细胞膜AA/EPA、AA/DHA比值降低均呈显著正相关(r＝0.634～0.994，P<0.001)。
四、不良反应：SGPT小于正常上限一倍1例，继续服药至12周后复查恢复正常；大于正常上限两倍1例，中止服药2周后恢复正常。
讨论
n-6、n-3多不饱和脂肪酸都是人体必需脂肪酸。n-6系主要作用是抗粥样硬化形成(降脂作用)，n-3PUFA主要是抗血栓形成作用，同时也有降脂作用。当体内n-6/n-3比值升高时，由于AA的廿碳脂肪酸衍生物(TXA2)升高，血小板的聚集，活化刺激平滑肌增生及使血管痉挛等，不仅导致了心血管病的发病率增高，而且导致了癌症的发生和转移及自身免疫系统疾患等，因而n-3/n-6脂肪酸的平衡是维持人体健康的重要因素。P是HMGCo还原酶抑制剂，能有效降低血TC水平。本研究证实对高脂血症者应用P降TC作用显著，并能明显降低TG、LDL-C、ApoB100。在调脂的同时，血小板、红细胞膜EPA、DHA均明显增高，AA/EPA、AA/DHA比值显著下调。血脂降低与血小板、红细胞膜n-6/n-3系多不饱和脂肪酸比值下降呈显著正相关。推测一是调脂药可能通过调整血脂，间接调整了血小板、红细胞膜上的脂肪酸成份；二是可能直接作用于细胞膜，使EPA、DHA与AA竞争结合进入磷脂质，从而改善了膜的性质[4]。
, 百拇医药
对高脂血症者应用普伐他汀调脂剂后，产生血小板、红细胞膜脂肪酸成份变化，这是否对调脂药的机理需重新认识，即血小板、红细胞膜必需脂肪酸成份的变化，究竟是血脂调整的结果，还是血脂调整的原因之一，或是互为因果，有待进一步深入研究。
本研究说明应用P后调整了血脂，改变了血小板、红细胞膜脂肪酸的比率，纠正了n-6/n-3脂肪酸平衡，有利于改善血小板功能，在AS防治中具有重要价值。
参考文献
1，Watanabe M，Shiraishin K，Matsuzaki S.Relationship between platelet membrane lipid compositons and platelet aggregability in alcoholic liver disease.Alcohol Clin Exp Rex，1998，22(3 Supppl)：975-1025.
, 百拇医药
2，Meng J，Futata T，Asanot， et al.Changes of fatty acid Compositions of platelet phospholipids(PPL) and platetlet aggregation rates in NIDDM patients following EPA-E administration Elseveier Science B.V.1994，223-226.
3，李伶，杨刚毅，詹世琴.红细胞膜脂肪酸组成对膜脂区流动性的影响.中国医学物理学杂志，1998，15：17-19.
4，王建中，邱红芳.鱼油研究的现状和发展趋势.中国海洋药物，1993，2：34-42.
5 鄢盛恺，宋耀红.低密度脂蛋白胆固醇的测定方法与标准化研究.中华医学检验杂志，1998，21：328-331.
收稿：1999-11-11
修回：1999-12-27, 百拇医药
单位：(214002 无锡市第一人民医院)
关键词：普伐他汀；高脂血症；血小板；红细胞；膜脂肪酸成份
江苏医药001024 【摘要】 目的 观察普伐他汀(P)调脂疗效及对血小板、红细胞膜必需脂肪酸成份及多不饱和脂肪酸(PUFA)平衡的影响。方法 对30例原发性高脂血症者应用P 12周。治疗前后分别测定血脂、血小板及红细胞膜花生四烯酸(AA)、廿碳五烯酸(EPA)、廿二碳六烯酸(DHA)。结果 治疗后血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白B100(ApoB100)明显降低(P<0.05～0.001)；血小板、红细胞膜AA/EPA、AA/DHA比值亦明显降低(P<0.05～0.01)，且与TG、TC、LDL-C降低均呈显著正相关(P<0.001)。结论 P除有效调脂外，还能影响血小板、红细胞膜脂肪酸成份及其比率，对防治动脉粥样硬化有重要意义。
, 百拇医药
大量研究表明，血浆脂质代谢紊乱及血小板功能异常在动脉粥样硬化(AS)的发生中起重要作用。Watanabe等认为血小板膜脂肪酸成份的改变可影响血小板功能[1，2]。生物膜脂肪酸成份改变可导致膜流动性改变，后者与许多疾病的发生有关[3]。n-3系PUFA以EPA、DHA为代表，n-6系PUFA以AA为代表，是人体必需脂肪酸，为人体细胞膜的重要组成成份。n-3/n-6脂肪酸的平衡是维持人体健康的重要因素[4]。本研究对原发性高脂血症者应用P调节血脂，并观察其是否对血小板、红细胞膜脂肪酸成份、脂肪酸平稳有影响，以探讨脂代谢紊乱与膜脂肪酸成份变化之间的相互关系。
对象与方法
一、原发性高脂血症诊断：近1～2个月内未服用任何影响血脂的药物，在饮食控制下两次(间隔≥2周)测空腹(>12小时以上)TC≥5.95mmol/L，TG≥2.26mmol/L。符合上述一项或一项以上并排除由糖尿病、甲状腺功能失常、痛风、肝、胆、胰和肾脏等疾患引起的继发性高脂血症。
, 百拇医药
二、对象：1995～1998年本院门诊病例，男20例，女10例，平均年龄53.1±6.9(33～71)岁。体质指数(BMI)≤24者11例，>24者19例。
三、受试者服用P(10mg/日×12周)治疗前及治疗后6周、12周分别测定血清TC及TG(比色法)、HDL-C及LDL-C(均相测定法中的选择性反应法)[5]、ApoB100及Lp(a)(散射比浊法)、血糖及肝、肾功能。
四、血小板悬液制备：肘静脉取血，ACD抗凝，1?000Rpm离心15分钟取上层富血小板血浆400μl，再以3?000Rpm离心沉淀15分钟获压积血小板，CGS缓冲液洗涤血小板三次，以Hepes-Tyrode缓冲液制成经洗涤的血小板悬液。
五、红细胞及红细胞膜制备：取ACD抗凝血，2?500Rpm离心5分钟，去上层富血小板血浆，下层再经2?500Rpm离心15分钟，得压积红细胞。用生理盐水洗涤三次，配成经洗涤的红细胞悬液，再加蒸馏水1.5ml混匀置-18℃使其冻结，然后再温解冻，使红细胞破裂，离心沉淀2?500Rpm5分钟，去上层液后用蒸馏水洗涤三次得红细胞膜。
, http://www.100md.com
六、气相色谱法测定血小板、红细胞膜脂肪酸成份：应用HP5880FID检测器，取分离的血小板，红细胞样品加入预先配制好的含BHT(0.05W/V)的氯仿-甲醇(2∶1)溶液2ml，超声抽提15分钟，加入无水硫酸钠0.5克，转至20ml玻璃管内，置于37℃恒温水浴中，用纯氮吹干，再加入14%三氟化硼-乙醚甲醇2ml，密闭置于80℃水浴30min后取出，冷却后加入正已烷(1ml)萃取三次，合并萃取液，加入无水硫酸钠0.5克，转移出已烷溶液，氮气吹干，用正已烷0.5ml，每次进样1μl。用面积归一化法计算。
七、统计学处理：采用SPSS软件包，均数比较用t检验，不同指标间用线性相关分析。结果
一、30例患者服药前后血脂变化见表1。
二、P对血小板、红细胞膜脂肪酸成份的影响见表2。对血小板、红细胞膜脂肪酸比值的影响见表3。
, 百拇医药 表1 普伐他汀对30例高脂血症患者血脂的影响(
±s) 时间TG(mmol/L)
TC(mmol/L)
LDL-C(mmol/L)
HDL-C(mmol/L)
ApoAl(g/L)
ApoB100(g/L)
Lp(a)(mg/L)
治前
3.26±2.47
, 百拇医药
6.23±1.29
2.89±0.51
1.19±0.34
1.25±0.28
1.24±0.39
206±210
6周
2.31±1.36**
5.49±1.07**
2.52±0.38**
1.37±1.30
, http://www.100md.com
1.53±0.23**
1.19±0.29
213±244
12周
2.11±1.21**
5.58±1.45**
2.65±0.49**
1.58±2.03
1.31±0.18
1.11±0.24*
, 百拇医药
180±261
与治疗前比*P<0.05， **P<0.01表2 普伐他汀对30例高脂血症患者血小板、红细胞膜脂肪酸成份的影响(
±s) 时间血小板脂肪酸
红细胞膜脂肪酸
AA
EPA
DHA
AA
EPA
DHA
, 百拇医药
治前
5.05±2.50
0.26±0.16
0.35±0.22
6.60±1.84
0.71±0.31
1.36±0.66
6周
5.34±1.27
0.43±0.20**
0.57±0.28**
, http://www.100md.com
6.44±1.20
1.00±0.37*
1.90±0.85*
12周
5.58±1.75
0.53±0.18**
0.81±0.23**
6.19±1.16
1.03±0.29**
2.03±0.85**
, 百拇医药
与治疗前比*P<0.05 **P<0.001表3 普伐他汀对30例高脂血症患者血小板、红细胞膜脂肪酸比值的影响(
±s) 时间血小板脂肪酸比值
红细胞膜脂肪酸比值
AA/EPA
AA/DHA
AA/EPA
AA/DHA
治前
18.4±6.3
, http://www.100md.com
15.4±8.3
10.4±6.3
4.9±2.6
6周
14.6±5.4
10.2±5.9*
7.0±5.3
3.5±2.0
12周
10.4±6.8*
7.7±4.3△
, 百拇医药
5.3±2.7*
3.0±1.7*
与治疗前比*P<0.05 △P<0.01
三、TG、TC、LDL-C下降与血小板、红细胞膜AA/EPA、AA/DHA比值降低均呈显著正相关(r＝0.634～0.994，P<0.001)。
四、不良反应：SGPT小于正常上限一倍1例，继续服药至12周后复查恢复正常；大于正常上限两倍1例，中止服药2周后恢复正常。
讨论
n-6、n-3多不饱和脂肪酸都是人体必需脂肪酸。n-6系主要作用是抗粥样硬化形成(降脂作用)，n-3PUFA主要是抗血栓形成作用，同时也有降脂作用。当体内n-6/n-3比值升高时，由于AA的廿碳脂肪酸衍生物(TXA2)升高，血小板的聚集，活化刺激平滑肌增生及使血管痉挛等，不仅导致了心血管病的发病率增高，而且导致了癌症的发生和转移及自身免疫系统疾患等，因而n-3/n-6脂肪酸的平衡是维持人体健康的重要因素。P是HMGCo还原酶抑制剂，能有效降低血TC水平。本研究证实对高脂血症者应用P降TC作用显著，并能明显降低TG、LDL-C、ApoB100。在调脂的同时，血小板、红细胞膜EPA、DHA均明显增高，AA/EPA、AA/DHA比值显著下调。血脂降低与血小板、红细胞膜n-6/n-3系多不饱和脂肪酸比值下降呈显著正相关。推测一是调脂药可能通过调整血脂，间接调整了血小板、红细胞膜上的脂肪酸成份；二是可能直接作用于细胞膜，使EPA、DHA与AA竞争结合进入磷脂质，从而改善了膜的性质[4]。
, 百拇医药
对高脂血症者应用普伐他汀调脂剂后，产生血小板、红细胞膜脂肪酸成份变化，这是否对调脂药的机理需重新认识，即血小板、红细胞膜必需脂肪酸成份的变化，究竟是血脂调整的结果，还是血脂调整的原因之一，或是互为因果，有待进一步深入研究。
本研究说明应用P后调整了血脂，改变了血小板、红细胞膜脂肪酸的比率，纠正了n-6/n-3脂肪酸平衡，有利于改善血小板功能，在AS防治中具有重要价值。
参考文献
1，Watanabe M，Shiraishin K，Matsuzaki S.Relationship between platelet membrane lipid compositons and platelet aggregability in alcoholic liver disease.Alcohol Clin Exp Rex，1998，22(3 Supppl)：975-1025.
, 百拇医药
2，Meng J，Futata T，Asanot， et al.Changes of fatty acid Compositions of platelet phospholipids(PPL) and platetlet aggregation rates in NIDDM patients following EPA-E administration Elseveier Science B.V.1994，223-226.
3，李伶，杨刚毅，詹世琴.红细胞膜脂肪酸组成对膜脂区流动性的影响.中国医学物理学杂志，1998，15：17-19.
4，王建中，邱红芳.鱼油研究的现状和发展趋势.中国海洋药物，1993，2：34-42.
5 鄢盛恺，宋耀红.低密度脂蛋白胆固醇的测定方法与标准化研究.中华医学检验杂志，1998，21：328-331.
收稿：1999-11-11
修回：1999-12-27, 百拇医药