不同病理类型肾病患者尿中可溶性细胞间粘附分子-1的变化
不同病理类型肾病患者尿中可溶性细胞间粘附分子-1的变化
郭志勇 崔若兰 张晓英
摘 要 目的：研究尿中可溶性细胞间粘附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1 in urine,uICAM-1)在不同病理类型肾病患者中的变化。方法:用双抗体夹心ELISA法对30例患者的uICAM-1水平进行检测，其中11例检测了强的松治疗前、后uICAM-1的变化；20例健康成人作为对照组。结果:患者组uICAM-1水平显著高于对照组，微小病变肾病uICAM-1水平最高，狼疮性肾炎次之，且与尿蛋白/肌酐呈正相关；用激素治疗的11例患者uICAM-1水平与治疗前相比均有不同程度地下降。结论:uICAM-1水平与肾脏病变类型及程度相关，似可作为判断疾病治疗疗效的参考指标之一。
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关键词：肾疾病；可溶性细胞间粘附分子-1
细胞粘附分子(cellular adhesion molecule,CAM)是位于多种细胞表面的一类大分子糖蛋白，通过介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的粘附作用，参与一系列生理及病理过程[1]。研究表明，除表达于细胞表面的组织型细胞粘附分子(hCAM)外，还存在着多种可溶性细胞粘附分子，也称游离型或循环型细胞粘附分子(sCAM)[2]。本实验观察了不同病理类型肾病患者尿中可溶性细胞间粘附分子-1 (uICAM-1)水平的变化，并检测部分患者服用强的松前、后uICAM-1的变化，以期探讨肾病患者uICAM-1变化的临床意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象 选择住院及门诊随访肾脏病患者30例为患者组,其中男13例,女17例,年龄21～68岁(平均40.3岁)。30例(其中11例服用强的松治疗)均经肾穿刺活检证实病理类型(表1)。另选择20例健康成人为对照组,经详细询问病史、体检和化验检查，排除肝、肾等疾病和高血压、心脏病。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 尿蛋白及尿肌酐(Ucr)的测定 所有患者和健康成人均无肌酐饮食3 d后,测定24 h尿中蛋白及肌酐含量，并抽血查肌酐Scr。
1.2.2 尿液标本的收集 留取上述30例患者治疗前尿液(其中11例患者服用强的松1 mg/(kg.d)治疗后1周和4周分别留取尿液),同时，留取20例健康成人的尿液。所有标本均经离心2 000 r/min,10 min,分装于Eppendorf管中,-70℃储存待测。
1.2.3 uICAM-1的测定[3]操作步骤按 sICAM-1检测试剂盒(德国宝灵曼公司产品)说明进行。
1.3 统计学处理 实验数据以±s表示，采用t检验及方差分析，统计过程在SPLM软件上完成。
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表 1 肾病患者血清肌酐、尿蛋白和尿中可溶性细胞间粘附分子的变化
Tab 1 Changes of Scr,proteinuria，uICAM-1 in renal patient′s urine
(X±s)
Diagnosis
n
Scr (ρB/mg.ml-1)
Proteinuria
(wB/mg.mg-1)
, 百拇医药
uICAM-1
(ρB/ng.ml-1)
(wB/mg.mg-1)
IgA nephropathy
5
1.86±1.02
2.41±1.17
12.2±9.7
13.6±8.5**
Membranous nephropathy
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4
1.71±0.26
3.19±1.05
22.2±8.9
11.1±4.3**
FSGS
3
1.46±0.58
3.46±2.18
13.1±3.6
9.7±5.4*
Lupus nephritis
, http://www.100md.com
9
1.21±0.52
1.69±0.75
23.4±10.6
21.8±9.8**
Minimal change disease
6
0.89±0.59
7.01±1.63
41.9±16.0
26.5±4.1**
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Interstitial nephritis
1
1.30
1.46
4.7
6.3
Postinfection GN
1
1.21
0.70
7.2
6.2
, http://www.100md.com Mesangioprolif GN
1
1.48
1.31
5.5
7.6
Healthy control
20
2.8±1.1
2.5±0.8
* P<0.05；** P<0.01 vs healthy control group2 结 果
, 百拇医药 2.1 uICAM-1变化 正常对照组和患者组uICAM-1值分别为(2.8±1.1) ng/ml和(14.7±14.3)ng/ml,两组之间有显著性差别(P<0.01)。从表1可见，uICAM-1含量最高者为微小病变型肾病(41.9±16.0) ng/ml，其次为狼疮性肾炎(23.4±10.6 ) ng/ml、膜性肾病(22.2±8.9) ng/ml和IgA肾病(12.2±9.7) ng/ml。取uICAM-1 (ng/ml)与Ucr (mg/ml)的比值分析，微小病变型肾病和狼疮性肾炎与正常对照组比较，相差非常显著；而IgA肾病和膜性肾病则相差不显著。经多重回归分析,uICAM-1/Ucr相关于Proteinuria/Ucr(r=0.68)，而与Scr不相关 (r=0.04)。
2.2 激素治疗前后 uICAM-1变化 11例患者组(狼疮性肾炎7例、微小病变型4例)中,治疗前uICAM-1含量分别为(25.4±7.3)和(16.4±5.9) ng/ml,均明显高于健康人对照组(2.5±1.6)。服用强的松治疗1周、4周后，uICAM-1含量均下降，狼疮性肾炎者分别为(23.6±4.7)和(16.1±6.5) ng/ml，(P<0.05)微小病变者分别为(7.3±5.6)和(5.1±3.1) ng/ml，(P<0.01)但微小病变者治疗后uICAM-1含量下降的速度比较显著，快于狼疮性肾炎者，提示不同病理类型的肾病，对激素的反应程度存在着差别。
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3 讨 论
目前研究较多的sCAM主要来自选择素家族和免疫球蛋白家族的部分成员。多数是hCAM的细胞外部分,由蛋白裂解酶或磷脂酶等在hCAM跨膜区裂解脱落形成。另有一部分sCAM是由于编码hCAM的mRNA发生变异性拼接，而直接由细胞分泌形成的,这类s CAM可能带有hCAM的胞内成分。
sICAM-1是由Seth等通过蛋白质印迹技术发现,并由Rothelein等用ELISA方法进一步确认，为可溶性免疫球蛋白起家族粘附分子的成员之一。它含有ICAM-1全部细胞外区域,并能象ICAM-1一样与LFA-1等相应配体结合。
sICAM-1在正常人外周血及体液(乳汁、尿等)中的含量甚微,但在某些情况下可异常增高,这种增高一般认为是体内相应hCAM合成、表达增多或细胞功能活动增加的信号,因此,检测sICAM-1的改变具有一定的临床意义[4，5]。Rabb等[6]选择23例长期血液透析的尿毒症患者,作为研究对象,分别于透析前,透析15 min和3 h结束时抽血,采用ELISA方法检测血中sICAM-1的变化。结果发现,血透前sICAM-1与正常对照组相比,明显升高。透析15 min时，sICAM-1明显下降,透析器流出端sICAM-1水平高于流入端。透析3 h结束时,sICAM-1显著下降。提示透析过程中白细胞数下降可能与sICAM-1作用有关,即透析膜-白细胞相互作用,导致sICAM-1溢出,吸附并丢失入透析液中,故sICAM-1是造成血透患者免疫功能缺陷的重要原因。在肾移植患者发现发生排异反应时,患者uICAM-1水平升高[7],这种升高与排异反应呈正相关。因此,动态测定器官移植患者外周血特别是移植局部体液中的某些sICAM，可能有助于了解排斥反应的发生和反应程度,从而尽早采取相应的预防措施。齐文成等[8]采用双抗体夹心ELISA方法对25例活动期SLE患者血清中sICAM-1水平进行检测,并对部分稳定期患者重复检测,结果发现:活动期SLE患者血清sICAM-1水平较正常对照组明显升高,稳定期SLE血清中sICAM-1水平较活动期明显降低,故认为 SLE活动期血清sICAM-1水平增高,可作为判定SLE活动的参考指标。
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本研究检测了肾脏病患者uICAM-1的变化,结合肾穿刺病理结果分析,发现患者uICAM-1水平显著高于正常对照组，其中微小病变肾病uICAM-1水平最高,其次是狼疮性肾炎,且与尿蛋白/肌酐呈正相关,提示uICAM-1与肾脏病变活动相关。14例患者激素治疗后,uICAM-1水平与治疗前相比,有不同程度地下降,微小病变肾病uICAM-1下降最明显,提示uICAM-1含量变化可能作为判断病情的治疗疗效的参考指标之一。
参考文献
[1]Alelda SM,Smith CW,Ward PA.Adhesion molecules and inflammatory injury[J].FASEB,1994,8(3):504-509.
[2]Alcalde G,Lopez HM,Novo MJ,et al.Circulating adhesion molecules during allograft rejection[J].Transplantation,1995,59 (12):1295-1298.
, 百拇医药
[3]Pall AA,Adu D,Drayson M,et al.Circulating soluble adhesion molecules in systemic vasculitis[J].Nephrol Dial Transplant,1994,9(7):770-776.
[4]Bricio T,Rivera M,Molina A,et al.Soluble adhesion molecules in transplantation[J].Ren Fail,1996,18(1) :75-79.
[5]Mrowka C,Sieberth HG.Circulating adhesion molecules ICAM-1,VCAM-1 and E-selectin in systemic vasculitis:marked differences between Wegener′s granulomatosis ,systemic lupus erythematosus[J].Clin Investig,1994,72(10):239-244.
, 百拇医药
[6]Rabb H,Calderon E,Bittle PA,et al.Alterations in soluble intercellular adhesion molecule-1 and vascular cell adhesion molecule-1 in hemodialysis patients[J].Am J Kidney Dis,1996,27(2):239-246.
[7]Bechtel V,Scheuer R,Landgraf R ,et al.Assessment of soluble adhesion molecules(sICAM-1,sVCAM-1,sELAM-1) and complement cleavage products(sC4d,sC5b-9) in urine clinical monitoring of renal allograft[J].Transplantation，1994,58(8):905-908.
[8]齐文成，刘明洲，王玉亮,等.SLE发病中可溶性细胞间粘附分子-1变化的研究[J].中华风湿病杂志，1998，2(3)：152-154., 百拇医药
郭志勇 崔若兰 张晓英
摘 要 目的：研究尿中可溶性细胞间粘附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1 in urine,uICAM-1)在不同病理类型肾病患者中的变化。方法:用双抗体夹心ELISA法对30例患者的uICAM-1水平进行检测，其中11例检测了强的松治疗前、后uICAM-1的变化；20例健康成人作为对照组。结果:患者组uICAM-1水平显著高于对照组，微小病变肾病uICAM-1水平最高，狼疮性肾炎次之，且与尿蛋白/肌酐呈正相关；用激素治疗的11例患者uICAM-1水平与治疗前相比均有不同程度地下降。结论:uICAM-1水平与肾脏病变类型及程度相关，似可作为判断疾病治疗疗效的参考指标之一。
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关键词：肾疾病；可溶性细胞间粘附分子-1
细胞粘附分子(cellular adhesion molecule,CAM)是位于多种细胞表面的一类大分子糖蛋白，通过介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的粘附作用，参与一系列生理及病理过程[1]。研究表明，除表达于细胞表面的组织型细胞粘附分子(hCAM)外，还存在着多种可溶性细胞粘附分子，也称游离型或循环型细胞粘附分子(sCAM)[2]。本实验观察了不同病理类型肾病患者尿中可溶性细胞间粘附分子-1 (uICAM-1)水平的变化，并检测部分患者服用强的松前、后uICAM-1的变化，以期探讨肾病患者uICAM-1变化的临床意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象 选择住院及门诊随访肾脏病患者30例为患者组,其中男13例,女17例,年龄21～68岁(平均40.3岁)。30例(其中11例服用强的松治疗)均经肾穿刺活检证实病理类型(表1)。另选择20例健康成人为对照组,经详细询问病史、体检和化验检查，排除肝、肾等疾病和高血压、心脏病。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 尿蛋白及尿肌酐(Ucr)的测定 所有患者和健康成人均无肌酐饮食3 d后,测定24 h尿中蛋白及肌酐含量，并抽血查肌酐Scr。
1.2.2 尿液标本的收集 留取上述30例患者治疗前尿液(其中11例患者服用强的松1 mg/(kg.d)治疗后1周和4周分别留取尿液),同时，留取20例健康成人的尿液。所有标本均经离心2 000 r/min,10 min,分装于Eppendorf管中,-70℃储存待测。
1.2.3 uICAM-1的测定[3]操作步骤按 sICAM-1检测试剂盒(德国宝灵曼公司产品)说明进行。
1.3 统计学处理 实验数据以±s表示，采用t检验及方差分析，统计过程在SPLM软件上完成。
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表 1 肾病患者血清肌酐、尿蛋白和尿中可溶性细胞间粘附分子的变化
Tab 1 Changes of Scr,proteinuria，uICAM-1 in renal patient′s urine
(X±s)
Diagnosis
n
Scr (ρB/mg.ml-1)
Proteinuria
(wB/mg.mg-1)
, 百拇医药
uICAM-1
(ρB/ng.ml-1)
(wB/mg.mg-1)
IgA nephropathy
5
1.86±1.02
2.41±1.17
12.2±9.7
13.6±8.5**
Membranous nephropathy
, http://www.100md.com
4
1.71±0.26
3.19±1.05
22.2±8.9
11.1±4.3**
FSGS
3
1.46±0.58
3.46±2.18
13.1±3.6
9.7±5.4*
Lupus nephritis
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9
1.21±0.52
1.69±0.75
23.4±10.6
21.8±9.8**
Minimal change disease
6
0.89±0.59
7.01±1.63
41.9±16.0
26.5±4.1**
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Interstitial nephritis
1
1.30
1.46
4.7
6.3
Postinfection GN
1
1.21
0.70
7.2
6.2
, http://www.100md.com Mesangioprolif GN
1
1.48
1.31
5.5
7.6
Healthy control
20
2.8±1.1
2.5±0.8
* P<0.05；** P<0.01 vs healthy control group2 结 果
, 百拇医药 2.1 uICAM-1变化 正常对照组和患者组uICAM-1值分别为(2.8±1.1) ng/ml和(14.7±14.3)ng/ml,两组之间有显著性差别(P<0.01)。从表1可见，uICAM-1含量最高者为微小病变型肾病(41.9±16.0) ng/ml，其次为狼疮性肾炎(23.4±10.6 ) ng/ml、膜性肾病(22.2±8.9) ng/ml和IgA肾病(12.2±9.7) ng/ml。取uICAM-1 (ng/ml)与Ucr (mg/ml)的比值分析，微小病变型肾病和狼疮性肾炎与正常对照组比较，相差非常显著；而IgA肾病和膜性肾病则相差不显著。经多重回归分析,uICAM-1/Ucr相关于Proteinuria/Ucr(r=0.68)，而与Scr不相关 (r=0.04)。
2.2 激素治疗前后 uICAM-1变化 11例患者组(狼疮性肾炎7例、微小病变型4例)中,治疗前uICAM-1含量分别为(25.4±7.3)和(16.4±5.9) ng/ml,均明显高于健康人对照组(2.5±1.6)。服用强的松治疗1周、4周后，uICAM-1含量均下降，狼疮性肾炎者分别为(23.6±4.7)和(16.1±6.5) ng/ml，(P<0.05)微小病变者分别为(7.3±5.6)和(5.1±3.1) ng/ml，(P<0.01)但微小病变者治疗后uICAM-1含量下降的速度比较显著，快于狼疮性肾炎者，提示不同病理类型的肾病，对激素的反应程度存在着差别。
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3 讨 论
目前研究较多的sCAM主要来自选择素家族和免疫球蛋白家族的部分成员。多数是hCAM的细胞外部分,由蛋白裂解酶或磷脂酶等在hCAM跨膜区裂解脱落形成。另有一部分sCAM是由于编码hCAM的mRNA发生变异性拼接，而直接由细胞分泌形成的,这类s CAM可能带有hCAM的胞内成分。
sICAM-1是由Seth等通过蛋白质印迹技术发现,并由Rothelein等用ELISA方法进一步确认，为可溶性免疫球蛋白起家族粘附分子的成员之一。它含有ICAM-1全部细胞外区域,并能象ICAM-1一样与LFA-1等相应配体结合。
sICAM-1在正常人外周血及体液(乳汁、尿等)中的含量甚微,但在某些情况下可异常增高,这种增高一般认为是体内相应hCAM合成、表达增多或细胞功能活动增加的信号,因此,检测sICAM-1的改变具有一定的临床意义[4，5]。Rabb等[6]选择23例长期血液透析的尿毒症患者,作为研究对象,分别于透析前,透析15 min和3 h结束时抽血,采用ELISA方法检测血中sICAM-1的变化。结果发现,血透前sICAM-1与正常对照组相比,明显升高。透析15 min时，sICAM-1明显下降,透析器流出端sICAM-1水平高于流入端。透析3 h结束时,sICAM-1显著下降。提示透析过程中白细胞数下降可能与sICAM-1作用有关,即透析膜-白细胞相互作用,导致sICAM-1溢出,吸附并丢失入透析液中,故sICAM-1是造成血透患者免疫功能缺陷的重要原因。在肾移植患者发现发生排异反应时,患者uICAM-1水平升高[7],这种升高与排异反应呈正相关。因此,动态测定器官移植患者外周血特别是移植局部体液中的某些sICAM，可能有助于了解排斥反应的发生和反应程度,从而尽早采取相应的预防措施。齐文成等[8]采用双抗体夹心ELISA方法对25例活动期SLE患者血清中sICAM-1水平进行检测,并对部分稳定期患者重复检测,结果发现:活动期SLE患者血清sICAM-1水平较正常对照组明显升高,稳定期SLE血清中sICAM-1水平较活动期明显降低,故认为 SLE活动期血清sICAM-1水平增高,可作为判定SLE活动的参考指标。
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本研究检测了肾脏病患者uICAM-1的变化,结合肾穿刺病理结果分析,发现患者uICAM-1水平显著高于正常对照组，其中微小病变肾病uICAM-1水平最高,其次是狼疮性肾炎,且与尿蛋白/肌酐呈正相关,提示uICAM-1与肾脏病变活动相关。14例患者激素治疗后,uICAM-1水平与治疗前相比,有不同程度地下降,微小病变肾病uICAM-1下降最明显,提示uICAM-1含量变化可能作为判断病情的治疗疗效的参考指标之一。
参考文献
[1]Alelda SM,Smith CW,Ward PA.Adhesion molecules and inflammatory injury[J].FASEB,1994,8(3):504-509.
[2]Alcalde G,Lopez HM,Novo MJ,et al.Circulating adhesion molecules during allograft rejection[J].Transplantation,1995,59 (12):1295-1298.
, 百拇医药
[3]Pall AA,Adu D,Drayson M,et al.Circulating soluble adhesion molecules in systemic vasculitis[J].Nephrol Dial Transplant,1994,9(7):770-776.
[4]Bricio T,Rivera M,Molina A,et al.Soluble adhesion molecules in transplantation[J].Ren Fail,1996,18(1) :75-79.
[5]Mrowka C,Sieberth HG.Circulating adhesion molecules ICAM-1,VCAM-1 and E-selectin in systemic vasculitis:marked differences between Wegener′s granulomatosis ,systemic lupus erythematosus[J].Clin Investig,1994,72(10):239-244.
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[6]Rabb H,Calderon E,Bittle PA,et al.Alterations in soluble intercellular adhesion molecule-1 and vascular cell adhesion molecule-1 in hemodialysis patients[J].Am J Kidney Dis,1996,27(2):239-246.
[7]Bechtel V,Scheuer R,Landgraf R ,et al.Assessment of soluble adhesion molecules(sICAM-1,sVCAM-1,sELAM-1) and complement cleavage products(sC4d,sC5b-9) in urine clinical monitoring of renal allograft[J].Transplantation，1994,58(8):905-908.
[8]齐文成，刘明洲，王玉亮,等.SLE发病中可溶性细胞间粘附分子-1变化的研究[J].中华风湿病杂志，1998，2(3)：152-154., 百拇医药