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编号:10227516
幽门螺杆菌粪便抗原检测及其与胃粘膜抗原检测的对比研究
http://www.100md.com 《中国医学杂志》 2000年第11期
     作者:胡伏莲 成虹 李江 谷青 王蔚虹

    单位:北京大学第一临床医学院100034

    关键词:螺杆菌;幽门;粪便;诊断;免疫学

    中华医学杂志001106

    【摘要】 目的 评价幽门螺杆菌(Hp)粪便抗原检测方法的可靠性及准确性。方法 用ELISA试剂盒对224例接受胃镜检查患者的粪便标本进行幽门螺杆菌抗原检测,同时对部分病例进行胃粘膜活组织抗原的检测,以快速尿素酶试验、组织学染色和培养检测Hp作为“金标准”,三项检查中至少两项阳性判定为Hp感染。结果 “金标准”诊断Hp感染阳性137例,阴性87例。“金标准”阳性的137例中132例粪便抗原检测阳性,阴性的87例中76例粪便抗原检测阴性,敏感度为96.4% (132/137),特异度87.4% (76/87),胃粘膜活组织抗原检测的敏感度为100% (27/27),特异度为91.7% (11/12)。结论 H.pylori粪便抗原检测是一种简便、易行、准确性高的非侵入性诊断方法。
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    Evaluation and comparison of the Helicobacter pylori stool antigen test and the gastric mucosal antigen test

    HU Fulian CHENG Hong LI Jiang

    (Department of Gastroenterology, The First Teaching Hospital of Beijing University, Beijing 100034, China)

    【Abstract】 Objective To evaluate the reliability of an enzyme-linked immunosorbent assay by the Helicobacter pylori (H. pylori) stool antigen test for the detection of H. pylori infection. Methods Stool specimens were collected from 224 patients who received upper gastrointestinal endoscopic examination for gastrointestinal symptoms. H. pylori status was evaluated by five different tests: culture, histology, biopsy rapid urease test, H. pylori stool antigen test, and H. pylori gastric active mucosal antigen test (parts of the patients). A commercial kit using an enzyme-linked immunosorbent assay was used to examined H. pylori antigen in the stool or in the gastric active mucosa. H. pylori status was defined as positive when two of the three tests (culture, histology and biopsy rapid urease test) were positive. Results 137 patients were diagnosed as H. pylori-positive. The H. pylori stool antigen test was positive in 143 patients and negative in 81 patients. The sensitivity and specificity were 96.4% and 87.4%, respectively. The overall accuracy was 92.9%. 39 patients were examined H. pylori antigen in the gastric active mucosa, and 27/39 were diagnosed as H. pylori-positive. The H. pylori gastric active mucosal antigen test was positive in 28 patients and negative in 11 patients. The H. pylori stool antigen test was positive in 30 patients and negative in 9 patients. The corresponding rate between gastric active mucosa and stool was 94.9%. Conclusion The H. pylori stool antigen test is a simple, non-invasive method for accurate diagnosis of H. pylori infection.
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    【Key words】 Helicobacter pylori; Feces; Diagnosis, immunological

    幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的检测方法可分为侵入性和非侵入性两类,前者需通过胃镜检查取胃粘膜活检标本进行,包括尿素酶检查、组织染色或培养检查等,后者主要包括13C-或14C-尿素呼气试验和血清学试验,血清学试验不能确定现症感染,13C-尿素呼气试验价格昂贵。近年国外报道了一种Hp粪便抗原检测的新方法[1-5],关于粪便Hp抗原的检测国内只有个别报道,本研究通过多种对照方法,包括直接从胃粘膜活组织检测抗原对照,来评价Hp粪便抗原检测方法的可靠性及准确性。

    对象与方法

    一、对象

, 百拇医药     1999年12月20日至2000年5月30日对因上消化道症状接受胃镜检查的患者,排除4周内服用过抗生素、铋剂和质子泵抑制剂等对Hp检查有影响的药物者。224例患者进入本研究,男134例,女90例,平均年龄48.4岁(14~83岁);慢性胃炎176例,消化性溃疡病45例,胃癌3例。

    二、方法

    本研究采用胃粘膜活检标本快速尿素酶试验、组织学染色(Warthin-Starry染色)和Hp培养检查联合检测Hp作为“金标准”,评价Hp粪便抗原检测Hp感染的准确性,并对部分病例同时作胃粘膜活组织及粪便Hp抗原检测,评价其可靠性。

    1.Hp粪便抗原检测:患者于胃镜检查当天早晨留粪便作Hp抗原检测。检测试剂盒由协和药业有限公司提供,为Meridian Diagnostic,Inc出品(批号700101-001)。其原理是采用酶联免疫分析双抗体夹心法。操作步骤简述如下:设阳性对照和阴性对照各1个,提取5 mm3粪便标本,加入400 μl稀释液并混匀,在已用抗体包被的滴定板孔中加入100 μl稀释的粪便,然后加入酶标抗体,振荡30 s后在25℃孵育1 h;洗涤滴定板孔6次后加入底物溶液,振荡30 s后在25℃孵育10 min,加入反应终止液后15 min内在酶标仪波长450 nm处读取吸光度,A值≥0.12为阳性(双波长光谱法)。
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    2.胃粘膜活检标本Hp检测:胃镜检查时从胃窦距幽门5 cm处取活检组织3块,分别作尿素酶试验、Warthin-Starry染色和Hp培养,3项检测中2项试验阳性作为诊断Hp阳性的“金标准”,3项检测均阴性诊断Hp阴性。

    3.胃粘膜活组织中Hp抗原的检测:对39例患者采用Hp抗原检测试剂盒进行了胃粘膜活组织Hp抗原的检测,并用同一块胃粘膜活组织(将胃粘膜活组织研磨成匀浆)做细菌培养,评价粪便Hp抗原检测的可靠性。关于用Hp抗原检测试剂盒检测胃粘膜活组织中Hp抗原的方法及试剂盒与检测粪便Hp抗原的相同。

    4.评价方法:(1)粪便Hp抗原检测与“金标准”比较。(2)胃粘膜活组织匀浆中Hp抗原与“金标准”比较。(3)粪便Hp抗原检测与胃粘膜活组织匀浆中Hp抗原检测比较。

    5.统计学处理:通过计算试验的敏感度及特异度评价粪便Hp抗原检测的可靠性及准确性。
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    结果

    1.粪便Hp抗原检测与“金标准”比较(表1):本研究共入选病例224例,全部患者均做粪便抗原和“金标准”检测,根据“金标准”诊断Hp感染,阳性137例,阴性87例;根据Hp粪便抗原检测,阳性143例,阴性81例,其中假阳性11例,假阴性5例,敏感度96.4% (132/137),特异度87.4% (76/87)。

    2.胃粘膜活组织匀浆中Hp抗原检测与“金标准”比较(表2):检测Hp胃粘膜活组织抗原39例,其中根据“金标准”诊断Hp感染,阳性27例,阴性12例,培养阳性率为92.6%(25/27),胃粘膜活组织Hp抗原检测阳性28例,阴性11例,假阳性1例,假阴性0例,敏感度100% (27/27),特异度91.7% (11/12)。

    3.粪便Hp抗原检测与胃粘膜活组织匀浆中Hp抗原比较(表2):39例患者同时作Hp粪便抗原及胃粘膜活组织抗原检测,其中粪便Hp抗原检测阳性30例,阴性9例,假阳性3例,假阴性0例,39例中组织抗原检测有37例与粪便抗原检测结果一致(其中有1例“金标准”检测阴性而组织及粪便抗原检测均为阳性),符合率94.9%。
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    表1 224例患者Hp粪便抗原检测结果 组别

    例数

    Hp联合检测(金标准)

    阳性例数

    阴性例数

    粪便抗原检测阳性

    143

    132

    11

    粪便抗原检测阴性

    81

    5

, 百拇医药     76

    合计

    224

    137

    87

    敏感度=96.4%;特异度=87.4%;阳性预测值=92.3%;阴性预测值=93.8%;准确性=92.9%表2 39例患者Hp胃粘膜组织抗原与

    粪便抗原检测结果比较 组别

    例数

    Hp联合检测(金标准)

    阳性例数

    阴性例数
, 百拇医药
    组织抗原检测阳性

    28

    27

    1

    组织抗原检测阴性

    11

    0

    11

    粪便抗原检测阳性

    30

    27

    3

    粪便抗原检测阴性
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    9

    0

    9

    组织抗原检测敏感度=100%;组织抗原检测特异度=91.7%;组织抗原检测准确性=97.4%;组织与粪便抗原检测符合率=94.9%;粪便抗原检测敏感度=100%;粪便抗原检测特异度=75%

    讨论

    Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和MALT淋巴瘤的发病有密切的关系。关于Hp感染的临床诊断方法,一般认为Hp分离培养、Warthin-Starry银染及快速尿素酶试验联合检测是诊断Hp感染的“金标准”,但这些检查都必须通过胃镜,属创伤性检查,而且Hp培养和银染技术比较复杂,只在有条件的单位才能开展,不易推广。 血清学抗体的检测只能用于流行病学筛检而不能用于临床诊断,13C或
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    14 C同位素标记的尿素呼气试验,虽然属于无创伤性检查,可以确定Hp现症感染,但前者需要气体质谱仪,价格昂贵,后者有一定的放射性,在广泛应用上受到限制。

    早就有人从粪便中培养和分离出Hp,但由于Hp在环境不利的情况下极易变成不能分离的球形体,且粪便中杂菌种类繁多,所以,要得到纯Hp极其不易[6,7]。Hp粪便抗原检测属于一种非侵入性的诊断方法,近年国外已有一些报道[1-5],其原理是采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验的方法,操作简便,省时,不需要昂贵的仪器,文献报道敏感度为90.0%~98.2%,特异度为75.0%~100%。

    本研究经Hp“金标准”检测,研究结果显示粪便Hp抗原检测对诊断Hp感染的敏感度为96.4%,特异度为87.4%,与国外Trevisani等[1]报道的敏感度96.8%、特异度89.7%和McNamara等[2]报道的敏感度96%、特异度75%结果相仿。
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    本研究中39例患者取同一块胃粘膜活组织同时做Hp抗原检测和活组织Hp培养,其结果显示,Hp活组织培养,阳性25例(25/27),与活组织Hp抗原检测28例阳性有高度的一致性。本研究结果直接证实了粪便中检出的Hp抗原与胃粘膜活组织中检出的Hp抗原有非常高的一致性。研究结果表明,Hp抗原检测试剂盒的检测方法对诊断Hp现症感染有高度的准确性和可靠性。

    根据粪便Hp抗原和胃粘膜活组织Hp抗原的检测结果,两者符合率为94.9%,不符合者均为假阳性,考虑粪便检测假阳性的原因主要有以下几方面:(1)可能肠道存在与Hp抗原相近的微生物;(2)可能由于组织学检查只能反映胃内的局部情况,而粪便检查却能反映全胃的情况,由于本研究所采用的“金标准”检测方法受取胃粘膜活检组织数量的限制尚不能完全反映全胃的情况,因此,粪便Hp抗原检测出的假阳性不能除外是真阳性,如果在研究中加上13C-尿素呼气试验,所得出的敏感度和特异度有可能更高。国外Chang等[5]报道采用组织培养、组织学染色、尿素酶试验、13C-尿素呼气试验和血清学检查5种方法进行检测,其敏感度和特异度分别为95.0%和100%。
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    粪便Hp抗原检测是一种简便、易行、省时、便宜的非侵入性诊断方法,尤其适合于幼儿及孕妇,值得推广。

    参考文献

    1,Trevisani L, Sartori S, Ruina M, et al. Helicobacter pylori stool antigen test: clinical evaluation and cost analysis of a new enzyme immunoassay. Dig Dis Sic, 1999 , 44: 2303-2306.

    2,McNamara D, Whelan H, Hamilton H, et al. HpSA: assessment of a new non-invasive diagnostic assay for Helicobacter pylori infection in an Irish population. J Med Sci, 1999, 168: 111-113.
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    3,Vaira D, Malfertheiner P, Megraud F, et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection with a new non-invasive antigen-based assay. HpSA European study group. Lancet, 1999, 354: 30-33.

    4,Calvet X, Feu M, Forne M, et al. The evaluation of a new immunoenzyme analysis for the detection of Helicobacter pylori infection in stool samples. Gastroenterol-Hepatol, 1999, 22: 270-272.

    5,Chang MC, Wu MS, Wang HH, et al. Helicobacter pylori stool antigen (HpSA) test-a simple , accurate and non-invasive test for detection of Helicobacter pylori infection. Hepatogastroenterology, 1999, 46: 299-302.
, 百拇医药
    6,Kelly SM, Pitcher MC, Farmery SM, et al. Isolation of Helicobadter pylori from feces of patients with dyspepsia in the United Kingdom. Gastroenterology, 1994, 107: 1671-1674.

    7,Sahay P, West AP, Hawkey PM, et al. Isolation of Helicobacter pylori from faeces. J Infect, 1995, 30: 262-263.

    (收稿日期:2000-06-22), http://www.100md.com