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编号:10231483
药味配伍对小承气汤中蒽醌类衍生物溶出率的影响
http://www.100md.com 《中草药》 2000年第11期
     作者:席先蓉 刘江书 陈庆

    单位:贵阳中医学院药学系(550002

    关键词:小承气汤;大黄;厚朴;枳实;蒽醌类衍生物

    中草药001111

    摘 要 目的:研究药味配伍对小承气汤中有效成分 蒽醌类衍生物溶出率的影响。方法:用薄层层析-紫外分光光度法测定了大黄及大黄与不同 药 物配伍组水煎液中游离蒽醌及结合型蒽醌的含量。结果:测定数据经统计检验显示,与大黄 水煎液相比合煎方中结合型大黄酸及游离大黄素含量变化不显著,其余各配伍组水煎液中游 离蒽醌、结合型蒽醌含量变化均极显著(P<0.02,P<0.02,P<0.001)。结论:各 种配伍药材对不同的蒽醌类成分产生的影响不同。

    Influences of Adjuvants in the Recipe of Xiaochengqitang on the Dissolution of
, 百拇医药
    Anthraquinones from Medicinal Rhubarb into the Decoction

    Xi Xianrong, Liu Jiangshu and Chen Qing

    (Department of Pharmacy, Guiyang College of TCM Guiyang 550 002)

    Abstract Xiaochengqitang (XCQT) is a decoction of the tradit ional Chinese recipe containing Radix et Rhizoma Rhei Baill as the “Sovereign” supplemented by Cortex Magnoliae Offici nalis and Fructus Aurantii Immaturus as its “subordinat es”. The influences of the “subordinates” on the dissolution of free and con j ugated anthraquinones from rhubarb in the decoction were determined by assaying the contents of rhein, emodin and anthraquinones, either free or conjugated, wit h TLC-UV spectrophotometry on 5 samples of different combinations (decoctions o f the XCQT as a whole, rhubarb alone, rhubarb plus the stem bark of magnolia, rh ubarb plus immature bitter orange and a mixture of separately decocted rhubarb, magnolia and bitter orange). Results of the study showed that, besides the cont ents of free emodin and conjugated rhein in XCQT, which showed no statistical si g nificant differences as compared with the decoction of rhubarb alone, all the ot her free and conjugated anthraquinones in decoctions of various combinations sho wed markedly significant differences (with P<0.02, P<0.01 and P<0.001 as compared with the decoction of rhubarb alone). The se results showed that d ifferent “subordinates” in the recipe showed different degrees of influence on the dissolution of the active principle in the decoction.
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    Key words Xiaochengqitang Radix et Rhizoma Rhei Cortex Magnoliae Officinalis Fr uctus Aurantii Immaturus anthraquinones

    小承气汤出自《伤寒论*辨阳明病脉证并治》,为治疗阳明腑实证轻下法的代表方剂,由大 黄、厚朴和枳实组成。小承气汤君药大黄有峻下热结,荡涤肠胃的功效,而结合型蒽醌、游 离蒽醌分别为大黄中部分泻下及抑菌有效成分[1],与小承气汤的功能相符。故分 别测定了单味大黄水煎液,大黄与其他药物配伍组水煎液中结合型大黄酸、大黄素、总蒽醌 (包括大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素和大黄酚)及游离大黄酸、大黄素、总蒽醌 的含量,并比较了其在不同药物配伍组中溶出率的变化,从而初步了解各味药材对小承气汤 “泻下”药效的影响,为从化学物质基础这一角度阐述小承气汤的配伍机制提供部分实验数 据。

    1 仪器、药品与试剂
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    Beckman DU-70分光光度计,752-紫外分光光计,微量注射器。

    药材购自本院第一附属医院,经本系方药教研室刘B67A副教授鉴定为 蓼科植物药用大黄Rheum officinale Baill. 的干燥根和根茎;厚 朴 为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils. 的干燥树皮 ;枳实为芸香科植物甜橙Citrus sinensis Osbeck. 的干燥幼果。

    对照品大黄素、大黄酸购自中国药品生物制品检定所,其余试剂均为分析纯。

    硅胶G(青岛海洋化工厂)与0.7%CMC-Na水溶液铺板,自然晾干后,烘箱中105 ℃活化0.5 h,置干燥器中备用。

    酒浸大黄:大黄切片,用黄酒按1∶10比例拌匀,闷24 h后,自然晾干即得。
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    2 大黄酸、大黄素及总蒽醌含量测定:薄层层析-紫外分光光度 法测定。

    2.1 样品溶液制备

    2.1.1 按处方比例,取各单味药材一剂量(大黄129 g,厚朴6 g,枳实9 g)[2] 精密称定,置烧杯中,加入800 mL蒸馏水,煎至约400 mL。趁热抽滤,用热水洗药渣及抽滤 装置,并入滤液中。水浴浓缩,并定容至50 mL,即得到小承气汤合煎方水煎液。精密吸取 该水煎液5 mL,水浴浓缩至2 mL,乙醚定量萃取。合并萃取液,温水浓缩,并定容至2 mL, 即得到测游离大黄酸、大黄素、总蒽醌之小承气汤合煎方醚提液。另定量吸取小承气汤合煎 方 水煎液5 mL,按文献[3]方法氧化、水解后,用前法制备测总大黄酸等之小承气汤 合煎方醚提液。

    2.1.2 照2.1.1之方法分别制备测游离蒽醌及总蒽醌之单味大黄,单味大黄与各单味药 材配伍及小承气汤之分煎方水煎醚提液。
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    2.2 吸收曲线测绘及测定波长选择

    2.2.1 分别吸取大黄酸甲醇对照液(1 mg/mL)及单味大黄水煎醚提液适量,条形点于同一 硅胶G板上,按文献[3]方法展开。取出晾干,254 nm紫外灯下定位。刮取大黄酸对 照品斑点,与大黄酸对照品位置相同处样品斑点及对映空白硅胶,分置于3 支离心管中,各 定 量加入甲醇4 mL。以空白硅胶甲醇洗脱液为空白,在Beckman DU-70分光光度计上于200~4 00 nm波长范围内测定吸收曲线。层析后的大黄酸对照品甲醇洗脱液与样品中大黄酸甲醇洗 脱液的吸收曲线形状相同,且在257 nm处有最大吸收,故选定257 nm为大黄酸的测定波长。

    2.2.2 用2.2.1方法制备层析后的大黄素对照品及样品中大黄素的甲醇洗脱液的吸收曲 线。两者吸收曲线相同且在287 nm均有吸收峰,故选287 nm为大黄素的测定波长。

    2.3 稳定性试验:大黄酸甲醇洗脱液、大黄素甲醇洗脱液、总蒽醌甲醇洗脱液,以空白硅胶甲醇洗脱液为空白 ,分别在257,287,287 nm处每隔一定时间测定吸光度。测定结果表明,大黄酸甲醇洗脱液 吸光度值至少在4 h内不变,大黄素、总蒽醌甲醇洗脱液吸光值至少在2 h内不变。
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    2.4 标准曲线的制备

    2.4.1 用微量注射器精密吸取大黄酸甲醇对照液40,80,120,160,200 μL,分别条形 点于薄层板上,按2.2.1方法展开,洗脱,测定吸光度。以点样量(μg)对测得的吸光度值 回 归,得到回归方程为A=-0.015 4+0.003 44C,r=0.998 8。

    2.4.2 精密吸取大黄素甲醇对照液(0.5 mg/mL)10,20,30,40,50 μL条形点于薄层 板 上,按2.2.2方法展开,洗脱,测定吸光度A,得到回归方程为A=-0.022 7+ 0.015 86C,r=0.999 2。

    2.5 加样回收率测定

    2.5.1 取约0.5 g大黄粉末两份,精密称定。其中一份加入大黄酸对照品1.5 mg,各定 量 加入甲醇100 mL,按文献方法[3]制备测游离大黄酸之醚提液。照2.4.1方法操作 , 测得大黄酸平均回收率为103.6%,RSD=2.02%(n=3)。
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    2.5.2 按2.5.1方法测定大黄素的平均回收率为105.0%,RSD=3.36 %(n=3)。

    2.6 样品测定

    2.6.1 按2.4.1方法,分别测定各供试液中游离大黄酸及总大黄酸吸光度,计算含量。 结果见表1。

    2.6.2 按2.4.2方法,分别测定各供试液中游离及总大黄素的吸光度,计算 含量,结果见表2。

    2.6.3 取供试液适量,点于薄层板上,照2.2.1方法展开、晾干、定位后,刮 取分离后的大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚色带于同一支离心管中,然 后按2.4.2方法测定各供试液中游离总蒽醌和结合总蒽醌的吸光度,计算含量。结果见表3 。

    3 结果与讨论

, http://www.100md.com     表1 样品水煎液中游离大黄酸及结合型大黄酸含量(mg /g大黄,n=3) 样品

    游离大黄酸

    结合型大黄酸

    含量

    RSD(%)

    溶出率(%)

    P

    含量

    RSD(%)

    溶出率(%)

    P)

    大黄
, 百拇医药
    3.204

    2.00

    100.00

    4.204

    1.49

    100.00

    大黄、厚朴

    2.268

    2.43

    70.79

    <0.001

    3.266

    2.8 0
, 百拇医药
    77.69

    <0.001

    大黄、枳实

    4.765

    3.31

    148.72

    <0.001

    1.383

    2.96

    32.90

    <0.001

    分煎方

    2.984
, 百拇医药
    1.92

    93.13

    <0.02

    2.999

    1.46

    71.34

    <0.001

    合煎方

    3.725

    1.71

    116.26

    <0.001

    4.342
, 百拇医药
    1.70

    103 .28

    表2 样品水煎液中游离大黄素及结合型大黄素含量(mg /g大黄,n=3) 样品

    游离大黄素

    结合型大黄素

    含量

    RSD(%)

    溶出率(%)

    P

    含量

    RSD(%)

    溶出率(%)
, 百拇医药
    P)

    大黄

    0.284 8

    2.06

    100.00

    0.645 3

    0.80

    100.00

    大黄、厚朴

    0.218 6

    1.49

    76.76

    <0.001
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    0.572 0

    1.00

    88.64

    <0.001

    大黄、枳实

    0.229 9

    0.53

    80.72

    <0.001

    0.674 6

    0.57

    104.54

    <0.01
, 百拇医药
    分煎方

    0.177 9

    0.65

    62.46

    <0.001

    0.324 9

    0.57

    5 0.35

    <0.001

    合煎方

    0.282 4

    1.14

    99.16
, 百拇医药
    0.579 4

    0.09

    89.79

    <0.001

    表3 样品水煎液中游离总蒽醌及结合型总蒽醌含量(mg /g大黄,n=3) 样品

    游离总蒽醌

    结合型总蒽醌

    含量

    RSD(%)

    溶出率(%)

    P

    含量
, 百拇医药
    RSD(%)

    溶出率(%)

    P)

    大黄

    0.721 1

    0.76

    100.00

    1.438

    0.94

    100.00

    大黄、厚朴

    0.489 8

    0.25
, 百拇医药
    67.92

    <0.001

    1.082

    0 .18

    75.24

    <0.001

    大黄、枳实

    0.823 9

    0.90

    114.26

    <0.001

    1.227

    0.49[ 〗85.33
, 百拇医药
    <0.001

    分煎方

    0.626 4

    0.38

    86.87

    <0.001

    1.175

    0.20

    81 .71

    <0.001

    合煎方

    0.908 7

    0.58
, 百拇医药
    126.02

    <0.001

    1.501

    1.10

    10 4.38

    <0.01

    3.1 在单味大黄、大黄与其他单味药材配伍的水煎液中,尽管大黄的取样量均为12 g,但 它们中的游离蒽醌与结合型蒽醌含量并不相同。相同的成分在不同的配伍组中溶出率不一样 ;一种药材与大黄配伍的水煎液中各种蒽醌类成分与大黄水煎液相比,其溶出率变化幅度也 不一样。说明了不同药材对不同种类的蒽醌类成分的溶出产生的影响不同。各种成分药 效不同,且在一定范围内,药效随含量变化而变化。这也是传统方剂理论通过药味配伍或 剂量配伍来调整中医方剂主治与功效的物质基础。
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    3.2 小承气汤合煎方中结合型大黄酸、结合型总蒽醌含量与大黄相比,增幅不大,而结合 型大黄素反而降低,这从一个角度说明了小承气汤轻下是有一定道理的。

    3.3 分析各种蒽醌类成分在大黄、大黄+厚朴、大黄+枳实及合煎方中含量,不难看出合煎 方中蒽醌类成分的溶出,不是各单味药材影响的简单加和,而是它们协同作用的综合结果。Address: Xi Xianrong, Guiyang College of TCM, Guiyang

    席先荣 女,化学学士学位。贵阳中医学院药学系分析化学教研室,从事教学和科研工作。 1993~1994年曾作为公派访问学者到新西兰Otago大学化学系进修,现为化学副教授。有7 篇论文在国家级和省级药学刊物上发表,其中5 篇为CA收载。目前研究方向:中医方剂化学 研究。

    参 考 文 献

    1,江苏新医学院.中药大辞典.上册.上海:上海科学技术出版社,1995:104

    2,彭怀仁主编.中华名医方剂大全.北京:金盾出版社,1990:79

    3,刘训红,王玉玺,房克慧,等.中药材薄层色谱鉴别.天津:天津科学技术出版 社,1990:20

    (1999-12-27收稿), 百拇医药


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