PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后关系的探讨
作者：张小玉 王雷
单位：张小玉(东南大学医学院，江苏 南京 210009)；王雷(宁夏石嘴山市卫生防疫站，宁夏 大武口 753000)
关键词：乳腺肿瘤；淋巴转移；预后
宁夏医学杂志001102 【摘要】 目的 探讨增殖细胞核抗原PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。方法 用免疫组化法对80例乳腺癌伴淋巴结转移和无转移组做PCNA检测，并与随访资料进行比较分析。结果 PCNA阳性率在乳腺癌伴淋巴结转移组68.18%，无转移组31.82%，两组间存在显著性差异(P<0.005)。随着组织学分级的增高，PCNA的表达呈递增趋势，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间阳性率差异存在显著性(P<0.01)。5年生存率(30.51%与66.66%)也存在显著差异(P<0.005)。结论 PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后密切相关，是乳腺癌患者预后判定有价值的生物学指标。
, 百拇医药
【中图分类号】 R737.9 【文献标识码】 A
文章编号：1001-5949(2000)11-0646-02
Relationship of PCNA expression to lymphnode metastasis and prognosis in breast carcinoma
ZHANG Xiao-yu WANG Lei
(Dept.of Pathology.Nanjing Railway Med.Coll.，Nanjing 210009，China)
【Abstract】 Objectives To study the relationship between the expression of PCNA and the lymphnode metastasis and prognosis of breast cancer.Methods eighty of breast cancer with or without lymphnode metastasis were studied for the expression of PCNA in the tumor′s tissue section by using LSAB method.The result were analysised to the follow up material in this group of patients.Result The positivity rate of PCNA expression in node-positive and in node-negative groups were 80% and 33% respectively(P<0.05) with the increase of histological grade the positivity rate of PCNA expression increased (P<0.05).the node-positive and in node-negative groups were significant difference in 5 years survival rate (31% and 65%)(P<0.005).Conclusions The expression of PCNA in closely linked to lymphnode metastasis and prognosis of breast carcinoma，and should be considered to a certain extent as an index of malignant degree and prognosis.
, http://www.100md.com
【Key words】 Breast neoplasms；Lymphatic metastasis；Prognosis
增殖细胞核抗原PCNA是细胞增殖周期的一种核蛋白，仅存在于细胞周期G1晚期和S期，在细胞DNA合成和增殖活动中发挥重要作用，肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的恶性程度密切相关。近几年来，增殖细胞核抗原PCNA的测定被广泛应用于肿瘤患者的诊断、治疗及预防评价之中。PCNA与乳腺癌淋巴结转移及预后关系的研究国外有所报道[1]，国内报道较少。我们应用免疫组化LSAB法对本院80例乳腺癌患者组织中PCNA的表达情况进行了检测，以探讨PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料：随机选取1992～1994年东南大学医学院外科手术切除或活检的乳腺标本共80例，其中癌旁“正常”乳腺组织(距离组织4cm)22例，增生性乳腺组织，包括普通型及不典型增生11例，导管原位癌7例，浸润性导管癌40例。乳腺癌癌旁组织的判定以及癌组织的分级，参照龚西俞[2]、陈忠年[3]提供的标准判定。病人均为女性，年龄26～74岁，平均52岁，术前均未接受过放疗或化疗，所有的患者术后均随访到1999年。所有的标本都用10%的福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚度4μm。免疫组化所用的PCNA单抗购于北京中山生物制剂公司，LSAB试剂盒购于上海华美生物制剂公司。
, http://www.100md.com
1.2 免疫组化方法：用LSAB法分别检测组织中PCNA的表达。组织切片脱蜡水化，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶10分钟，用1%的胰蛋白酶消化20分钟，加—抗1：100 4℃过夜，其余步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素衬染，树胶封片。试验设阳性对照和阴性对照(PBS代替—抗)，用已知阳性的淋巴瘤组织切片作阳性对照。
1.3 阳性结果判定：肿瘤细胞PCNA为核着色，表现为颗粒或弥漫深浅不等的棕褐色，阳性细胞数>5%判为乳腺癌。
1.4 统计学处理：采用χ2检验。
2 结果
PCNA免疫组化检测结果显示60例乳腺癌标本中PCNA阳性表达者52例，总阳性表达率为65%。
2.1 PCNA表达与患者5年生存率的关系(见表1)：阳性表达组5年生存率30.51%(18/59)，低于阴性表达组的66.66%(14/21)，差异有显著性意义(χ2=8.44，P<0.005)。
, 百拇医药
表1 PCNA表达与患者5年生存率的比较 生存期
n
PCNA(-)
例数 %
PCNA(+)
例数 %
5年内死亡组
48
7
33.33
41
68.49
, http://www.100md.com 生存5年以上组
32
14
66.66
18
30.51
合计
80
21
100
59
100
注：χ2=8.44，P<0.005
, 百拇医药
2.2 乳腺癌及癌前病变PCNA阳性率的比较(见表2)表2 乳腺癌及癌前病变PCNA阳性率的比较 类别
n
PCNA(-)
PCNA(+)
PCNA(%)
“正常”乳腺组织
22
18
4
18.18
增生性乳腺组织
11
, 百拇医药
6
5
45.45
导管原位癌
7
2
5
71.43
浸润性导管癌
40
7
33
82.50
, 百拇医药 合计
80
33
47
58.75
注：χ2=25.52，P<0.005；“正常”乳腺组织与增生性乳腺组织相比，P<0.005
2.3 与乳腺癌腋窝淋巴结转移的关系：80例乳腺癌中伴腋窝淋巴结转移组38例，PCNA阳性30例(68.18%)，42例无淋巴结转移的患者中只有14例阳性表达(31.82%)，差异有显著性意义(P<0.005),见表3。表3 乳腺癌伴腋窝淋巴结转移组和无转移组
PCNA表达的比较
PCNA(+)
, http://www.100md.com
PCNA(-)
阳性率(%)
转移组
30
8
78.95
无转移组
14
28
33.33
合计
44
36
, http://www.100md.com
55
注：χ2=16.77，P<0.005
2.4 PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系：80例乳腺癌按改良Bloom-R标准[4]，即分别根据核异型性、腺管形成情况、核分裂象多少进行评价。根据总分的多少化分为3级，其中Ⅰ级21例，Ⅱ级48例，Ⅲ级11例，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间PCNA阳性率差异有显著性意义(P<0.01，见表4)。
表4 PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系 组织学分级
n
PCNA(+)
PCNA(-)
Ⅰ级
, 百拇医药
21
7
14
Ⅱ级+Ⅲ级
59
40
19
合计
80
47
33
注：χ2=7.59，0.005
3 讨论
, 百拇医药
增殖细胞核抗原PCNA是真核细胞DNA合成所必需的一种36kd核蛋白，已证明PCNA的表达与细胞周期有关，在G1期PCNA的表达逐渐增加，S期达最高峰，而G2/M期则减少。PCNA的表达可能是DNA多倍体形式表达的一个标记，也成为肿瘤细胞失调状态下的一个标记，检测PCNA可以客观评价肿瘤细胞增殖状态。以往把乳腺癌腋窝淋巴结转移，肿瘤大小，雌、孕激素受体等因素看作是乳腺癌的预后标准，但是结果不是十分满意。近年来国外一些研究表明PCNA与多种肿瘤的预后关系密切，有关PCNA与乳腺癌预后关系的研究也有少量的报道。我们采用LSAB免疫组化法对80例乳腺癌组织进行PCNA表达的检测，发现在癌旁“正常”乳腺组织表达率非常低，随着病变的发展，增生性导管中表达率明显提高，至癌变后，PCNA显著性升高(P<0.05)。PCNA表达率明显提高反映在乳腺癌变过程中，细胞增殖速率加快，我们的研究同时发现在淋巴结转移组与无转移组阳性率差异显著，分别为66.18%及31.82%。并发现PCNA表达与乳腺癌组织学分级关系密切，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在有显著性差异，5年生存率分别为30.51%及66.66%差异有显著性意义。故认为PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关。这一结果和Tahan SR[5]及Magno WB[1]的结论相同。考虑为PCNA代表细胞增殖活性，一般增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。
, 百拇医药
本试验的结果说明，PCNA的表达是预测乳腺癌预后的一个重要指标，测定乳腺癌中PCNA的表达对指导患者的临床治疗及判定预后均有重要意义。
作者简介：张小玉(1969年～)，女，安徽籍，主治医师，硕士学位，从事肿瘤细胞的凋亡研究。
4 参考文献
[1] Magno WB，Hirsehfieid L，Bhuiya T，et al.Correlation of proliferative index (PCNA reactivity and Ki-67 reactivity) in primary breast carcinoma with hormore status.Lymph node statu and disease-free survival[J].Conn Med，1992，56(12)：667
[2] 龚西俞.有关乳腺导管上皮增生的几个问题[J].临床与实验病理学杂志，1997，13(4)：370
, 百拇医药
[3] 陈忠年，沈铭昌，郭慕依.实用外科病理学[M].上海：上海医科大学出版社，1997.601
[4] Palton LW，Page DL，Dupont WD.Histologic grading of breast carcinoma：A eproducibiligy study[J].Cancer，1994，74(11)：2765～2770
[5] Tahan SR，Neuberg DS，Dieffenbach A，et al.Prediction of early relapse and shorten survival in patients with breast cancer byproliferation cell nuclear antigen score[J].AM J Clin Pathol，1992，97(5 suppl1)：s21
(收稿：2000-05-22), http://www.100md.com
单位：张小玉(东南大学医学院，江苏 南京 210009)；王雷(宁夏石嘴山市卫生防疫站，宁夏 大武口 753000)
关键词：乳腺肿瘤；淋巴转移；预后
宁夏医学杂志001102 【摘要】 目的 探讨增殖细胞核抗原PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。方法 用免疫组化法对80例乳腺癌伴淋巴结转移和无转移组做PCNA检测，并与随访资料进行比较分析。结果 PCNA阳性率在乳腺癌伴淋巴结转移组68.18%，无转移组31.82%，两组间存在显著性差异(P<0.005)。随着组织学分级的增高，PCNA的表达呈递增趋势，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间阳性率差异存在显著性(P<0.01)。5年生存率(30.51%与66.66%)也存在显著差异(P<0.005)。结论 PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后密切相关，是乳腺癌患者预后判定有价值的生物学指标。
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【中图分类号】 R737.9 【文献标识码】 A
文章编号：1001-5949(2000)11-0646-02
Relationship of PCNA expression to lymphnode metastasis and prognosis in breast carcinoma
ZHANG Xiao-yu WANG Lei
(Dept.of Pathology.Nanjing Railway Med.Coll.，Nanjing 210009，China)
【Abstract】 Objectives To study the relationship between the expression of PCNA and the lymphnode metastasis and prognosis of breast cancer.Methods eighty of breast cancer with or without lymphnode metastasis were studied for the expression of PCNA in the tumor′s tissue section by using LSAB method.The result were analysised to the follow up material in this group of patients.Result The positivity rate of PCNA expression in node-positive and in node-negative groups were 80% and 33% respectively(P<0.05) with the increase of histological grade the positivity rate of PCNA expression increased (P<0.05).the node-positive and in node-negative groups were significant difference in 5 years survival rate (31% and 65%)(P<0.005).Conclusions The expression of PCNA in closely linked to lymphnode metastasis and prognosis of breast carcinoma，and should be considered to a certain extent as an index of malignant degree and prognosis.
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【Key words】 Breast neoplasms；Lymphatic metastasis；Prognosis
增殖细胞核抗原PCNA是细胞增殖周期的一种核蛋白，仅存在于细胞周期G1晚期和S期，在细胞DNA合成和增殖活动中发挥重要作用，肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的恶性程度密切相关。近几年来，增殖细胞核抗原PCNA的测定被广泛应用于肿瘤患者的诊断、治疗及预防评价之中。PCNA与乳腺癌淋巴结转移及预后关系的研究国外有所报道[1]，国内报道较少。我们应用免疫组化LSAB法对本院80例乳腺癌患者组织中PCNA的表达情况进行了检测，以探讨PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料：随机选取1992～1994年东南大学医学院外科手术切除或活检的乳腺标本共80例，其中癌旁“正常”乳腺组织(距离组织4cm)22例，增生性乳腺组织，包括普通型及不典型增生11例，导管原位癌7例，浸润性导管癌40例。乳腺癌癌旁组织的判定以及癌组织的分级，参照龚西俞[2]、陈忠年[3]提供的标准判定。病人均为女性，年龄26～74岁，平均52岁，术前均未接受过放疗或化疗，所有的患者术后均随访到1999年。所有的标本都用10%的福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚度4μm。免疫组化所用的PCNA单抗购于北京中山生物制剂公司，LSAB试剂盒购于上海华美生物制剂公司。
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1.2 免疫组化方法：用LSAB法分别检测组织中PCNA的表达。组织切片脱蜡水化，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶10分钟，用1%的胰蛋白酶消化20分钟，加—抗1：100 4℃过夜，其余步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素衬染，树胶封片。试验设阳性对照和阴性对照(PBS代替—抗)，用已知阳性的淋巴瘤组织切片作阳性对照。
1.3 阳性结果判定：肿瘤细胞PCNA为核着色，表现为颗粒或弥漫深浅不等的棕褐色，阳性细胞数>5%判为乳腺癌。
1.4 统计学处理：采用χ2检验。
2 结果
PCNA免疫组化检测结果显示60例乳腺癌标本中PCNA阳性表达者52例，总阳性表达率为65%。
2.1 PCNA表达与患者5年生存率的关系(见表1)：阳性表达组5年生存率30.51%(18/59)，低于阴性表达组的66.66%(14/21)，差异有显著性意义(χ2=8.44，P<0.005)。
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表1 PCNA表达与患者5年生存率的比较 生存期
n
PCNA(-)
例数 %
PCNA(+)
例数 %
5年内死亡组
48
7
33.33
41
68.49
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32
14
66.66
18
30.51
合计
80
21
100
59
100
注：χ2=8.44，P<0.005
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2.2 乳腺癌及癌前病变PCNA阳性率的比较(见表2)表2 乳腺癌及癌前病变PCNA阳性率的比较 类别
n
PCNA(-)
PCNA(+)
PCNA(%)
“正常”乳腺组织
22
18
4
18.18
增生性乳腺组织
11
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6
5
45.45
导管原位癌
7
2
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71.43
浸润性导管癌
40
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82.50
, 百拇医药 合计
80
33
47
58.75
注：χ2=25.52，P<0.005；“正常”乳腺组织与增生性乳腺组织相比，P<0.005
2.3 与乳腺癌腋窝淋巴结转移的关系：80例乳腺癌中伴腋窝淋巴结转移组38例，PCNA阳性30例(68.18%)，42例无淋巴结转移的患者中只有14例阳性表达(31.82%)，差异有显著性意义(P<0.005),见表3。表3 乳腺癌伴腋窝淋巴结转移组和无转移组
PCNA表达的比较
PCNA(+)
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PCNA(-)
阳性率(%)
转移组
30
8
78.95
无转移组
14
28
33.33
合计
44
36
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55
注：χ2=16.77，P<0.005
2.4 PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系：80例乳腺癌按改良Bloom-R标准[4]，即分别根据核异型性、腺管形成情况、核分裂象多少进行评价。根据总分的多少化分为3级，其中Ⅰ级21例，Ⅱ级48例，Ⅲ级11例，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间PCNA阳性率差异有显著性意义(P<0.01，见表4)。
表4 PCNA表达与乳腺癌组织学分级的关系 组织学分级
n
PCNA(+)
PCNA(-)
Ⅰ级
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21
7
14
Ⅱ级+Ⅲ级
59
40
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合计
80
47
33
注：χ2=7.59，0.005
3 讨论
, 百拇医药
增殖细胞核抗原PCNA是真核细胞DNA合成所必需的一种36kd核蛋白，已证明PCNA的表达与细胞周期有关，在G1期PCNA的表达逐渐增加，S期达最高峰，而G2/M期则减少。PCNA的表达可能是DNA多倍体形式表达的一个标记，也成为肿瘤细胞失调状态下的一个标记，检测PCNA可以客观评价肿瘤细胞增殖状态。以往把乳腺癌腋窝淋巴结转移，肿瘤大小，雌、孕激素受体等因素看作是乳腺癌的预后标准，但是结果不是十分满意。近年来国外一些研究表明PCNA与多种肿瘤的预后关系密切，有关PCNA与乳腺癌预后关系的研究也有少量的报道。我们采用LSAB免疫组化法对80例乳腺癌组织进行PCNA表达的检测，发现在癌旁“正常”乳腺组织表达率非常低，随着病变的发展，增生性导管中表达率明显提高，至癌变后，PCNA显著性升高(P<0.05)。PCNA表达率明显提高反映在乳腺癌变过程中，细胞增殖速率加快，我们的研究同时发现在淋巴结转移组与无转移组阳性率差异显著，分别为66.18%及31.82%。并发现PCNA表达与乳腺癌组织学分级关系密切，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在有显著性差异，5年生存率分别为30.51%及66.66%差异有显著性意义。故认为PCNA表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关。这一结果和Tahan SR[5]及Magno WB[1]的结论相同。考虑为PCNA代表细胞增殖活性，一般增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。
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本试验的结果说明，PCNA的表达是预测乳腺癌预后的一个重要指标，测定乳腺癌中PCNA的表达对指导患者的临床治疗及判定预后均有重要意义。
作者简介：张小玉(1969年～)，女，安徽籍，主治医师，硕士学位，从事肿瘤细胞的凋亡研究。
4 参考文献
[1] Magno WB，Hirsehfieid L，Bhuiya T，et al.Correlation of proliferative index (PCNA reactivity and Ki-67 reactivity) in primary breast carcinoma with hormore status.Lymph node statu and disease-free survival[J].Conn Med，1992，56(12)：667
[2] 龚西俞.有关乳腺导管上皮增生的几个问题[J].临床与实验病理学杂志，1997，13(4)：370
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[3] 陈忠年，沈铭昌，郭慕依.实用外科病理学[M].上海：上海医科大学出版社，1997.601
[4] Palton LW，Page DL，Dupont WD.Histologic grading of breast carcinoma：A eproducibiligy study[J].Cancer，1994，74(11)：2765～2770
[5] Tahan SR，Neuberg DS，Dieffenbach A，et al.Prediction of early relapse and shorten survival in patients with breast cancer byproliferation cell nuclear antigen score[J].AM J Clin Pathol，1992，97(5 suppl1)：s21
(收稿：2000-05-22), http://www.100md.com