巨细胞病毒与动脉粥样硬化的临床研究
作者：胡文立 刘敬忠 牛世芹 刘民 石怀银
单位：胡文立 刘敬忠 牛世芹 刘民(首都医科大学附属 北京红十字朝阳医院神经内科，100020)；石怀银(解放军总医院病 理科)
关键词：
中国急救医学001119 我们这篇报道主要研究巨细胞病毒在动脉粥样硬化病人的血管壁、血液中的分布情况，并与 非动脉粥样硬化病人做了对照研究。
1 材料和方法
1.1 为了研究巨细胞病毒(CMV)的发生率，30个病人的冠状动脉壁被用作研究资料；病人 死亡后12小时内行尸解，取30个颈内动脉壁。以上两组资料均为Ⅲ级动脉粥样硬化。另外30 例颈内血管壁均为意外死亡者，没有粥样硬化改变。随机抽取210例动脉粥样硬化性脑梗 死病人的血白细胞用于CMV检查，动脉粥样硬化的诊断根据颈内动脉彩超来确定，有纤维斑 块和钙化斑块者为Ⅲ级动脉粥样硬化。100例健康病人的血白细胞也被用于检查CMV。
, http://www.100md.com
1.2 多聚酸链式反应(PCR) 取30 ml DNA提取物进行扩增。反应物包括10 ml Tri s-HCl(pH9.6)，10 mmol/mg MgCl2，0.2 mg/ml bsa缓冲液，50 mmol NaCl，1 mmol d ATP,1 mmol dGTP(Promeya 公司提供)，0.5 mg各种引物，1 U热稳定多聚酶，2.5～5 mg DNA标本，反应物用20 ml石蜡油覆盖以防蒸发。93℃3分钟预热变化，然后按93℃45秒→55 ℃45秒，→72℃1分钟，共做35个循环，最后置72℃保温5分钟。从扩增的反应管中取10 ml 下层蓝色液体加样，经2%的琼脂凝胶上电泳20～30 min(5 U/cm)后于紫外仪上观察，若在24 4 bp处出现橙黄色条带，则CMV阳性。
2 结果
从表1中可见42.4%的Ⅲ级动脉粥样硬化病人的血中CMV阳性，与健康对照组比较有显著性差 异，P<0.01。
, 百拇医药
表1 血中CMV的分布情况
总例数
阳性数
阳性比率
无动脉粥样硬化
100
3
3%
动脉粥样硬化Ⅲ级
210
89
42.4%
(动脉粥样硬化性脑梗死)
, 百拇医药
表2中可见86.7%的动脉粥样硬化颈动脉标本中见CMV，83.3%的动脉粥样硬化冠状动脉标本 中见CMV，两者之间相比尽管无差异，但健康对照组6.7%的阳性率相比都有显著性差异， P<0.01。表2 动脉壁中CMV的分布情况
总例数
阳性数
阳性比率
颈动脉(粥样硬化Ⅲ级)
30
26
86.7%
冠状动脉(粥样硬化Ⅲ级)
30
, 百拇医药
25
83.3%
颈动脉(无粥样硬化)
30
2
6.7%
3 讨论
近几年国外有资料证实动脉粥样硬 化与巨细胞病毒感染有关[1～6]，为此我们利用PCR技术系统地检查CMV在国人 血和血管壁的分布情况，并证实巨细胞病毒和动脉粥样硬化有着密切的相关性。1983年Fab ricant[1，7]首次用CMV在鸡身上诱发出动脉粥样硬化。1983年Melnick[8 ]在人类动脉粥样硬化组织培养物(平滑肌)中发现了CMV抗原和抗体。1990年Adam[ 3]在动脉粥样硬化病人血中发现了CMV抗体原和抗体。1990年Melnick[8]在动 脉粥样硬化病人的动脉壁中用PCR的方法发现了巨细胞病毒，近期的大多数报告集中于巨细 胞病毒存在于具有动脉粥样硬化的动脉壁内[4，9]，并认为CMV是动脉粥样硬化 的潜在致病因素。
, 百拇医药
Hemdrix[6]用PCR的方法在动脉粥样硬化Ⅲ级的组织中检查出了CMV，且阳性率高达 90 %(27/30)，而Ⅰ级动脉粥样硬化组织中只有53%(18/34)，这与我们的结果基本一致。而Hend rix[5]用原位杂交的方法在Ⅲ级动脉粥样硬化病人的血和动脉壁中检查CMV病毒， 结果显示Ⅲ级动脉粥样硬化组织中只获得了41%(9/22)的阳性率。
我们用PCR-一种非常敏感的方法在中国动脉粥样硬化病人的血和动脉壁中检查CMV病毒，结 果显示Ⅲ级动脉粥样硬化病人的血管壁中CMV的阳性率高达83.3%～86.7%，血中也高达42 . 4%，结果说明动脉粥样硬化性脑梗死和CMV感染有非常密切的关系。通过表1和表2对比，动 脉粥样硬化病人的血管壁中含CMV的比率比血中更高，因此我们可以推论，CMV可能引起或参 与了动脉粥样硬化的过程。CMV在血管壁中的活动可能导致反复的感染，引起血管壁结构 和功能的改变，继发各种炎性细胞和脂质的浸润和沉积，最终导致动脉粥样硬化的形成。目 前的证据已经证实这种假说，即CMV和动脉粥样硬化的病理过程有关，这包括：①CMV在大 众人群中广泛感染，在有损伤的血管壁中发现CMV；②承认CMV加速了动脉粥样硬化；③ 已证实CMV在鸡、人类单纯疮疹病毒在狒狒等动物动脉血管壁平滑肌中可以诱发动脉粥样硬 化，导致脂质沉积[10]，因此CMV是动脉粥样硬化的诱发因素。
, 百拇医药
[参考文献]
[1]Fadricant CG.Virus induced atherosclerosis.J Exp Med,1987,148:335-33 9.
[2]Melnick JL,Petrie BL,Dreesman GR.Cytomegalovirus antiegen within hu man arterial smooth muscle cells.Lancet,1983,2:644-650.
[3]Adam E,Probtsifield JL,Mclollum CH,et al.High levels of cytomegalovi rus antibody in patients requiring vascular surgery for atherosclerosis.Lancet,1 987,2:291-295.
, http://www.100md.com
[4]Petrie BL,Melnick JL,Adam E,et al.Nucleic acids sequences of cytomeg alovirus in cells cultured from human arterial tissue.J Infect Dis,1987,155:158- 159.
[5]Hendrix MGR,Dormans PHJ,Kitslaar P,et al.The presence of cytomegalo virus n ucleic acids in arterial walls of atherosclerotic and nonatherosclerotic patien ts.Am J Pathol,1989,134:1151-1157.
[6]Hendrix MGR,Salimans MMM,Van Boven CPA,et al.High prevalence of late ntly present cytomegalovirus in arterial walls of patients suffering from Grade Ⅲ atherosclerosis.AM J Pathol,1990,136:23-28.
, http://www.100md.com
[7]Fadricant CG,Fadricant J,Milnick CR,et al.Herpes virus-induced athe rosclerosis in chickens.Fed Proc,1983,42:2476-2479.
[8]Melnick JL,Adam E,Michael E,et al.Possible role of cytomegalovirus i n atherosclerosis.JAMA,1990,263:2204-2208.
[9]Yamashiroga HM,Ghosh L,Yang R, et al.Herpesviride in the cor onary arteries and aorta of young trauma victims.Am J Pathol,1988,130:71-79.
[10]Hajjar CP.Viral pathogenesis of atherosclerosis:impact of molecular mimicry and viral genes.Am J Pathol,1991,139:1196-1200.
[收稿：2000-01-14], 百拇医药
单位：胡文立 刘敬忠 牛世芹 刘民(首都医科大学附属 北京红十字朝阳医院神经内科，100020)；石怀银(解放军总医院病 理科)
关键词：
中国急救医学001119 我们这篇报道主要研究巨细胞病毒在动脉粥样硬化病人的血管壁、血液中的分布情况，并与 非动脉粥样硬化病人做了对照研究。
1 材料和方法
1.1 为了研究巨细胞病毒(CMV)的发生率，30个病人的冠状动脉壁被用作研究资料；病人 死亡后12小时内行尸解，取30个颈内动脉壁。以上两组资料均为Ⅲ级动脉粥样硬化。另外30 例颈内血管壁均为意外死亡者，没有粥样硬化改变。随机抽取210例动脉粥样硬化性脑梗 死病人的血白细胞用于CMV检查，动脉粥样硬化的诊断根据颈内动脉彩超来确定，有纤维斑 块和钙化斑块者为Ⅲ级动脉粥样硬化。100例健康病人的血白细胞也被用于检查CMV。
, http://www.100md.com
1.2 多聚酸链式反应(PCR) 取30 ml DNA提取物进行扩增。反应物包括10 ml Tri s-HCl(pH9.6)，10 mmol/mg MgCl2，0.2 mg/ml bsa缓冲液，50 mmol NaCl，1 mmol d ATP,1 mmol dGTP(Promeya 公司提供)，0.5 mg各种引物，1 U热稳定多聚酶，2.5～5 mg DNA标本，反应物用20 ml石蜡油覆盖以防蒸发。93℃3分钟预热变化，然后按93℃45秒→55 ℃45秒，→72℃1分钟，共做35个循环，最后置72℃保温5分钟。从扩增的反应管中取10 ml 下层蓝色液体加样，经2%的琼脂凝胶上电泳20～30 min(5 U/cm)后于紫外仪上观察，若在24 4 bp处出现橙黄色条带，则CMV阳性。
2 结果
从表1中可见42.4%的Ⅲ级动脉粥样硬化病人的血中CMV阳性，与健康对照组比较有显著性差 异，P<0.01。
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表1 血中CMV的分布情况
总例数
阳性数
阳性比率
无动脉粥样硬化
100
3
3%
动脉粥样硬化Ⅲ级
210
89
42.4%
(动脉粥样硬化性脑梗死)
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表2中可见86.7%的动脉粥样硬化颈动脉标本中见CMV，83.3%的动脉粥样硬化冠状动脉标本 中见CMV，两者之间相比尽管无差异，但健康对照组6.7%的阳性率相比都有显著性差异， P<0.01。表2 动脉壁中CMV的分布情况
总例数
阳性数
阳性比率
颈动脉(粥样硬化Ⅲ级)
30
26
86.7%
冠状动脉(粥样硬化Ⅲ级)
30
, 百拇医药
25
83.3%
颈动脉(无粥样硬化)
30
2
6.7%
3 讨论
近几年国外有资料证实动脉粥样硬 化与巨细胞病毒感染有关[1～6]，为此我们利用PCR技术系统地检查CMV在国人 血和血管壁的分布情况，并证实巨细胞病毒和动脉粥样硬化有着密切的相关性。1983年Fab ricant[1，7]首次用CMV在鸡身上诱发出动脉粥样硬化。1983年Melnick[8 ]在人类动脉粥样硬化组织培养物(平滑肌)中发现了CMV抗原和抗体。1990年Adam[ 3]在动脉粥样硬化病人血中发现了CMV抗体原和抗体。1990年Melnick[8]在动 脉粥样硬化病人的动脉壁中用PCR的方法发现了巨细胞病毒，近期的大多数报告集中于巨细 胞病毒存在于具有动脉粥样硬化的动脉壁内[4，9]，并认为CMV是动脉粥样硬化 的潜在致病因素。
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Hemdrix[6]用PCR的方法在动脉粥样硬化Ⅲ级的组织中检查出了CMV，且阳性率高达 90 %(27/30)，而Ⅰ级动脉粥样硬化组织中只有53%(18/34)，这与我们的结果基本一致。而Hend rix[5]用原位杂交的方法在Ⅲ级动脉粥样硬化病人的血和动脉壁中检查CMV病毒， 结果显示Ⅲ级动脉粥样硬化组织中只获得了41%(9/22)的阳性率。
我们用PCR-一种非常敏感的方法在中国动脉粥样硬化病人的血和动脉壁中检查CMV病毒，结 果显示Ⅲ级动脉粥样硬化病人的血管壁中CMV的阳性率高达83.3%～86.7%，血中也高达42 . 4%，结果说明动脉粥样硬化性脑梗死和CMV感染有非常密切的关系。通过表1和表2对比，动 脉粥样硬化病人的血管壁中含CMV的比率比血中更高，因此我们可以推论，CMV可能引起或参 与了动脉粥样硬化的过程。CMV在血管壁中的活动可能导致反复的感染，引起血管壁结构 和功能的改变，继发各种炎性细胞和脂质的浸润和沉积，最终导致动脉粥样硬化的形成。目 前的证据已经证实这种假说，即CMV和动脉粥样硬化的病理过程有关，这包括：①CMV在大 众人群中广泛感染，在有损伤的血管壁中发现CMV；②承认CMV加速了动脉粥样硬化；③ 已证实CMV在鸡、人类单纯疮疹病毒在狒狒等动物动脉血管壁平滑肌中可以诱发动脉粥样硬 化，导致脂质沉积[10]，因此CMV是动脉粥样硬化的诱发因素。
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[参考文献]
[1]Fadricant CG.Virus induced atherosclerosis.J Exp Med,1987,148:335-33 9.
[2]Melnick JL,Petrie BL,Dreesman GR.Cytomegalovirus antiegen within hu man arterial smooth muscle cells.Lancet,1983,2:644-650.
[3]Adam E,Probtsifield JL,Mclollum CH,et al.High levels of cytomegalovi rus antibody in patients requiring vascular surgery for atherosclerosis.Lancet,1 987,2:291-295.
, http://www.100md.com
[4]Petrie BL,Melnick JL,Adam E,et al.Nucleic acids sequences of cytomeg alovirus in cells cultured from human arterial tissue.J Infect Dis,1987,155:158- 159.
[5]Hendrix MGR,Dormans PHJ,Kitslaar P,et al.The presence of cytomegalo virus n ucleic acids in arterial walls of atherosclerotic and nonatherosclerotic patien ts.Am J Pathol,1989,134:1151-1157.
[6]Hendrix MGR,Salimans MMM,Van Boven CPA,et al.High prevalence of late ntly present cytomegalovirus in arterial walls of patients suffering from Grade Ⅲ atherosclerosis.AM J Pathol,1990,136:23-28.
, http://www.100md.com
[7]Fadricant CG,Fadricant J,Milnick CR,et al.Herpes virus-induced athe rosclerosis in chickens.Fed Proc,1983,42:2476-2479.
[8]Melnick JL,Adam E,Michael E,et al.Possible role of cytomegalovirus i n atherosclerosis.JAMA,1990,263:2204-2208.
[9]Yamashiroga HM,Ghosh L,Yang R, et al.Herpesviride in the cor onary arteries and aorta of young trauma victims.Am J Pathol,1988,130:71-79.
[10]Hajjar CP.Viral pathogenesis of atherosclerosis:impact of molecular mimicry and viral genes.Am J Pathol,1991,139:1196-1200.
[收稿：2000-01-14], 百拇医药