HBV DNA定量检测与HBVM的关系及临床意义分析
作者：周文三 唐勤 黄远成 孙余婕
单位：周文三(南京市鼓楼医院210008)；唐勤(南京市鼓楼医院210008)；黄远成(南京市鼓楼医院210008)；孙余婕(中山医科大学达安 基因诊断中心)
关键词：
江苏医药001218 采用荧光定量PCR方法，定量检测了555例 不同HBV感染状况的患者血清HBV DNA含量，旨在探讨HBV DNA含量及其与乙 肝病毒标志物(HBVM)在反映体内 乙肝病毒(HBV)复制方面存在的差异，进一步评价HBVM的临床意义，以及肝炎活动 时肝功能损害与血清中HBV DNA含量的关系。
对象与方法
一、研究对象：555例HBV感染者均为1999年4月～10月我院门诊及住 院患者，男性361例，女性194例；年龄38.97±14.45岁。诊断符合199 5年北京第五次全国病毒性肝炎防治方案病毒性肝炎病原学诊断标准。
, 百拇医药
二、检测试剂及仪器：
1.HBVM：采用深圳月亮湾生物工程有限公司生产的酶联免疫吸附试验(ELISA)试 剂盒检测。
2.HBV DNA定量：采用中山医科大学达安基因诊断中心研制的荧光定量PCR检测试 剂 盒检测。该试剂盒主要包括：①DNA提取液：②纯化HBV DNA质控标准品(HBV DNA 浓度分别为102、103、104、105、106拷贝/μl)；③P CR反应管(包括dNTP、Taq酶、扩增引物一对、荧光标记探针及缓冲液)。试剂灵 敏度为104拷贝/ml(并以<105拷贝/ml定为阴性)。
三、ALT：为日本东芝MEGA自动生化仪测定。
结果
, 百拇医药
一、HBV DNA含量与HBVM的关系(见表1)。
二、HBV DNA含量与ALT的关系：所有HBV DNA(+ )患者中 ，ALT水平由正常～1024U/L之间，相关分析显示，HBV DNA含量与血清 ALT水平比较无明显相关。
讨论
HBV的感染主要依赖于血清特异性抗原抗体系统即HBVM及HBV DNA的检测。而 外 周血中HBV DNA是乙肝病毒复制活动最直接和可靠的指标。既往定性PCR技术检测HBV DNA 只能反映患者血清内病毒的有无，而不能显示病毒量的多少及其变化，且存在着 二次电泳造成样本污染的问题。近年来，随着定量PCR技术的不断发展和完善，使得常规 定量检测HBV DNA成为可能，弥补了定性PCR技术的不足。本研究采用荧光定量P C R方法检测HBV DNA，它融会了PCR技术和DNA探针技术的优点，该方法具有高 度 敏感性和特异性，整个过程均属闭管操作，免除了传统方法的电泳检测等后处理过程，使 PCR污染机会降至最低可能。
, 百拇医药
表1 555例HBV感染者血清HBV DNA含量(拷贝/ml ) 组别
例数
阳性数
(%)
HBV DNA*
(
±s)
P值**
HBeAg(+)/抗HBc(+)
122
122(100)
, http://www.100md.com
7.669±1.073
HBsAg(+)/抗HBe(+)
抗HBc(+)
259
165(63.7)
6.292±0.966
<0. 01
HBsAg(+)/抗HBe(-)
抗HBc(+)
28
21(75)
6.571±1.181
, 百拇医药
<0.01
HBsAg(-)/抗HBe(+)
抗HBc(+)
62
16(25.8)
5.831±0.095
<0.001
抗HBs(+)/或及抗HBc(+)
HBVM(-)
84
71
20(23.8)
, http://www.100md.com
0
5.70±0.742
<0.001
*表中HBV DNA含量为对数值，**与HBeAg(+)比较，显著 性检验用t检验、χ2检验。
本研究结果显示：在HBV感染及既往感染患者中，观察其血清HBV DNA含量与HB V M的关系发现，HBeAg阳性组的HBV DNA阳性率及含量均显著高于HBeAg阴 性 各组；在HBsAg阴性/抗HBe阳性组大部分亦能检出HBV DNA，甚至有高水平 的 病毒复制；在HBeAg阴性/抗HBs阳性及或抗HBe阳性组中亦检出部分有HBV DNA存在，但其含量相对较低。以上说明HBeAg与HBV DNA的相关性很好，但 抗H Be的出现并不意味着HBV DNA的消失即病毒复制的停止而无传染性，该类患者仍存 在 一定的病毒复制水平，甚至有较高的传染性。这可能与其病毒DNA前C区的变异有关。在 乙肝病毒既往感染或静止期中，也有少部分病人仍有低度的病毒复制或传染性，这可能与其 S区基因变异有关。
在观察HBV DNA的含量与ALT的关系中，相关分析显示，HBV DNA的含量与A L T无明显相关，说明HBV DNA的复制程度与肝细胞的损害及其损害程度无明显关系。 目 前认为乙型肝炎病人肝脏损害的机理，主要是机体的免疫应答所致，而不是HBV在肝细胞 内繁殖直接损害的结果。HBV DNA的高含量可能只是乙肝慢性化的主要原因，含量高 预后不良。
我们认为应用荧光定量PCR技术检测HBV DNA的含量，有助于正确判断HBVM 的 临床意义及HBV感染者的预后，也有助于正确评价抗病毒药物的临床疗效。, http://www.100md.com
单位：周文三(南京市鼓楼医院210008)；唐勤(南京市鼓楼医院210008)；黄远成(南京市鼓楼医院210008)；孙余婕(中山医科大学达安 基因诊断中心)
关键词：
江苏医药001218 采用荧光定量PCR方法，定量检测了555例 不同HBV感染状况的患者血清HBV DNA含量，旨在探讨HBV DNA含量及其与乙 肝病毒标志物(HBVM)在反映体内 乙肝病毒(HBV)复制方面存在的差异，进一步评价HBVM的临床意义，以及肝炎活动 时肝功能损害与血清中HBV DNA含量的关系。
对象与方法
一、研究对象：555例HBV感染者均为1999年4月～10月我院门诊及住 院患者，男性361例，女性194例；年龄38.97±14.45岁。诊断符合199 5年北京第五次全国病毒性肝炎防治方案病毒性肝炎病原学诊断标准。
, 百拇医药
二、检测试剂及仪器：
1.HBVM：采用深圳月亮湾生物工程有限公司生产的酶联免疫吸附试验(ELISA)试 剂盒检测。
2.HBV DNA定量：采用中山医科大学达安基因诊断中心研制的荧光定量PCR检测试 剂 盒检测。该试剂盒主要包括：①DNA提取液：②纯化HBV DNA质控标准品(HBV DNA 浓度分别为102、103、104、105、106拷贝/μl)；③P CR反应管(包括dNTP、Taq酶、扩增引物一对、荧光标记探针及缓冲液)。试剂灵 敏度为104拷贝/ml(并以<105拷贝/ml定为阴性)。
三、ALT：为日本东芝MEGA自动生化仪测定。
结果
, 百拇医药
一、HBV DNA含量与HBVM的关系(见表1)。
二、HBV DNA含量与ALT的关系：所有HBV DNA(+ )患者中 ，ALT水平由正常～1024U/L之间，相关分析显示，HBV DNA含量与血清 ALT水平比较无明显相关。
讨论
HBV的感染主要依赖于血清特异性抗原抗体系统即HBVM及HBV DNA的检测。而 外 周血中HBV DNA是乙肝病毒复制活动最直接和可靠的指标。既往定性PCR技术检测HBV DNA 只能反映患者血清内病毒的有无，而不能显示病毒量的多少及其变化，且存在着 二次电泳造成样本污染的问题。近年来，随着定量PCR技术的不断发展和完善，使得常规 定量检测HBV DNA成为可能，弥补了定性PCR技术的不足。本研究采用荧光定量P C R方法检测HBV DNA，它融会了PCR技术和DNA探针技术的优点，该方法具有高 度 敏感性和特异性，整个过程均属闭管操作，免除了传统方法的电泳检测等后处理过程，使 PCR污染机会降至最低可能。
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表1 555例HBV感染者血清HBV DNA含量(拷贝/ml ) 组别
例数
阳性数
(%)
HBV DNA*
(
±s)P值**
HBeAg(+)/抗HBc(+)
122
122(100)
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7.669±1.073
HBsAg(+)/抗HBe(+)
抗HBc(+)
259
165(63.7)
6.292±0.966
<0. 01
HBsAg(+)/抗HBe(-)
抗HBc(+)
28
21(75)
6.571±1.181
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<0.01
HBsAg(-)/抗HBe(+)
抗HBc(+)
62
16(25.8)
5.831±0.095
<0.001
抗HBs(+)/或及抗HBc(+)
HBVM(-)
84
71
20(23.8)
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0
5.70±0.742
<0.001
*表中HBV DNA含量为对数值，**与HBeAg(+)比较，显著 性检验用t检验、χ2检验。
本研究结果显示：在HBV感染及既往感染患者中，观察其血清HBV DNA含量与HB V M的关系发现，HBeAg阳性组的HBV DNA阳性率及含量均显著高于HBeAg阴 性 各组；在HBsAg阴性/抗HBe阳性组大部分亦能检出HBV DNA，甚至有高水平 的 病毒复制；在HBeAg阴性/抗HBs阳性及或抗HBe阳性组中亦检出部分有HBV DNA存在，但其含量相对较低。以上说明HBeAg与HBV DNA的相关性很好，但 抗H Be的出现并不意味着HBV DNA的消失即病毒复制的停止而无传染性，该类患者仍存 在 一定的病毒复制水平，甚至有较高的传染性。这可能与其病毒DNA前C区的变异有关。在 乙肝病毒既往感染或静止期中，也有少部分病人仍有低度的病毒复制或传染性，这可能与其 S区基因变异有关。
在观察HBV DNA的含量与ALT的关系中，相关分析显示，HBV DNA的含量与A L T无明显相关，说明HBV DNA的复制程度与肝细胞的损害及其损害程度无明显关系。 目 前认为乙型肝炎病人肝脏损害的机理，主要是机体的免疫应答所致，而不是HBV在肝细胞 内繁殖直接损害的结果。HBV DNA的高含量可能只是乙肝慢性化的主要原因，含量高 预后不良。
我们认为应用荧光定量PCR技术检测HBV DNA的含量，有助于正确判断HBVM 的 临床意义及HBV感染者的预后，也有助于正确评价抗病毒药物的临床疗效。, http://www.100md.com