中药材 DNA 分子标记研究的技术问题 Ⅰ.植物药基因组 DNA 的提取
作者：郭宝林 李家实 阎玉凝
单位：北京中医药大学 100029
关键词：DNA分子标记；基因组；DNA提取；多糖；酚类
中草药001238
摘 要 随着 DNA 分子标记技术在中药中的广泛应用，快速有效地将 材料中的 DNA 提取出来 成为研究的关键步骤。综述了 90 年代以来文献报道的针对提取过程中出现的各种问题所 采取的相应措施，主要涉及如何去除提取材料中的酚类和多糖类杂质。
DNA 分子标记应用于中药资源、鉴定、栽培等方面有着很好的发展前景，目前研究报道正日 益增多。一般来说，该技术涉及的分子生物学原理比较简单，实验方法也不复杂，但熟练掌 握，灵活运用，并有效地解决实验中出现的各种情况，仍有许多问题值得重视，作者曾就该 研究的策略性问题作过论述[1]，现则着重介绍技术方面的一些关键问题。
, 百拇医药
1 材料的预处理
1.1 洁净：目的是去除任何可能的外源 DNA 污染，如细菌、真菌等。根、茎、果类材料 要用刀认真刮取干净部分。花、叶、种子或小饮片等材料则在尽可能切去菌斑、菌块之后 ，用次氯酸、乙醇浸洗，或用紫外灯照射，有些植物有与细菌或真菌共生现象，菌丝深入到 组织内部，则外来 DNA 不可能去除干净。而有些材料，如冬虫夏草，本身就为多种生物的 复合体，研究时应予以注意。
1.2 粉碎：材料经液氮速冻后粉碎是通用方法。对于新鲜材料，液氮处理可抑制 DNase(D NA 酶)的活性，防止 DNA 的降解，但对干材料，液氮速冻只使材料变脆易磨，因而加玻璃 砂或砂子共研则更经济，效果也很好[2～4]，而且如果没有液氮，对于新鲜材料也 可用砂子共研，只要同时加入提取缓冲液(可抑制 DNase 的活性)即可[5]。
基因组 DNA 的有效提取是进行任何 DNA 下游工作的前提和基础，有效提取指的是得到的基 因组 DNA (或称总 DNA) 有足够的量，尽可少的降解和不含有影响下一步酶反应的杂质，植 物药中的小分子次生产物如萜类、黄酮、香豆素、有机酸、鞣质等含有酚羟基的化合物，氧 化后易与 DNA 结合，引起 DNA 降解或抑制酶的活性，而植物中存在的多糖类由于与 DNA 同属大分子化合物，一般提取过程很难去除干净，也可能影响 DNA 的进一步酶处理或 PCR (聚合酶链式反应) 扩增。
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2 一般提取方法
2.1 CTAB 法[6]：CTAB(Cetyltriethylammonium bromide)是一种去污剂，它可 与核酸形成复合物，这些复合物在高盐溶液(>0.7 mol/L NaCl)中可溶并且稳定存在，但如 果 降低盐的浓度(<0.5 mol/L NaCl)，CTAB 与核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀出来， 大部分的蛋白及多糖仍溶于溶液中。
该方法是植物 DNA 提取的经典方法[7～11]，抽提缓冲液加入一定量的 β-巯基 乙醇，可起到防止酚类氧化的作用，如果材料中酚类成分较多，可将其含量提高至6%[ 12]。技术关键是提取过程加入 10% CTAB 提取液和 1% CTAB 沉淀缓冲液的量一定要准 确，否则 CTAB-DNA 复合物沉淀不易产生或得到的 DNA 会有部分降解[13，14]。
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当材料中多糖少时，可不用 1% CTAB 沉淀缓冲液来沉淀 DNA，在经氯仿-异戊醇(24∶1)抽 提之后，用异丙醇或乙醇沉淀 DNA，使提取过程简化[15，16]。
2.2 SDS 法[7]：SDS(Sodium dodecyl sulfate)是阳离子去污剂。用含有高浓度 SDS 的抽提缓冲液在 55 ℃ 对植物细胞进行裂解后，用提高盐浓度(KAc 或 NH4Ac)和降 低温度(冰上保温)的办法沉淀除去蛋白和多糖，剩下的 DNA 再进一步纯化，该法提取出的 DNA 常含有较多的多糖，但如果材料本身多糖含量不高或其含量未超过一定限度而对进一步 研究无影响时仍可使用。已有较多使用 SDS 法提取 DNA 成功的报道[17～19]。
3 DNA 提取过程中杂质的去除
对于幼嫩的材料(鲜品或硅胶快速干燥品)，一般方法都可得到很好的 DNA，但对于中药，研 究材料常常无法选择。各种各样的来源、药用部位、采收季节、加工方法及贮藏条件都将会 碰到，虽然中药的 DNA 提取方法已有一些报道[13，17]，但目前尚没有通用的方 法。针对某一具体材料，常规的方法可能都不奏效，如何去除上述的两类主要杂质，下列处 理办法可供参考。
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3.1 去除多糖：如果材料中含有较多多糖，一般提取方法将很难去除。多糖常与 DNA 共 沉淀 而使沉淀物呈胶冻状。少量的多糖一般不影响 DNA 的限制性酶解或扩增，但当下一步研究 无法进行时，则要考虑在提取 DNA 过程中去除多糖。
3.1.1 在 DNA 未溶出之前，先用一些缓冲液洗去多糖。如可用缓冲液：100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol洗几次[3，20]。
3.1.2 使 DNA 提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入 0.35 倍体积的无水乙醇，迅 速混匀，多糖会先沉淀[22]。
3.1.3 沉淀 DNA 时，使多糖保留在溶液中。
1)高盐法：如用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入 1/2 体积的 5 mol/L NaCl[23] ，或加 NH4Ac 使终浓度为 10 mmol/L[24]。
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2)PEG(聚乙二醇，WT 8 000)代替乙醇沉淀 DNA：如在500 μL DNA 液中加入200 μL 20% P E G 8000 (含 1.2 mol/L NaCl，冰浴 20 min)[18] 或 0.5 mL DNA 液中加 0.12 5 mL 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000(冰浴 1 h)[24]。
3.1.4 多糖和 DNA 的共沉淀物进行再分离。如用 TE(DNA 溶解缓冲液)反复清洗共沉淀 物，将清洗液合并再用醇沉淀 DNA[25]；或将沉淀物溶解后，经琼脂糖电泳，切下 DNA 部分再将胶回收[12]，或者用多糖水解酶将多糖降解[21，31]。还 有在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用而去除多糖 [27]。
上述方法还可组合使用，以达到最佳效果[3，28]。然而这些方法均会在一定程度 上 减低 DNA 的提取量；如果材料较少或要求较高，则可考虑用柱层析方法，使用对 DNA 具有 特异性吸附的树脂来纯化 DNA，可选用 Wizard Purification Kit(作者经验)，PRC-5 柱 [19]，Sephacryl S-1000 或 S-500[18]，Qiagen Genomic tip 500/G [26]，或者 CsCl 梯度离心纯化 DNA。
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3.2 去除酚类：含有酚类杂质的 DNA 其沉淀物多呈黄色至褐色，难以溶解或溶液色深。 由于酚类化合物在植物材料中存在十分普遍，因而抽提缓冲液中要加入一定量的 β-巯基 乙醇(防止酚氧化)，PVP (聚乙烯吡咯烷酮，可与酚类结合)也十分常用，但有时仍无法全部 去除。可以考虑下述方法。
3.2.1 对酚类的预提取(清洗)：对未粉碎的干材料可水浸过夜，主要去除水溶性鞣质等 [18]，对粉碎后的材料用丙酮浸提，去除脂溶性酚类化合物(作者经验)，或用可去 除酚类的缓冲液清洗(0.25 mol/L NaCl,0.2 mol/L Tris-HCl,50 mmol/L EDTA，2%～4% PVP)(作者经验)。
3.2.2 抽提液中再加一些防止酚类氧化的试剂：多是一些抗氧化剂，如抗坏血酸(参考终 浓度 30～60 mmol/L)[17]、半胱氨酸(10～60 mmol/L)[19]、亚硫酸钠( 10 mmol/L)[29]、二硫苏糖醇(0.1%)[21]及二乙基二硫氨基甲酸(4 mmol /L或0.5%)[30]。
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3.2.3 抽提液中再加入易与酚类结合的试剂：这类试剂与酚类有较强的亲和力，可防止 酚类与 DNA 的结合，PVP 属于这一类，还有 PEG(聚乙二醇)(参考终浓度 10%)[5] 。
在 SDS 法中调整抽提液为低 pH 值(pH=5.5)，使酚类呈未解离状态，也可防止其氧化 [17，19]。
酚类杂质也可用上述提到的柱层析纯化，对于既含多糖又有多量酚类的材料，去除两类杂质 的方法常组合使用。
4 花(孢)粉、种子或浸制标本的 DNA 提取
4.1 花(孢)粉：有效破除花(孢)粉壁是花(孢)粉 DNA 提取的关键，Simel 比较了前人报 道的多种方法，如 MMNO(4-methylmorpholin-N-oxide)处理，渗透破 裂，快速冷冻，微 波降解，酸碱处理并加纤维素、半纤维素酶消化，以及微珠机械粉碎等方法，试验了 8 种 裸子植物和被子植物花粉，以用最后一种方法最好，提取介质为十二烷基磺酸锂(lithium dodecyl sulfate)优于 SDS 和 CTAB[31]。
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4.2 种子：种子中常贮藏较多的蛋白和淀粉，一般不影响 DNA 的有效提取，CTAB 法和 S DS 法均可，得到的 DNA 一般有些降解，与种子的贮存时间呈正相关，但情况好于腊叶标本 材料[14，32]。
4.3 浸制标本：有时会需要从浸制标本中提取 DNA。不论浸液是卡诺固定液、FAA 或 不同 浓度的醇均对材料中的蛋白起作用，使得染色体中与 DNA 结合的蛋白质不易解离，提 取介质中一定要加入蛋白酶，Proteinase E 或 Proteinase K 均可[33]。
5 DNA 质量的检测
提取得到 DNA 要进行数量和质量的检测。
5.1 外观：好的 DNA 沉淀为白色，干后透明。如果干后仍呈白色，常因蛋白较多；若呈 黄至棕色，则是有多酚类杂质；呈胶冻状则含有多糖。
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5.2 紫外分光光度法[19]
1)测量 260 nm 处的紫外吸收值，用于定量，每个 OD 值相当于 DNA 浓度为 50 μg/mL。
2)A260/A280比值若为 1.80 左右，则 DNA 比较干净：>1.80，则含有 R N A；<1.80，则含有蛋白质，需要去除。前者用 RNase 将 RNA 降解，后者可用酚/氯仿再 抽提。
如果含有其它小分子杂质(药材中常有)，它们在相应波长可能有吸收，则单从 OD 值的变化 情况无法很好地判断 DNA 的纯度。
5.3 琼脂糖凝胶法
1)琼脂糖电泳后胶孔处有 EB(溴化乙锭)吸收，表明有多糖。
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2)未降解的 DNA，电泳时用标准量的 λDNA 进行定量。
3)干药材的DNA 大多降解，电泳呈弥散状(不同的材料降解的程度不同)，可点于凝胶上，与 标准量的 DNA(分子量较小)通过紫外投射大致定量。
5.4 DNA 中是否有影响 PCR 或酶切的杂质，则要根据实验的需要进行相应反应的试验才 可确定。
总之，植物药 DNA 的提取对于具体的材料还是一个需要不断摸索的过程，今后的研究中将 会积累更多的经验。
Address: Guo Ba olin Beijing University of TCM, Beijing
郭宝林 医学博士，副研究员，现为北京中医药大学博士后。研究方向为药用植物(中药)的 分类、资源和质量评价；分子生物学在中药中的应用是目前的主要研究内容。研究对象曾涉 及淫羊藿、珍珠菜、牡丹、芍药、厚朴及金丝桃等，发表论文近40篇，现承担多项国家级和 部级研究课题。
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参 考 文 献
1，郭宝林.世界科学技术——中药现代化，2000，2：39
2，王培训，黄，丰，周，联，等.中药新药与临床药理，1999，10：18[ ZK)〗
3，Scott K D,Playford J.BioTech,1996,20:974
4，Guillemant P,Marechal L.Plant Mol Biol Rep,1992,10:60
5，Ouenzar B,Hartmann C,Rode A,et al.Plant Mol B iol Rep,1998,16:263
6，Doyle J J,Doyle J L.Phytochem Bull,1987,19:11
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7，顾红雅，瞿礼嘉，明小天，等编.植物基因与分子操作.北京：北京大 学出版社，1995：19
8，曹，晖，毕培曦，邵鹏柱，等.中药材，1996，19：608
9，黄璐琦，王，敏，周长征，等.药学学报，1998，33：778
10，Cheng K T,Su C H,Chang H C,et al.Planta Med,1998,64: 45
11，Perry M D,Darey M R,Power J B,et al.Plant Mol Biol R ep,1998,16:49
12，Aldrich J,Cullis A.Plant Mol Biol Rep,1993,11:128
, 百拇医药 13，Cao H,But P P,Shaw P.J Chem Pharm Sci,1998,7:130
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16，Singh M,Bandana,Ahuja P S.Plant Mol Biol Rep,1999,17 :171
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22，Michaels S D,John M C,Amasino R M.BioTech,1994,17:274
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27，Simel E J,Saidak L R,Tuskan G A.BioTech,1997,22:390
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31，Rether B,Delmas G,Laovedu A.Plant Mol Biol Rep， 1993,11:333
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33，Flouruoy L E,Adams R P,Pandy R N.BioTech,1996,20:657
(2000-06-19收稿), 百拇医药
单位：北京中医药大学 100029
关键词：DNA分子标记；基因组；DNA提取；多糖；酚类
中草药001238
摘 要 随着 DNA 分子标记技术在中药中的广泛应用，快速有效地将 材料中的 DNA 提取出来 成为研究的关键步骤。综述了 90 年代以来文献报道的针对提取过程中出现的各种问题所 采取的相应措施，主要涉及如何去除提取材料中的酚类和多糖类杂质。
DNA 分子标记应用于中药资源、鉴定、栽培等方面有着很好的发展前景，目前研究报道正日 益增多。一般来说，该技术涉及的分子生物学原理比较简单，实验方法也不复杂，但熟练掌 握，灵活运用，并有效地解决实验中出现的各种情况，仍有许多问题值得重视，作者曾就该 研究的策略性问题作过论述[1]，现则着重介绍技术方面的一些关键问题。
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1 材料的预处理
1.1 洁净：目的是去除任何可能的外源 DNA 污染，如细菌、真菌等。根、茎、果类材料 要用刀认真刮取干净部分。花、叶、种子或小饮片等材料则在尽可能切去菌斑、菌块之后 ，用次氯酸、乙醇浸洗，或用紫外灯照射，有些植物有与细菌或真菌共生现象，菌丝深入到 组织内部，则外来 DNA 不可能去除干净。而有些材料，如冬虫夏草，本身就为多种生物的 复合体，研究时应予以注意。
1.2 粉碎：材料经液氮速冻后粉碎是通用方法。对于新鲜材料，液氮处理可抑制 DNase(D NA 酶)的活性，防止 DNA 的降解，但对干材料，液氮速冻只使材料变脆易磨，因而加玻璃 砂或砂子共研则更经济，效果也很好[2～4]，而且如果没有液氮，对于新鲜材料也 可用砂子共研，只要同时加入提取缓冲液(可抑制 DNase 的活性)即可[5]。
基因组 DNA 的有效提取是进行任何 DNA 下游工作的前提和基础，有效提取指的是得到的基 因组 DNA (或称总 DNA) 有足够的量，尽可少的降解和不含有影响下一步酶反应的杂质，植 物药中的小分子次生产物如萜类、黄酮、香豆素、有机酸、鞣质等含有酚羟基的化合物，氧 化后易与 DNA 结合，引起 DNA 降解或抑制酶的活性，而植物中存在的多糖类由于与 DNA 同属大分子化合物，一般提取过程很难去除干净，也可能影响 DNA 的进一步酶处理或 PCR (聚合酶链式反应) 扩增。
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2 一般提取方法
2.1 CTAB 法[6]：CTAB(Cetyltriethylammonium bromide)是一种去污剂，它可 与核酸形成复合物，这些复合物在高盐溶液(>0.7 mol/L NaCl)中可溶并且稳定存在，但如 果 降低盐的浓度(<0.5 mol/L NaCl)，CTAB 与核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀出来， 大部分的蛋白及多糖仍溶于溶液中。
该方法是植物 DNA 提取的经典方法[7～11]，抽提缓冲液加入一定量的 β-巯基 乙醇，可起到防止酚类氧化的作用，如果材料中酚类成分较多，可将其含量提高至6%[ 12]。技术关键是提取过程加入 10% CTAB 提取液和 1% CTAB 沉淀缓冲液的量一定要准 确，否则 CTAB-DNA 复合物沉淀不易产生或得到的 DNA 会有部分降解[13，14]。
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当材料中多糖少时，可不用 1% CTAB 沉淀缓冲液来沉淀 DNA，在经氯仿-异戊醇(24∶1)抽 提之后，用异丙醇或乙醇沉淀 DNA，使提取过程简化[15，16]。
2.2 SDS 法[7]：SDS(Sodium dodecyl sulfate)是阳离子去污剂。用含有高浓度 SDS 的抽提缓冲液在 55 ℃ 对植物细胞进行裂解后，用提高盐浓度(KAc 或 NH4Ac)和降 低温度(冰上保温)的办法沉淀除去蛋白和多糖，剩下的 DNA 再进一步纯化，该法提取出的 DNA 常含有较多的多糖，但如果材料本身多糖含量不高或其含量未超过一定限度而对进一步 研究无影响时仍可使用。已有较多使用 SDS 法提取 DNA 成功的报道[17～19]。
3 DNA 提取过程中杂质的去除
对于幼嫩的材料(鲜品或硅胶快速干燥品)，一般方法都可得到很好的 DNA，但对于中药，研 究材料常常无法选择。各种各样的来源、药用部位、采收季节、加工方法及贮藏条件都将会 碰到，虽然中药的 DNA 提取方法已有一些报道[13，17]，但目前尚没有通用的方 法。针对某一具体材料，常规的方法可能都不奏效，如何去除上述的两类主要杂质，下列处 理办法可供参考。
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3.1 去除多糖：如果材料中含有较多多糖，一般提取方法将很难去除。多糖常与 DNA 共 沉淀 而使沉淀物呈胶冻状。少量的多糖一般不影响 DNA 的限制性酶解或扩增，但当下一步研究 无法进行时，则要考虑在提取 DNA 过程中去除多糖。
3.1.1 在 DNA 未溶出之前，先用一些缓冲液洗去多糖。如可用缓冲液：100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol洗几次[3，20]。
3.1.2 使 DNA 提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入 0.35 倍体积的无水乙醇，迅 速混匀，多糖会先沉淀[22]。
3.1.3 沉淀 DNA 时，使多糖保留在溶液中。
1)高盐法：如用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入 1/2 体积的 5 mol/L NaCl[23] ，或加 NH4Ac 使终浓度为 10 mmol/L[24]。
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2)PEG(聚乙二醇，WT 8 000)代替乙醇沉淀 DNA：如在500 μL DNA 液中加入200 μL 20% P E G 8000 (含 1.2 mol/L NaCl，冰浴 20 min)[18] 或 0.5 mL DNA 液中加 0.12 5 mL 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000(冰浴 1 h)[24]。
3.1.4 多糖和 DNA 的共沉淀物进行再分离。如用 TE(DNA 溶解缓冲液)反复清洗共沉淀 物，将清洗液合并再用醇沉淀 DNA[25]；或将沉淀物溶解后，经琼脂糖电泳，切下 DNA 部分再将胶回收[12]，或者用多糖水解酶将多糖降解[21，31]。还 有在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用而去除多糖 [27]。
上述方法还可组合使用，以达到最佳效果[3，28]。然而这些方法均会在一定程度 上 减低 DNA 的提取量；如果材料较少或要求较高，则可考虑用柱层析方法，使用对 DNA 具有 特异性吸附的树脂来纯化 DNA，可选用 Wizard Purification Kit(作者经验)，PRC-5 柱 [19]，Sephacryl S-1000 或 S-500[18]，Qiagen Genomic tip 500/G [26]，或者 CsCl 梯度离心纯化 DNA。
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3.2 去除酚类：含有酚类杂质的 DNA 其沉淀物多呈黄色至褐色，难以溶解或溶液色深。 由于酚类化合物在植物材料中存在十分普遍，因而抽提缓冲液中要加入一定量的 β-巯基 乙醇(防止酚氧化)，PVP (聚乙烯吡咯烷酮，可与酚类结合)也十分常用，但有时仍无法全部 去除。可以考虑下述方法。
3.2.1 对酚类的预提取(清洗)：对未粉碎的干材料可水浸过夜，主要去除水溶性鞣质等 [18]，对粉碎后的材料用丙酮浸提，去除脂溶性酚类化合物(作者经验)，或用可去 除酚类的缓冲液清洗(0.25 mol/L NaCl,0.2 mol/L Tris-HCl,50 mmol/L EDTA，2%～4% PVP)(作者经验)。
3.2.2 抽提液中再加一些防止酚类氧化的试剂：多是一些抗氧化剂，如抗坏血酸(参考终 浓度 30～60 mmol/L)[17]、半胱氨酸(10～60 mmol/L)[19]、亚硫酸钠( 10 mmol/L)[29]、二硫苏糖醇(0.1%)[21]及二乙基二硫氨基甲酸(4 mmol /L或0.5%)[30]。
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3.2.3 抽提液中再加入易与酚类结合的试剂：这类试剂与酚类有较强的亲和力，可防止 酚类与 DNA 的结合，PVP 属于这一类，还有 PEG(聚乙二醇)(参考终浓度 10%)[5] 。
在 SDS 法中调整抽提液为低 pH 值(pH=5.5)，使酚类呈未解离状态，也可防止其氧化 [17，19]。
酚类杂质也可用上述提到的柱层析纯化，对于既含多糖又有多量酚类的材料，去除两类杂质 的方法常组合使用。
4 花(孢)粉、种子或浸制标本的 DNA 提取
4.1 花(孢)粉：有效破除花(孢)粉壁是花(孢)粉 DNA 提取的关键，Simel 比较了前人报 道的多种方法，如 MMNO(4-methylmorpholin-N-oxide)处理，渗透破 裂，快速冷冻，微 波降解，酸碱处理并加纤维素、半纤维素酶消化，以及微珠机械粉碎等方法，试验了 8 种 裸子植物和被子植物花粉，以用最后一种方法最好，提取介质为十二烷基磺酸锂(lithium dodecyl sulfate)优于 SDS 和 CTAB[31]。
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4.2 种子：种子中常贮藏较多的蛋白和淀粉，一般不影响 DNA 的有效提取，CTAB 法和 S DS 法均可，得到的 DNA 一般有些降解，与种子的贮存时间呈正相关，但情况好于腊叶标本 材料[14，32]。
4.3 浸制标本：有时会需要从浸制标本中提取 DNA。不论浸液是卡诺固定液、FAA 或 不同 浓度的醇均对材料中的蛋白起作用，使得染色体中与 DNA 结合的蛋白质不易解离，提 取介质中一定要加入蛋白酶，Proteinase E 或 Proteinase K 均可[33]。
5 DNA 质量的检测
提取得到 DNA 要进行数量和质量的检测。
5.1 外观：好的 DNA 沉淀为白色，干后透明。如果干后仍呈白色，常因蛋白较多；若呈 黄至棕色，则是有多酚类杂质；呈胶冻状则含有多糖。
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5.2 紫外分光光度法[19]
1)测量 260 nm 处的紫外吸收值，用于定量，每个 OD 值相当于 DNA 浓度为 50 μg/mL。
2)A260/A280比值若为 1.80 左右，则 DNA 比较干净：>1.80，则含有 R N A；<1.80，则含有蛋白质，需要去除。前者用 RNase 将 RNA 降解，后者可用酚/氯仿再 抽提。
如果含有其它小分子杂质(药材中常有)，它们在相应波长可能有吸收，则单从 OD 值的变化 情况无法很好地判断 DNA 的纯度。
5.3 琼脂糖凝胶法
1)琼脂糖电泳后胶孔处有 EB(溴化乙锭)吸收，表明有多糖。
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2)未降解的 DNA，电泳时用标准量的 λDNA 进行定量。
3)干药材的DNA 大多降解，电泳呈弥散状(不同的材料降解的程度不同)，可点于凝胶上，与 标准量的 DNA(分子量较小)通过紫外投射大致定量。
5.4 DNA 中是否有影响 PCR 或酶切的杂质，则要根据实验的需要进行相应反应的试验才 可确定。
总之，植物药 DNA 的提取对于具体的材料还是一个需要不断摸索的过程，今后的研究中将 会积累更多的经验。
Address: Guo Ba olin Beijing University of TCM, Beijing
郭宝林 医学博士，副研究员，现为北京中医药大学博士后。研究方向为药用植物(中药)的 分类、资源和质量评价；分子生物学在中药中的应用是目前的主要研究内容。研究对象曾涉 及淫羊藿、珍珠菜、牡丹、芍药、厚朴及金丝桃等，发表论文近40篇，现承担多项国家级和 部级研究课题。
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参 考 文 献
1，郭宝林.世界科学技术——中药现代化，2000，2：39
2，王培训，黄，丰，周，联，等.中药新药与临床药理，1999，10：18[ ZK)〗
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(2000-06-19收稿), 百拇医药