反义TNF-α寡脱氧核苷酸降低多器官功能不全综合征大鼠死亡率
作者：卢应民 荆小莉 王东平 关开泮
单位：卢应民 关开泮(中山医科大学附属第一医院急诊科，广州 510080)；荆小莉 王东平(中山医科大学附属第一医院急诊科，广州 510080)
关键词：反义寡脱氧核苷酸；肿瘤坏死因子-α；多器官功能不全综合征
中国急救医学001202 [摘 要]目的 观察反义肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fa ctor-alpha, TNF-α)寡脱氧核苷酸对酵母多糖A(zymosan A)诱导的多器官功能不全综合征( multiple organ dysfunction syndrome, MODS)大鼠的影响，探讨MODS的发病机制，为采用 反义技术降低MODS死亡率的早期临床试验提供实验依据。方法 采 用静脉注射方法，使反义TNF-α寡脱氧核苷酸(ODN)作用于zymosan A诱导的MODS大鼠：①采 用RT-PCR，ELISA检测大鼠肝TNF-α的mRNA和蛋白质的表达水平；②观察大鼠在不同时期的 死亡率；③在zymosan A诱导大鼠MODS 24小时后采集股动脉血进行血气分析，采集外周血进 行血清生化检测，并进行统计学分析。结果 反义TNF-α ODN降低 了zymosan A诱导的MODS大鼠的TNF-α的释放，降低了MODS大鼠的死亡率，而正义TNF-α OD N和错配TNF-α ODN与对照组相比，对TNF-α的释放无影响，未能降低MODS大鼠的死亡率。 结论 反义TNF-α ODN以序列特异性方式抑制了zymosan A诱导的MO DS大鼠的TNF-α的释放，降低了MODS大鼠的死亡率。
, 百拇医药
[中图分类号]R 442.8 [文献标识码]A [文章编号]1002-1949(2000)12-0694-03
Antisense TNF-α oligodeoxynucleotide decreases mortality in multiple organ dysf unction syndrome mice
LU Ying-min
(Department of Internal Medicine, Puning Overseas Chi nese Hospital,Guangzhou 515300;)
JING Xiao-li WANG Dong-ping
(Emergency Department, the First Affialiate d Hospital of Sun yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510080, China)
, 百拇医药
[Abstract]Objective To evaluate the effect of antisense phosphrothioate tumor necrosis factor-alhpa(TNF-α) oligodeoxynucleotide(ODN) o n mortality in multiple organ dysfunction syndrome(MODS) rat induced by zymosan A . The investigation provides the basis for the early clinical trials assessing t he therapeutic potential of antisense TNF-α approach for decreasing death rate in MODS.Methods MODS rat model was induced by intraperitone al injection zymosan A. Rat antisense TNF-α ODN was applied to the reticular-e nd otheial system in MODS SD rat RT-PCR was used to detect rat liver TNF-α mRNA. p H,PaCOa and PaO2 from artarial blood and LDH, ALT, Cr and TNF-α from venous blood were monitored after zymosan A induced MODS.Results The antisense TNF-α ODN can suppress release of TNF-α and reduce mortality in MODS rat induced by zymosan A, but sense or mismatched TNF-α ODN can′t.Conclusions The results suggest antisense TNF-α ODN significant ly suppressed production of TNF-α in MODS. The investigation provides the basis for the early clinical trials assessing the therapeutic potential of antisense TNF-α approach for decreasing death rate in MODS.
, 百拇医药
[Key words] Oligodeoxynucleotides; Antisense technology; Tumor nec rosis factor-alpha; Multiple organ dysfunction syndrome
多器官功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)发病急，进展快， 死亡率高达40%～60%[1]，是目前危重病医学研究的重要课题之一。肿瘤坏死因子 -α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)在MODS中处于起动和轴心的位置，对MODS的病 情发展起着重要作用[2]。本研究采用TNF-α mRNA包括腺嘌呤(AUG)在内的前6 个密码子的翻译起始区的反义TNF-α ODN，通过静脉注射方法，观察反义TNF-α寡脱氧核苷 酸对zymosan A诱导的MODS大鼠的影响。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料 TNF-α ODN：中国科学院上海生物工程研究中心合成；ODN的5′和3′端各3个 磷 酸二酯键经过硫代磷酸修饰。正义TNF-α ODN：5′ atg agc aca gaa agc atg 3′；反义T NF-α ODN：5′ cat gct ttc tgt gct cat 3′；错配TNF-α ODN：5′ cat tct gtc cgt gtt atc 3′。DOTAP：Boehringer Marmnnheim； zymosan A:Sigma； RT-PCR kit:Promega ； Rat TNF-α ELISA kit:深圳晶美公司；SD大鼠：中山医科大学实验动物中心。
1.2 方法
1.2.1 实验分组 SD大鼠，雌雄各半，体重250～300 g，随机分成4个组，造MODS大鼠模 型前6小时静脉注射下列药物：对照组，生理盐水200 μl；正义TNF-α ODN组，生理盐水20 0 μl含正义TNF-α ODN 4 mg/kg；反义TNF-α ODN组，生理盐水200 μl含反义TNF-α ODN 0.4 mg/kg；错配TNF-α ODN组，生理盐水200 μl含错配TNF-α ODN 0.4 mg/kg。每组 各20只 ，取6只观察各指标的变化，另14只用于观察死亡率的变化。
, 百拇医药
1.2.2 MODS大鼠模型的制备 按1.0 mg/kg体重腹腔注射酵母多糖-液体石蜡混悬液(100 mg/ml)，注射后轻揉腹壁片剂。
1.2.3 观察项目和方法 ①观察一般情况和各组动物在不同时期的死亡率；②于造模后2 4小时在苯巴比妥钠(40 mg/kg ip)麻醉下采集股动脉血进行血气分析(pH、PaCO2、PaO2 )，采集外周血进行血清生化(LDH、ALT、Cr)和TNF-α检查；③造模后24小时处按文献[2] 提取大鼠肝脏总RNA，按RT-PCR Kit提供的方法进行RT-PCR。反转录后PCR所用的引物 如下述。上游引物：5′-TCG GTG TCA ACG GAT TTG GC-3′，下游引物：5′-CTC GTG GTT CAC ACC CTT CAC-3′，产物398 bp。Denaturation 93℃×1 min，Annealing 50℃×1 min ，extension 72℃×2 min，35 cycles,final extension 72℃×5 min。以一对引物(Sens e, 5′-CAT AGA CAA GAT GCT GAA GG-3′, Anti-sense 5′-GAC AAT CTT GAG GGA GTT GT C 3′，产物445 bp)，扩增大鼠看家基因GAPDH的mRNA为阳性内参照，方法同上。
, 百拇医药
1.2.4 资料统计 实验数据用
±s表示。采用计算机医用统计程序( SPSS/PC)对数据进行F及q检验。
2 结果
2.1 TNF-α ODN对大鼠生存率的影响
与对照组相比反义TNF-α ODN能显著降低LPS诱导的MODS大鼠死亡率，正义、错配TNF-α OD N组与对照组相比，差异无显著性(见图1)。
图1 反义TNF-αODN降低酵母多糖A诱导的MODS大鼠死亡率
对4组SD大鼠腹腔内注射酵母多糖A(mg/g)，大腹腔注射前6小时分别静脉注射生理盐水200μl(—◆—);
, 百拇医药
生理盐水200μl含正义TNF-αODN(0.4mg/kg—■—)；生理盐水200μl含反义TNF-αODN
(0.4mg/kg—▲—)；生理盐水200μl含错配TNF-αODN(0.4mg/kg—×—)。随后7天内观察大鼠死亡率
2.2 各组血气分析、TNF-α和重要器官功能的改变 反义TNF-α ODN能降低MODS大鼠各脏 器的损害程度，抑制MODS大鼠TNF-α的释放，但对TNF-α的基础释放无影响(见附表)。附表 各组血气分析和生化指标改变(
±s) Group
pH
PaO2(kPa)
PaCO2( kPa)
, http://www.100md.com
LDH(U/L)
ALT(U/L)
Cr(μmol/L)
TNF-α(mg/ml)
Control(n=6)
7.36±0.058
7.30±2.16
6 .51±0.48
923±72.33
44.58±5.24
30.11±7.90
, 百拇医药 4.52±0.63
sense(n=6)
7.30±0.078
7.79±1.91
6.72±0.79
1031±87 .46
48.69±6.19
33.27±7.12
4.36±0.45
antisense(n=6)
7.40±0.032
, 百拇医药 9.22±2.67
5.89±0.61
150.55 ±26.67
35.02±4.04
22.42±2.08
3.37±0.46
mismatch(n=6)
7.19±0.066
7.80±2.86
6.70±0.54
994±92 .72
, 百拇医药 46.75±5.53
34.11±7.62
4.55±0.58
2.3 反义TNF-α ODN对MODS大鼠单核吞噬细胞系统TNF-α mRNA表达的影响
与对照组、正义、错配TNF-α ODN组相比，反义TNF-α ODN能显著抑制zymosan A诱导大鼠 单核吞噬细胞系统TNF-α mRNA的表达(见图2)。
图2 酵母多糖A诱导的MODS大鼠肝脏TNF-αmRNA
道2，3，4，5分别为反义，错配，正义TNF-αODN和对照组。每道电泳各加入5ml，TNF-αmRNA
, 百拇医药
RT-PCR产物(398bp)。大鼠GAPDHmRNA RT-PCR产物用于上样的内参照。道1为PCR Marker。
可明显看到反义TNF-αODN对MODS大鼠TNF αmRNA的抑制作用。
3 讨论
大量研究表明[4，5]，无论是感染或非感染病因，都通过炎症介质和细胞因子过度 释放，即全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)而引起M ODS。SIRS是MODS发生的基础，失控的SIRS最终导致多器官衰竭(multiple organ failure， MOF)，MOF是MODS的晚期最终结局。限制失控的炎症的发展可能降低MOF的发生率。众多实验 证实，TNF-α在SIRS中起启动和轴心作用：①给人注射内毒素后，TNF增高及峰值出现时间 都比IL-1、IL-6早得多；②给人注射TNF或内毒素，引起相似的代谢反应；给TNF能出现与创 伤后相似反应，TNF能介导急性期蛋白合成，诱生其他细胞因子、生长因子、内分泌激素以 及花生四烯酸产物；③给予抗TNF单体能提高注射致死量细菌的动物的存活率，并减少其IL- 1和IL-6升高的程度。因此，降低TNF的过高水平有可能降低MODS的死亡率。
, 百拇医药
反义ODN不论在体内和体外能选择性地抑制靶mRNA翻译成功能性蛋白质在于它能于序列特异 性的方式抑制基因的表达[7]，反义ODN极有可能成为治疗众多疾病的新方法。已有 实验证实，与某一特定mRNA互补的ODN，能通过受体介导的胞饮作用进入细胞，阻断核糖体 的移位[8]，或通过Rnase H介导的消化降解mRNA，从而阻断蛋白质的翻译[9 ]。因此，采用设计恰当的反义ODN能明显降低细胞因子的生成[10]。
我们设计的反义TNF-α ODN所针对的靶序列是大鼠TNF-α mRNA翻译起始区的前5个密码子， 本研究对ODN两端进行了硫代磷酸修饰，它能起抵抗核酸酶的作用，避免了ODN在细胞内受各 种核酸酶的快速降解，而反义TNF-α ODN与TNF-α mRNA的亲合性不会降低。
本研究采用针对大鼠TNF-α mRNA包括腺嘌呤(AUG)在内的前6个密码子的翻译起始区的反义T NF-α ODN，采用静脉注射方法，能显著抑制香菇多糖诱导的大鼠单核吞噬细胞系统TNF-α mRNA的表达，降低了MODS大鼠TNF-α的释放，提高了MODS大鼠的生存率。本研究结果说明， 反义TNF-α ODN对降低MODS死亡率有潜在的应用前景，为采用反义技术降低MODS死亡率的早 期临床试验奠定了基础。
, http://www.100md.com
[参考文献]
[1]Baue AE. The horror autotoxicus and multiple organ failure[J].Arch Surg, 1994, 127:1451.
[2]Van der poll. Activation of coagulation after adminsteration of tumor necrosis factor to nomal subjects[J]. N Engl J Med, 1990, 322:1622-16 27.
[3]王申五.基因诊断技术-非放射性操作手册[M].北京医科大学中国协和医 科大学联合出版社，1992.39(46)：109-111.
[4]Avery BN, John CM. Sepsis, SIRS, and MODS: what is in a name[J]?Wo rld Surg, 1996, 20:386-391.
, http://www.100md.com
[5]Roger CB.Immunologic dissonance:a continuing evolution in our unders tanding of the systemic inflammatory response syndrome(SIRS) and multiple organ dysfunction syndrome(MODS)[J].Ann Intern Med, 1996,125:680-687.
[6]Von Asmuth EJU, Maessen JG, Van Der Linden CJ, et al. Tumor necrosis factor alpha and interleulin-6 in a zymosan-induced shock model[J].Scand J I mmunol, 1990, 32:313-8.
[7]Cooney M, Czernuszewicc G, Postel GK, et al. Site-specific oligonucl eotide binding represses transcription of the human c-myc gene in vitro[J]. Sc ience, 1988, 241:456-459.
, http://www.100md.com
[8]Boiziau C, Thuong NT, Toulme JJ. Mechanism of the inhibition of reve rse transcription by antisense oligonucleotides[J].Proc Natl Acad Sci USA, 19 92,89:768.
[9]Dash P, Lotan I, Knapp M,et al.Selective elimination of mRNA in vivo :complementary oligodeoxynucleotides promote RNA degeradation by Rnase H-like ac tivity[J].Proc Natl Acad Sci USA, 1987,84:7896.
[10]Ding MZ, Zhang M, Joyce L, et al. Cuttin edge:antisense knockdown o f inducible nitric oxide synthase inhibites induction of experiment autoimmune encephalomyelitis in SJL/J mice[J].J Immunol, 1998,160:2560-2564.
[收稿：2000-03-27，修回：2000-09-18], 百拇医药
单位：卢应民 关开泮(中山医科大学附属第一医院急诊科，广州 510080)；荆小莉 王东平(中山医科大学附属第一医院急诊科，广州 510080)
关键词：反义寡脱氧核苷酸；肿瘤坏死因子-α；多器官功能不全综合征
中国急救医学001202 [摘 要]目的 观察反义肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fa ctor-alpha, TNF-α)寡脱氧核苷酸对酵母多糖A(zymosan A)诱导的多器官功能不全综合征( multiple organ dysfunction syndrome, MODS)大鼠的影响，探讨MODS的发病机制，为采用 反义技术降低MODS死亡率的早期临床试验提供实验依据。方法 采 用静脉注射方法，使反义TNF-α寡脱氧核苷酸(ODN)作用于zymosan A诱导的MODS大鼠：①采 用RT-PCR，ELISA检测大鼠肝TNF-α的mRNA和蛋白质的表达水平；②观察大鼠在不同时期的 死亡率；③在zymosan A诱导大鼠MODS 24小时后采集股动脉血进行血气分析，采集外周血进 行血清生化检测，并进行统计学分析。结果 反义TNF-α ODN降低 了zymosan A诱导的MODS大鼠的TNF-α的释放，降低了MODS大鼠的死亡率，而正义TNF-α OD N和错配TNF-α ODN与对照组相比，对TNF-α的释放无影响，未能降低MODS大鼠的死亡率。 结论 反义TNF-α ODN以序列特异性方式抑制了zymosan A诱导的MO DS大鼠的TNF-α的释放，降低了MODS大鼠的死亡率。
, 百拇医药
[中图分类号]R 442.8 [文献标识码]A [文章编号]1002-1949(2000)12-0694-03
Antisense TNF-α oligodeoxynucleotide decreases mortality in multiple organ dysf unction syndrome mice
LU Ying-min
(Department of Internal Medicine, Puning Overseas Chi nese Hospital,Guangzhou 515300;)
JING Xiao-li WANG Dong-ping
(Emergency Department, the First Affialiate d Hospital of Sun yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510080, China)
, 百拇医药
[Abstract]Objective To evaluate the effect of antisense phosphrothioate tumor necrosis factor-alhpa(TNF-α) oligodeoxynucleotide(ODN) o n mortality in multiple organ dysfunction syndrome(MODS) rat induced by zymosan A . The investigation provides the basis for the early clinical trials assessing t he therapeutic potential of antisense TNF-α approach for decreasing death rate in MODS.Methods MODS rat model was induced by intraperitone al injection zymosan A. Rat antisense TNF-α ODN was applied to the reticular-e nd otheial system in MODS SD rat RT-PCR was used to detect rat liver TNF-α mRNA. p H,PaCOa and PaO2 from artarial blood and LDH, ALT, Cr and TNF-α from venous blood were monitored after zymosan A induced MODS.Results The antisense TNF-α ODN can suppress release of TNF-α and reduce mortality in MODS rat induced by zymosan A, but sense or mismatched TNF-α ODN can′t.Conclusions The results suggest antisense TNF-α ODN significant ly suppressed production of TNF-α in MODS. The investigation provides the basis for the early clinical trials assessing the therapeutic potential of antisense TNF-α approach for decreasing death rate in MODS.
, 百拇医药
[Key words] Oligodeoxynucleotides; Antisense technology; Tumor nec rosis factor-alpha; Multiple organ dysfunction syndrome
多器官功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)发病急，进展快， 死亡率高达40%～60%[1]，是目前危重病医学研究的重要课题之一。肿瘤坏死因子 -α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)在MODS中处于起动和轴心的位置，对MODS的病 情发展起着重要作用[2]。本研究采用TNF-α mRNA包括腺嘌呤(AUG)在内的前6 个密码子的翻译起始区的反义TNF-α ODN，通过静脉注射方法，观察反义TNF-α寡脱氧核苷 酸对zymosan A诱导的MODS大鼠的影响。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料 TNF-α ODN：中国科学院上海生物工程研究中心合成；ODN的5′和3′端各3个 磷 酸二酯键经过硫代磷酸修饰。正义TNF-α ODN：5′ atg agc aca gaa agc atg 3′；反义T NF-α ODN：5′ cat gct ttc tgt gct cat 3′；错配TNF-α ODN：5′ cat tct gtc cgt gtt atc 3′。DOTAP：Boehringer Marmnnheim； zymosan A:Sigma； RT-PCR kit:Promega ； Rat TNF-α ELISA kit:深圳晶美公司；SD大鼠：中山医科大学实验动物中心。
1.2 方法
1.2.1 实验分组 SD大鼠，雌雄各半，体重250～300 g，随机分成4个组，造MODS大鼠模 型前6小时静脉注射下列药物：对照组，生理盐水200 μl；正义TNF-α ODN组，生理盐水20 0 μl含正义TNF-α ODN 4 mg/kg；反义TNF-α ODN组，生理盐水200 μl含反义TNF-α ODN 0.4 mg/kg；错配TNF-α ODN组，生理盐水200 μl含错配TNF-α ODN 0.4 mg/kg。每组 各20只 ，取6只观察各指标的变化，另14只用于观察死亡率的变化。
, 百拇医药
1.2.2 MODS大鼠模型的制备 按1.0 mg/kg体重腹腔注射酵母多糖-液体石蜡混悬液(100 mg/ml)，注射后轻揉腹壁片剂。
1.2.3 观察项目和方法 ①观察一般情况和各组动物在不同时期的死亡率；②于造模后2 4小时在苯巴比妥钠(40 mg/kg ip)麻醉下采集股动脉血进行血气分析(pH、PaCO2、PaO2 )，采集外周血进行血清生化(LDH、ALT、Cr)和TNF-α检查；③造模后24小时处按文献[2] 提取大鼠肝脏总RNA，按RT-PCR Kit提供的方法进行RT-PCR。反转录后PCR所用的引物 如下述。上游引物：5′-TCG GTG TCA ACG GAT TTG GC-3′，下游引物：5′-CTC GTG GTT CAC ACC CTT CAC-3′，产物398 bp。Denaturation 93℃×1 min，Annealing 50℃×1 min ，extension 72℃×2 min，35 cycles,final extension 72℃×5 min。以一对引物(Sens e, 5′-CAT AGA CAA GAT GCT GAA GG-3′, Anti-sense 5′-GAC AAT CTT GAG GGA GTT GT C 3′，产物445 bp)，扩增大鼠看家基因GAPDH的mRNA为阳性内参照，方法同上。
, 百拇医药
1.2.4 资料统计 实验数据用
±s表示。采用计算机医用统计程序( SPSS/PC)对数据进行F及q检验。2 结果
2.1 TNF-α ODN对大鼠生存率的影响
与对照组相比反义TNF-α ODN能显著降低LPS诱导的MODS大鼠死亡率，正义、错配TNF-α OD N组与对照组相比，差异无显著性(见图1)。
图1 反义TNF-αODN降低酵母多糖A诱导的MODS大鼠死亡率
对4组SD大鼠腹腔内注射酵母多糖A(mg/g)，大腹腔注射前6小时分别静脉注射生理盐水200μl(—◆—);
, 百拇医药
生理盐水200μl含正义TNF-αODN(0.4mg/kg—■—)；生理盐水200μl含反义TNF-αODN
(0.4mg/kg—▲—)；生理盐水200μl含错配TNF-αODN(0.4mg/kg—×—)。随后7天内观察大鼠死亡率
2.2 各组血气分析、TNF-α和重要器官功能的改变 反义TNF-α ODN能降低MODS大鼠各脏 器的损害程度，抑制MODS大鼠TNF-α的释放，但对TNF-α的基础释放无影响(见附表)。附表 各组血气分析和生化指标改变(
±s) GrouppH
PaO2(kPa)
PaCO2( kPa)
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LDH(U/L)
ALT(U/L)
Cr(μmol/L)
TNF-α(mg/ml)
Control(n=6)
7.36±0.058
7.30±2.16
6 .51±0.48
923±72.33
44.58±5.24
30.11±7.90
, 百拇医药 4.52±0.63
sense(n=6)
7.30±0.078
7.79±1.91
6.72±0.79
1031±87 .46
48.69±6.19
33.27±7.12
4.36±0.45
antisense(n=6)
7.40±0.032
, 百拇医药 9.22±2.67
5.89±0.61
150.55 ±26.67
35.02±4.04
22.42±2.08
3.37±0.46
mismatch(n=6)
7.19±0.066
7.80±2.86
6.70±0.54
994±92 .72
, 百拇医药 46.75±5.53
34.11±7.62
4.55±0.58
2.3 反义TNF-α ODN对MODS大鼠单核吞噬细胞系统TNF-α mRNA表达的影响
与对照组、正义、错配TNF-α ODN组相比，反义TNF-α ODN能显著抑制zymosan A诱导大鼠 单核吞噬细胞系统TNF-α mRNA的表达(见图2)。
图2 酵母多糖A诱导的MODS大鼠肝脏TNF-αmRNA
道2，3，4，5分别为反义，错配，正义TNF-αODN和对照组。每道电泳各加入5ml，TNF-αmRNA
, 百拇医药
RT-PCR产物(398bp)。大鼠GAPDHmRNA RT-PCR产物用于上样的内参照。道1为PCR Marker。
可明显看到反义TNF-αODN对MODS大鼠TNF αmRNA的抑制作用。
3 讨论
大量研究表明[4，5]，无论是感染或非感染病因，都通过炎症介质和细胞因子过度 释放，即全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)而引起M ODS。SIRS是MODS发生的基础，失控的SIRS最终导致多器官衰竭(multiple organ failure， MOF)，MOF是MODS的晚期最终结局。限制失控的炎症的发展可能降低MOF的发生率。众多实验 证实，TNF-α在SIRS中起启动和轴心作用：①给人注射内毒素后，TNF增高及峰值出现时间 都比IL-1、IL-6早得多；②给人注射TNF或内毒素，引起相似的代谢反应；给TNF能出现与创 伤后相似反应，TNF能介导急性期蛋白合成，诱生其他细胞因子、生长因子、内分泌激素以 及花生四烯酸产物；③给予抗TNF单体能提高注射致死量细菌的动物的存活率，并减少其IL- 1和IL-6升高的程度。因此，降低TNF的过高水平有可能降低MODS的死亡率。
, 百拇医药
反义ODN不论在体内和体外能选择性地抑制靶mRNA翻译成功能性蛋白质在于它能于序列特异 性的方式抑制基因的表达[7]，反义ODN极有可能成为治疗众多疾病的新方法。已有 实验证实，与某一特定mRNA互补的ODN，能通过受体介导的胞饮作用进入细胞，阻断核糖体 的移位[8]，或通过Rnase H介导的消化降解mRNA，从而阻断蛋白质的翻译[9 ]。因此，采用设计恰当的反义ODN能明显降低细胞因子的生成[10]。
我们设计的反义TNF-α ODN所针对的靶序列是大鼠TNF-α mRNA翻译起始区的前5个密码子， 本研究对ODN两端进行了硫代磷酸修饰，它能起抵抗核酸酶的作用，避免了ODN在细胞内受各 种核酸酶的快速降解，而反义TNF-α ODN与TNF-α mRNA的亲合性不会降低。
本研究采用针对大鼠TNF-α mRNA包括腺嘌呤(AUG)在内的前6个密码子的翻译起始区的反义T NF-α ODN，采用静脉注射方法，能显著抑制香菇多糖诱导的大鼠单核吞噬细胞系统TNF-α mRNA的表达，降低了MODS大鼠TNF-α的释放，提高了MODS大鼠的生存率。本研究结果说明， 反义TNF-α ODN对降低MODS死亡率有潜在的应用前景，为采用反义技术降低MODS死亡率的早 期临床试验奠定了基础。
, http://www.100md.com
[参考文献]
[1]Baue AE. The horror autotoxicus and multiple organ failure[J].Arch Surg, 1994, 127:1451.
[2]Van der poll. Activation of coagulation after adminsteration of tumor necrosis factor to nomal subjects[J]. N Engl J Med, 1990, 322:1622-16 27.
[3]王申五.基因诊断技术-非放射性操作手册[M].北京医科大学中国协和医 科大学联合出版社，1992.39(46)：109-111.
[4]Avery BN, John CM. Sepsis, SIRS, and MODS: what is in a name[J]?Wo rld Surg, 1996, 20:386-391.
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[收稿：2000-03-27，修回：2000-09-18], 百拇医药