逆转录-聚合酶链反应及放射免疫法对5 785例献血员丙型肝炎病毒RNA复检分析
丁九立；张昌秋；白天旭(150036 哈尔滨；黑龙江省医学放射免疫检测中心)；刘江莹(黑龙江省医院检验科) 丁九立；刘江莹；张昌秋；白天旭
关键词：逆转录-聚合酶链反应；放射免疫法；献血员；丙型肝炎病毒
摘要：检验医学网上资源库
我国职业献血员尤其是单采血浆还输红细胞的献血员(单采浆血员)，丙型肝炎病毒(HCV)的感染率高达30%[1]。我中心收集自1995年8月～1997年5月，市中心血站送我院经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)均为阴性的待输血及血浆标本5 785份，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及放射免疫法(RIA)进行复检，现将检测结果报告如下。
对象与方法
一、对象
, 百拇医药
从1995年8月～1997年5月，收集我院待输全血及血浆5 785份，其中全血3 672份，血浆2 113份，全部由市中心血站提供。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗-HCV均为阴性。
二、检测方法
(一) 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测5 785份待输血(浆)HCV RNA。仪器由美国Perkin-Elimer公司提供的PE480型DNA扩增仪，试剂由上海复旦大学复生生物工程研究所提供，操作严格按照说明书进行。扩增电泳后，若是40 bp处出现一橙黄色条带则判定标本为HCV RNA阳性。
(二) RIA法随机抽检800份待输血浆。仪器由合肥众成机电技术公司研制的DFM-96型14探头γ计数器，试剂由3V诊断技术公司提供，实验器皿一次性使用。试剂盒质量判定PCX/NCX>5时，质量合格，标本测定x/NCX>3.1时，标本判为阳性。
, 百拇医药
结果
一、RT-PCR检测5 785例献血员结果
见表1。
表1 RT-PCR检测5 785例献血员HCV RNA结果
日 期 HCV RNA
全 血 血 浆
检测 例数 阳性例数 百分比(%) 检测例数 阳性例数 百分比(%)
1995年8～12月 781 6 0.77 686 11 1.60
1996年1～5月 720 15 2.08 494 6 1.21
1996年6～12月 1 365 61 4.47 589 11 1.87
, 百拇医药
1997年1～5月 806 47 5.83 344 11 3.20
由表1可见，随丙型肝炎的流行和时间的推移，携带HCV的献血者(绝大多数是职业献血员)也日见增多，在所统计的近2年中我院待输血(浆)HCV RNA阳性率增长明显，全血由0.77%增长至5.83%，血浆由1.21%增长至3.20%。
二、RT-PCR、RIA、ELISA三种方法检测结果对比
我们随机抽检了800份血浆，用RIA法进行抗-HCV检测，再与RT-PCR及ELISA法检测结果相比较。RT-PCR法共检出13例阳性标本，RIA法检出22例阳性标本，而ELISA法未检出阳性标本。由此可看出，RIA法检测的阳性例数虽比RT-PCR法检测的略高，但差异无显著性(P>0.05)，RIA法检测x/NCX值>3.1而<5时，易出现HCV RNA阳性，RT-PCR检测HCV RNA阳性时，RIA检测抗-HCV同样也为阳性，800例血浆无1例漏检，而用ELISA法检测800例血浆抗-HCV全部为阴性，22例携带HCV的血浆漏检。
, http://www.100md.com
讨论
目前筛选献血员HCV感染最常用的方法是ELISA法检测抗-HCV，但这种检测方法存在一定的漏检率，临床上也常见因输入ELISA法检测阴性血而导致受血者感染上丙型肝炎。文献报道[2～4]多次受血及接受不同献血员血液制品的患者，如血友病病人，抗-HCV阳性率可达59.0%～90.0%，在英国高达85.0%。现检测抗-HCV多用的是第二代复合抗原酶联免疫试剂(ELISA-2)，检测的敏感性及特异性都较第一代酶免疫试剂略高，当ELISA-2检测的S/C比值>5时，91.0%被RIBA-2(重组免疫印迹试验)证实，82%为HCV RNA阳性，但人体感染HCV后抗体产生较晚，因此抗-HCV检测不能用于早期诊断，也不能对传染和病毒复制情况作出早期判断。综上所述，用抗体检测技术筛选抗-HCV不能完全杜绝携带HCV的献血员。国外在对肝炎患者的HCV RNA检测研究中亦曾有类似的发现[5]。RT-PCR法检测技术可直接从血清(浆)中检测HCV的核酸，具有早期诊断，特异性强和敏感性高等特点，是筛选献血员是否携带HCV最可靠的方法。我们用RT-PCR法检测的同时，又用RIA法随机抽检了800份血浆，结果表明RIA法与RT-PCR法检测有较好的相关性。RIA法操作简单，γ计数值稳定，试剂盒价格也可被各血站接受，不失为一种很好的筛选HCV的方法。
, 百拇医药
我国因输入被HCV感染的全血或血浆所导致的丙型肝炎患者逐渐增多，由表1可见，在不到二年的时间里，我院待输血(浆)HCV的阳性率由0.77%增长到5.83%，究其原因就在于检测手段落后。RT-PCR法是检测HCV的首选方法，但试剂盒价格较昂贵，操作较繁琐，且容易产生污染出现假阳性，不适合献血员的大量筛选；RIA法操作简单，试剂盒价格合理，敏感性较高。我们建议，用RIA法取代ELISA法来筛选献血员，可疑者再用RT-PCR法复检，避免漏检，从而保障受血者的安全，减少医院院内的交叉感染。
作者单位：丁九立(150036 哈尔滨，黑龙江省医学放射免疫检测中心)
张昌秋(150036 哈尔滨，黑龙江省医学放射免疫检测中心)
白天旭(150036 哈尔滨，黑龙江省医学放射免疫检测中心)
刘江莹(黑龙江省医院检验科)
, 百拇医药
参考文献
1，唐时幸.河北省固定县北斜村HCV感染者三年随访研究.中华流行病学杂志，1996，17：145-147.
2，杜国有.广西百色地区肝病患者及受血者HCV感染现状调查.中华流行病学杂志，1994，15：278-281.
3，蔺淑梅.丙型肝炎病毒感染标志检测临床意义的研究现状.国外医学微生物学分册.1994，17：102-104.
4，陈莹.丙型肝炎病毒的结构，检测及献血者丙型肝炎病毒检测的意义.国外医学输血及血液学分册，1994，17：360-363.
5，李方和，郭林生，喻植群，等.全血与血液制品中HCV RNA检测及其基因分型的初步研究.中华微生物学和免疫学杂志，1994，14：246-248., 百拇医药
关键词：逆转录-聚合酶链反应；放射免疫法；献血员；丙型肝炎病毒
摘要：检验医学网上资源库
我国职业献血员尤其是单采血浆还输红细胞的献血员(单采浆血员)，丙型肝炎病毒(HCV)的感染率高达30%[1]。我中心收集自1995年8月～1997年5月，市中心血站送我院经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)均为阴性的待输血及血浆标本5 785份，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及放射免疫法(RIA)进行复检，现将检测结果报告如下。
对象与方法
一、对象
, 百拇医药
从1995年8月～1997年5月，收集我院待输全血及血浆5 785份，其中全血3 672份，血浆2 113份，全部由市中心血站提供。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗-HCV均为阴性。
二、检测方法
(一) 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测5 785份待输血(浆)HCV RNA。仪器由美国Perkin-Elimer公司提供的PE480型DNA扩增仪，试剂由上海复旦大学复生生物工程研究所提供，操作严格按照说明书进行。扩增电泳后，若是40 bp处出现一橙黄色条带则判定标本为HCV RNA阳性。
(二) RIA法随机抽检800份待输血浆。仪器由合肥众成机电技术公司研制的DFM-96型14探头γ计数器，试剂由3V诊断技术公司提供，实验器皿一次性使用。试剂盒质量判定PCX/NCX>5时，质量合格，标本测定x/NCX>3.1时，标本判为阳性。
, 百拇医药
结果
一、RT-PCR检测5 785例献血员结果
见表1。
表1 RT-PCR检测5 785例献血员HCV RNA结果
日 期 HCV RNA
全 血 血 浆
检测 例数 阳性例数 百分比(%) 检测例数 阳性例数 百分比(%)
1995年8～12月 781 6 0.77 686 11 1.60
1996年1～5月 720 15 2.08 494 6 1.21
1996年6～12月 1 365 61 4.47 589 11 1.87
, 百拇医药
1997年1～5月 806 47 5.83 344 11 3.20
由表1可见，随丙型肝炎的流行和时间的推移，携带HCV的献血者(绝大多数是职业献血员)也日见增多，在所统计的近2年中我院待输血(浆)HCV RNA阳性率增长明显，全血由0.77%增长至5.83%，血浆由1.21%增长至3.20%。
二、RT-PCR、RIA、ELISA三种方法检测结果对比
我们随机抽检了800份血浆，用RIA法进行抗-HCV检测，再与RT-PCR及ELISA法检测结果相比较。RT-PCR法共检出13例阳性标本，RIA法检出22例阳性标本，而ELISA法未检出阳性标本。由此可看出，RIA法检测的阳性例数虽比RT-PCR法检测的略高，但差异无显著性(P>0.05)，RIA法检测x/NCX值>3.1而<5时，易出现HCV RNA阳性，RT-PCR检测HCV RNA阳性时，RIA检测抗-HCV同样也为阳性，800例血浆无1例漏检，而用ELISA法检测800例血浆抗-HCV全部为阴性，22例携带HCV的血浆漏检。
, http://www.100md.com
讨论
目前筛选献血员HCV感染最常用的方法是ELISA法检测抗-HCV，但这种检测方法存在一定的漏检率，临床上也常见因输入ELISA法检测阴性血而导致受血者感染上丙型肝炎。文献报道[2～4]多次受血及接受不同献血员血液制品的患者，如血友病病人，抗-HCV阳性率可达59.0%～90.0%，在英国高达85.0%。现检测抗-HCV多用的是第二代复合抗原酶联免疫试剂(ELISA-2)，检测的敏感性及特异性都较第一代酶免疫试剂略高，当ELISA-2检测的S/C比值>5时，91.0%被RIBA-2(重组免疫印迹试验)证实，82%为HCV RNA阳性，但人体感染HCV后抗体产生较晚，因此抗-HCV检测不能用于早期诊断，也不能对传染和病毒复制情况作出早期判断。综上所述，用抗体检测技术筛选抗-HCV不能完全杜绝携带HCV的献血员。国外在对肝炎患者的HCV RNA检测研究中亦曾有类似的发现[5]。RT-PCR法检测技术可直接从血清(浆)中检测HCV的核酸，具有早期诊断，特异性强和敏感性高等特点，是筛选献血员是否携带HCV最可靠的方法。我们用RT-PCR法检测的同时，又用RIA法随机抽检了800份血浆，结果表明RIA法与RT-PCR法检测有较好的相关性。RIA法操作简单，γ计数值稳定，试剂盒价格也可被各血站接受，不失为一种很好的筛选HCV的方法。
, 百拇医药
我国因输入被HCV感染的全血或血浆所导致的丙型肝炎患者逐渐增多，由表1可见，在不到二年的时间里，我院待输血(浆)HCV的阳性率由0.77%增长到5.83%，究其原因就在于检测手段落后。RT-PCR法是检测HCV的首选方法，但试剂盒价格较昂贵，操作较繁琐，且容易产生污染出现假阳性，不适合献血员的大量筛选；RIA法操作简单，试剂盒价格合理，敏感性较高。我们建议，用RIA法取代ELISA法来筛选献血员，可疑者再用RT-PCR法复检，避免漏检，从而保障受血者的安全，减少医院院内的交叉感染。
作者单位：丁九立(150036 哈尔滨，黑龙江省医学放射免疫检测中心)
张昌秋(150036 哈尔滨，黑龙江省医学放射免疫检测中心)
白天旭(150036 哈尔滨，黑龙江省医学放射免疫检测中心)
刘江莹(黑龙江省医院检验科)
, 百拇医药
参考文献
1，唐时幸.河北省固定县北斜村HCV感染者三年随访研究.中华流行病学杂志，1996，17：145-147.
2，杜国有.广西百色地区肝病患者及受血者HCV感染现状调查.中华流行病学杂志，1994，15：278-281.
3，蔺淑梅.丙型肝炎病毒感染标志检测临床意义的研究现状.国外医学微生物学分册.1994，17：102-104.
4，陈莹.丙型肝炎病毒的结构，检测及献血者丙型肝炎病毒检测的意义.国外医学输血及血液学分册，1994，17：360-363.
5，李方和，郭林生，喻植群，等.全血与血液制品中HCV RNA检测及其基因分型的初步研究.中华微生物学和免疫学杂志，1994，14：246-248., 百拇医药