应用RD-PCR技术制备HIV基因芯片探针
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第一军医大学分子生物学研究所；广州总医院分子肿瘤学研究所 广州510515 李凌；马文丽；祝骥；朱利娜；宋艳
参见附件(167kb)。
第一军医大学分子生物学研究所；广州总医院分子肿瘤学研究所 广州510515 李凌；马文丽；祝骥；朱利娜；宋艳斌；吴清华；郭秋野；郑文岭
关键词：RD-PCR；HIV；DNA芯片
摘要：利用限制性显示 (RD PCR)技术快速分离HIV 1基因片段制备DNA芯片探针 .以Sau3AⅠ酶切HIV基因 ,得到许多大小适合芯片的限制性酶切片段 .然后在片段两端接上接头 ,根据酶切位点、接头的序列设计通用引物 .在该通用引物的 3′端分别延伸一个碱基后 ,通过引物间的两两组合 ,将PCR反应分成 10个亚组 .纯化各组PCR产物 ,克隆到T载体上 .阳性克隆经鉴定、扩大培养后提取质粒 .以质粒为模板扩增靶片段并进行序列分析 .每个亚型得到了十几个 10 0～ 10 0 0bp的HIV基因片段 .研究表明 ,RD PCR技术是一种有效的快速制备基因芯片探针的方法。
第一军医大学分子生物学研究所；广州总医院分子肿瘤学研究所 广州510515 李凌；马文丽；祝骥；朱利娜；宋艳斌；吴清华；郭秋野；郑文岭
关键词：RD-PCR；HIV；DNA芯片
摘要：利用限制性显示 (RD PCR)技术快速分离HIV 1基因片段制备DNA芯片探针 .以Sau3AⅠ酶切HIV基因 ,得到许多大小适合芯片的限制性酶切片段 .然后在片段两端接上接头 ,根据酶切位点、接头的序列设计通用引物 .在该通用引物的 3′端分别延伸一个碱基后 ,通过引物间的两两组合 ,将PCR反应分成 10个亚组 .纯化各组PCR产物 ,克隆到T载体上 .阳性克隆经鉴定、扩大培养后提取质粒 .以质粒为模板扩增靶片段并进行序列分析 .每个亚型得到了十几个 10 0～ 10 0 0bp的HIV基因片段 .研究表明 ,RD PCR技术是一种有效的快速制备基因芯片探针的方法。
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